日本根霉IFO5318胞外β-葡萄糖苷酶的纯化及部分特性

采用硫酸铵沉淀及柱层析等步骤纯化了日本根霉IFO5318的β—葡萄糖苷酶,回收率为22％。该酶分子量约为4.0×10~5,由四个相同大小的亚基组成;最适反应温度55℃,最适反应pH5.5;对热较敏感,但能在较大的pH范围内保持稳定。用对硝基苯基—β-D-吡喃葡糖苷为底物,测得的K_m和V_(max)值分别为0.825mg·ml~(-1)和135.4μmol·min~(-1)·mg~(-1)。该酶对纤维二糖的水解能力最强,SDS、Fe³⁺、Hg²⁺等对酶活力有抑制作用。     

广西西北部拉丁期菊石群

描述产于２西北部中三叠统上部兰木组的菊石化石８属１１种,其中包括１新种。通过与欧洲、北美相应时期菊石序列的讨论和对比,建立该区中三叠世拉丁期晚期的两个菊石层－Ｐｒｏｔｒａｃｈｙｃｅｒａｓ－Ｊｏａｎｎｉｔｅｓ层和Ｆｒａｎｋｉｔｅｓ层。     

PCR——四步两段扩增法分离人碱性成纤维细胞生长因子（hbFGF）基因

引物是决定ＰＣＲ结果的关键,本实验中,引物Ⅰ,Ⅱ虽有２６个碱基,但由于其５′端有８个碱基为限制性内切酶的识别序列,所以实际上只有１８个碱基与原始模板互补配对,采用标准的ＰＣＲ方法时不能产生理想结果,经采用ＰＣＲ－四步两段扩增法从人胎盘ｃＤＮＡ文库中分离得到了－４８４ｂｐ的ＤＮＡ片段。通过斑点杂交鉴定,结果表明该ＤＮＡ片段为ｈｂＦＧＦ基因。     

Expression of cytochrome P4502E1 in human liver: Relationship between genotype and phenotype in Chinese

Polymorphic cytochrome P4502E1 (CYP2E1) plays an important role in the metabolic activation of many carcinogens. We have previously shown that the c1/c1 genotype recognized byRsa I in the 5′-regulatory region of theCYP2E1 may be a susceptibility factor for developing esophageal cancer and lung cancer in Chinese. The present study was to investigate the relationship between theRsa I genotype and the expression of CYP2E1 in human livers. A total of 50 liver specimens were genotyped forCYP2E1 and assayed for CYP2E1 protein contents and functional activity by using specific antibody in immunoblot and a probe substrate,p-nitrophenol. A considerable interindividual variation in CYP2E1 protein (20-fold) and functional activity (56-fold) was observed among these liver samples. However, when they were categorized according to genotype, the mean content of CYP2E1 protein was significantly higher among individuals with the c1/c1 genotype than that among those having c1/c2 or c2/c2 genotype [124.0±83.9 pmol/mg (n = 28) versus 65.5 ±38.9 pmol/mg (n = 22),P<0.01]. The mean activity of CYP2E1 towardsp-nitrophenol for the c1/c1 genotype was also higher than that for the variant genotypes (198.4±27.8 pmol/min/mg versus 101.2 ±18.1 pmol^-1 · min^-1 · mg^-1,P<0.01). Also, the protein levels and functional activity showed a significant correlation (r = 0.68,P<0.01). These results demonstrate an association between theRsa I genotype and the phenotype of CYP2E1 in our samples, and the data are compatible with the assumption thatCYP2E1 c1/c1 genotype is a susceptibility factor for certain cancers in Chinese.     

以单细胞免疫荧光技术观察烟草细胞融合过程中微管骨架的变化

本文建立了单细胞免疫荧光标记技术并以此结合单对细胞融合技术对细胞融合过程中微管骨架组织形式的动态变化进行了追踪观察。发现在聚乙二醇（PEG）诱导条件下,一旦细胞开始粘连,细胞内微管骨架便开始解聚。在细胞融合的整个过程中一直维持着这种解聚的状态,直到融合完成,在后续的培养中微管骨架才重新出现。在微管骨架呈解聚状态时融合产物不能完成与另外的细胞融合。实验揭示了细胞的再融合能力可能受细胞本身微管骨架状态的影响。该结果为解释高等植物如何避免多精入卵提供了新的可能性。     

分子伴侣GroE系统能量传递机制的研究

用SwissPDBViewer软件对分子伴侣GroE系统与底物的相互作用进行了模拟 ,结果表明 :GroEL顶端结构域在GroES和靶蛋白结合之后发生了明显的变化 ;GroEL的cis环上有与三磷酸腺苷ATP相结合的位点 ,ATP水解之后形成的ADP与活性中心的残基相结合 ,而这种结合除导致残基Thr30的构型发生了变化之外 ,其它残基的空间位置和构型基本保持不变 ,暗示其它残基在能量传递过程中形成了刚性骨架 ,而与ADP分子磷酸键结合的残基Thr30则是能量传递的力点。     

伴刀豆球蛋白A-糖复合物的模拟分析

主要分析ConA与不同的糖特异性结合时其活性位点构象变化的特征。模拟分析了ConA糖结合活性中心氨基酸残基结构特征,同时对相应残基原子可及性表面进行了计算和分析。结果表明：（1）ConA在和不同的糖结合时,存在不同的结合方式;（2）不管ConA和什么糖结合,主要的作用是由活性中心的Tyr12、Asn14、Asp208和Arg228提供的;（3）无论是结合单糖还是寡糖,活性中心总是与第一个糖环起主要的结合作用。     

重金属增强核因子与水稻金属硫蛋白基因启动子的结合

植物金属硫蛋白(metallothioneins, MT)被认为在植物应答重金属胁迫方面发挥了重要作用,但该基因的转录调控机制目前仍不清楚.我们以前的研究初步鉴定出位于-331/-194的水稻MT基因(ricMT)启动子区对于金属激活ricMT的表达是必需的.为了明确 -331/-194启动子序列在控制ricMT表达中的作用,本课题开展了该序列 与核因子的结合特性研究.从2周龄水稻嫩叶中提取了几乎不含叶绿体污染的细胞核,并制备 了核蛋白用于凝胶阻滞实验,发现核因子能够与-331/-194启动子序列特异 结合.本研究还进一步考察了重金属对核因子结合活性的影响,发现在结合体系中去除重金 属离子,核因子与-331/-194序列的结合能力会丧失,而在结合体系中加入重金属离子, 结合能力则会随着外加的离子浓度提高而增强,证明这种结合确实依赖于重金属.这些证据 结合以前的结果表明,某些金属响应的核因子可能通过结合-331/-194启动子区域来调控 ricMT基因表达.     

日本在其强项学科糖链方面建立全国研究体制

蛋白质翻译后修饰的主要部分是糖链（糖基化）,成为了后基因组学研究的中心课题。感染、免疫、癌症、神经、发生、分化、再生等均与糖链密切相关。