奶牛SCAP基因的克隆,表达定位及对FASN基因启动子的转录调控

固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(srebpcieavage activating protein,SCAP)是细胞脂肪合成酶的表达调控因子。本研究旨在肝脏L02细胞中研究SCAP对FASN基因启动子的转录调控作用,有助于进一步明确SCAP/SREBP1对于靶基因的转录调控机制。本研究以荷斯坦奶牛组织c DNA为模板,克隆SCAP基因的编码序列,构建pc DNA3.1-SCAP表达载体,将SCAP表达载体转染L02肝脏细胞,采用荧光定量PCR检测SCAP基因m RNA在24 h、48 h、72 h的表达情况;采用免疫荧光的方法对SCAP标记,激光共聚焦观察SCAP蛋白的亚细胞定位;构建FASN基因启动子载体,转染至肝脏细胞,并分别转染pc DNA3.1-SREBP1和pc DNA3.1-SCAP作为处理,荧光素酶报告基因系统分析对FASN启动子活性的影响。结果发现克隆得到SCAP的PCR产物为3 836 bp的片段,通过与pc DNA3.1载体重组后获得pc DNA3.1-SCAP表达载体,经酶切和测序鉴定正确;将pc DNA3.1-SCAP载体转染肝脏细胞培养24 h、48 h、72 h后,Real-time PCR检测发现与对照组相比,48 h时细胞中SCAP基因m RNA的表达倍数增加了21倍(p0.001);激光共聚焦观察发现,DAPI染色的细胞核呈蓝色,免疫荧光标记的SCAP呈红色,二者融合后发现SCAP定位于细胞质;启动子活性检测发现,与对照组相比,SREBP1质粒处理的细胞FASN启动子活性增加了4.1倍(p0.001),而SCAP和SREBP1共同处理细胞FASN启动子活性极显著增加了7.4倍(p0.000 1)。试验克隆构建奶牛SCAP基因表达载体,亚细胞定位SCAP蛋白主要位于肝脏细胞质中,表明SCAP可以通过结合SREBP1促进FASN基因启动子的转录。     

微波快速免疫荧光组化染色方法的研究

本文应用微波辐射方法加速免疫荧光组化染色(间接和直接法),分别定位15种不同组织抗原,并应用连续切片同时用两种不同的孵育方法即微波辐射和常规孵育方法进行比较。结果证明,经微波辐射后免疫荧光组化染色时间大大缩短,背景染色明显好于常规法,阳性率和阳性强度与常规法基本一致。     

插入玉米Ds转座因子的水稻转化群体及其分子分析

转座子标签法是一种利用转座因子插入高等植物基因组中造成基因突变,然后通过分离转座因子插入的旁邻顺序,进而克隆出突变基因的策略。这种策略在高等植物功能基因组学的研究中是十分有用的。为此目的,将玉米的Ds因子及bar基因连接至载体pCAMBIA1300的T-DNA区域中,构建成重组Ti质粒pDsBar1300。pDsBar1300中T-DNA区域中的潮霉素抗性基因可在转化过程中用作水稻转化植株的选择标记。插入在Ds因子中的bar基因可追踪转化后代的Ds因子。pDsBar1300通过根瘤农杆茵介导引入水稻品种中花11号的幼胚组织。从各转化愈伤组织中获得了1400株独立的Ds水稻转化植株。通过PPT抗性检测和PCR分析证明了水稻转化植株中Ds因子的整合。Southernblot分析了转化植株基因组中Ds因子的插入拷贝数,其中单拷贝插入比率约占70％。这些插有Ds因子的水稻转化植株,当引入自主型的Ac因子反式活化Ds因子后,可使Ds因子跳跃到不同位点上,就可得到更多的突变植株。     

水稻Ds插入纯合体的筛选和鉴定

采用Basta抗性鉴定、潮霉素抗性鉴定和PCR检测相结合的方法筛选和鉴定了水稻Ds插入纯合体。在T1代236个转化株系中,有16个株系的全部植株表现出对Basta的敏感,其余220个株系的植株表现出对Basta的抗性。经过3代的纯合筛选,共鉴定出Ds插入纯合体203个．这些Ds插入纯合体可用于构建Ac／Ds系统和对Ds插入突变体进行筛选和鉴定,为水稻功能基因组学研究提供了材料。     

湖口至南京段长江江豚种群现状评估

对湖口至南京段长江江豚的考察资料进行分析。结果表明：1、研究长江江豚不同的生态行为,能提高野外计数的准确性;2、长江江豚大规模集群（10头以上）发生在特定的江段,近年来出现的机率在下降;3、湖口至南京段长江江豚数量为1054头,其中小孤山至湖口段种群密度最高;4、湖口至南京段支流中分布的长江江豚约占该江段种群数量的9.3%。     

细说蝗虫

正蝗虫走进我的视野,源于多年前我看过的一篇关于蝗灾的报道,提及蝗虫遮天蔽日,所到之处寸草不留,这使我在脑海里画了一连串问号:小小的蝗虫怎么会有如此大的破坏力?蝗虫的生存状态是怎样的?蝗灾是怎么形成的?经过多年的跟踪拍摄,我对它们的行为及生     

蛋白酶分泌菌对重金属胁迫的反应

本文研究了Pb、Zn、Cu和Cd对3种蛋白酶产生菌：碱性地衣芽孢杆菌2709(Bacillus licheniformis 2709)、中性枯草杆菌1.398(Bacillus subtilis1.398)和酸性宇佐美曲霉537(Aspergillus usamii 537)生长及其酶活性的影响, 并采用生长抑制皿分析(GIPA)方法针对3种菌株在Pb、Zn、Cu、Cd不同胁迫浓度下的生长量进行打分, 分析其耐性与抗性指标(MTC与MIC)。结果表明4种重金属在超过一定临界浓度后, 对3种菌株的生长和蛋白酶活性均产生了较大的抑制作用。碱性蛋白酶对4种重金属均具有较大的适应性, 其次是中性蛋白酶对Zn和Cd具有一定的适应性, 而酸性蛋白酶对4种重金属均表现出被抑制状态。3种菌株对Pb和Zn耐性与抗性最高(2.0 mmol/L~6.0 mmol/L), 其次是对Cd也具有一定的抗性(0.5 mmol/L~0.75 mmol/L)。     

植物中的一种内源小RNA——ta-siRNA

随着对miRNA和siRNA研究的逐步深入,越来越多的新型小RNA被科学家们所认识和了解。内源ta-siRNA是新近在植物中发现的依赖于miRNA、长度为21个碱基的小RNA,对植物的生长发育过程具有重要的表达调控功能。ta-siRNA的产生需要miRNA的剪切引发,之后通过siRNA途径形成,但产生的ta-siRNA生物学功能上不同于其他siRNA,其作用机制类似于miRNA。文章通过综述ta-siRNA的一些研究进展,对ta-siRNA的形成机制和功能进行简单介绍。     

神经元信息编码的代谢消耗：动作电位与能量效率

人脑是一个高效、可靠的信息处理系统,它主导着个体的认知、情感、意识与行为,这些功能的实现需要不断地消耗代谢能量.大脑的能量需求主要被神经元信息编码所消耗,相应的亚细胞过程包括产生和传导动作电位、维持静息电位以及突触传递.神经元编码信息的主要载体是动作电位序列,它的产生与传导贡献了大脑的大部分代谢消耗.动作电位的能量消耗受离子通道的生物物理特性控制.生物物理特性的细胞特异性和空间异质性使得动作电位对代谢能量的利用效率呈现高度可变性,它为理解神经元代谢消耗的规律、起因与结果带来了挑战.本文首先介绍参与神经元编码的亚细胞过程及它们在大脑和小脑皮层中的代谢消耗,然后详细梳理近年来关于动作电位代谢消耗的研究成果,重点讨论影响其能量效率的生物物理因素和放电形状特性,并归纳总结放电消耗的特点,最后对未来神经元编码的代谢消耗研究进行展望.     

魅舞丽影皇后蝶

蝴蝶以曼妙的舞姿征服了森林里的百花,以艳丽的魅影让自然界里的昆虫自愧不如。蝴蝶属无脊椎动物(昆虫纲鳞翅目),蝴蝶的一生要经过受精卵、幼虫、蛹、成虫四个阶段的成长,属于完全变态动物。目前世界上已知的蝴蝶种类大约有一万七千余种,我国约有