8种贵州药用植物内生放线菌的分离及多样性研究

【背景】药用植物内生菌能产生多种活性较好的次级代谢产物,是新抗生素发现的重要来源。目前,药用植物内生菌的研究主要集中在内生真菌,内生放线菌研究相对较少,是一个尚未充分开发的新领域。【目的】研究贵州药用植物内生放线菌多样性,以期发现新种放线菌或产新活性物质的放线菌,为微生物药物研究奠定基础。【方法】药用植物样品表面消毒后用粉碎机粉碎,采用9种不同分离培养基分离放线菌;通过提取放线菌基因组DNA,PCR扩增16S rRNA基因序列,测定序列并提交EzBioCloud数据库进行序列比对,构建系统进化树,进行内生放线菌多样性分析。【结果】通过形态特征初步排重,从8种药用植物样品中共分离得到内生菌62株,测定其16S rRNA基因序列,序列比对结果表明其中的57株菌分布于放线菌域的5目8科16属,分别是短小杆菌属(Curtobacterium)、链霉菌属(Streptomyces)、微杆菌属(Microbacterium)、纤维单胞菌属(Cellulomonas)、植物杆菌属(Plantibacter)、原小单孢菌属(Promicromonospora)、动球菌属(Kineococcus)、壤球菌属(Agrococcus)、沼杆菌属(Patulibacter)、气微菌属(Aeromicrobium)、拉贝达氏菌属(Labedella)、叶居菌属(Frondihabitans)、冷杆菌属(Frigoribacterium)、节杆菌属(Arthrobacter)、动孢菌属(Kineosporia)、Amnibacterium属,其中短小杆菌属(Curtobacterium)为优势菌属,菌株M8JJ-5和M2KJ-4的16S rRNA基因序列分别与有效发表菌株AmnibacteriumkyonggienseKSL51201-037T(FJ527819)和Aeromicrobiumfastidiosum DSM10552T (Z78209)的相似性最高,相似性分别为97.29%和98.95%,可能为潜在新物种。【结论】贵州药用植物中蕴藏着多样性丰富的放线菌且具有从中发现新放线菌的潜力,能为新抗生素的发现提供菌种储备,也为今后对该地区放线菌资源的认识和开发利用提供理论依据。     

念珠状链杆菌在小鼠群中的自然感染和发病特征的观察

本文在国内首次报告了念珠状链杆菌在清洁级Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠群中的自然感染,并从临床、病理解剖、病原学及流行病学方面进行了较为详细的观察,在受检的１４例发病动物中,颈部淋巴结肿大、化脓占７１．４％,皮下、肺门淋巴结脓肿分别占５０．０％和２１．４％,多发性关节炎（包括趾、跗关节）占２１．４％,子宫积脓占７．１％,从所有病灶及部分动物的血液、脾、肝、肺、肾均分离到了单一的细菌。该菌在小鼠成功地进行了急性感染实验,受感染动物出现了典型的念珠状链杆菌病的临床及病理特征,即败血症、关节炎、淤血、水肿、紫绀、结膜炎等。所分离的致病菌在病原学上也完全符合念珠状链杆菌的病原学特征。在饲养环境上与发病鼠群有密切关系的其它４个品系小鼠群,即６１５、ＢＡＬＢ／ｃ、ＣＢＡ、ＫＭ,均未波感染,证明在对该菌的易感性方面存在品系差异。     

反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应

将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ｃＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动子下游,构成ＣＤ４４Ｓ的反义ＲＮＡ载体．将其用电击法导入ＣＤ４４＋的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９,转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地抑制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达．ＣＤ４４的表达被抑制后,瘤细胞与透明质酸的结合力下降,细胞的体外生长速率不受影响．将其接种裸鼠皮下,发现其致瘤性明显降低     

水稻几丁质酶基因克隆RCH8的DNA结构分析

用ＤＮＡ外切核酸酶Ⅲ和Ｓ１核酸酶生成连缺失突变体,用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法对该克隆进行双向ＤＮＡ顺序测定,测序全长２０４９个碱基,初步确定了１０５７ｂｐ的５‘端上游顺序,９６６ｂｐ不含内含子的完整编码区和可能的ＴＡＴＡｂｏｘ等。所编码的３２２个氨基酸包括Ｎ－端２０个氨基酸的信号肽,其后４０个氨基酸长度的含８个半胱氨的ｈｅｖｅｉｎｘ结构域和一个催化结构域。     

有氧跑台干预对高龄小鼠心血管疾病危险因子影响研究

探讨有氧运动训练是否会增进高龄小鼠的运动生理功能并降低心血管疾病的危险因子。以80周龄大的C57BL/6J与CBA混种品系小鼠12只为实验对象,进行各项生理数值检测后,于小鼠22月龄时,以随机的方式分成运动组(每周5 d;每天50 min跑步机训练;共8周)与对照组,观察小鼠在训练后的各项生理数值变化,包含基础代谢率、最大摄氧量、血压及血液生化值等数据。本研究以SPSS 18.0统计软件为工具,以成对样本T检验分析进行统计分析。与前测比较,运动组小鼠在最大摄氧量、基础代谢率与高密度脂蛋白维持不变,但对照组皆显著下降;运动组血液中甘油三脂降低,但对照组则维持不变;运动组血压维持不变,但对照组却显著上升。8周有氧运动训练可推迟小鼠因老化所引起的基础代谢率与有氧能力衰退,并可通过稳定血压与降低血脂减少罹患心血管疾病的危险因子。     

外源性维生素D对小鼠脑缺血/再灌注神经损伤的保护作用*

目的:观察小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型制备前5 d 连续补充1,25-二羟维生素D₃(1,25-VitD₃)对缓解小鼠缺血/再灌注(I/R)后脑损伤中的作用。方法:雄性C57BL6小鼠随机分为Sham组、Vehicle组和1,25-VitD₃组,每组10只小鼠;Vehicle组和1,25-VitD₃组小鼠均进行大脑MCAO1 h,再灌注24 h后处死小鼠,1,25-VitD₃组MCAO手术前5 d连续腹腔注射,100 ng/(kg·d);取各组小鼠脑缺血半影区,进行TTC染色、RT-PCR及免疫组化检测,采用神经功能评分评估小鼠功能缺陷。结果:与sham组相比,Vehicle组小鼠脑梗死体积明显增加,小鼠脑组织中促炎介质IL-6、IL-1β和Gp91phox表达均明显增高(P＜0.05);与Vehicle组相比,补充1,25-VitD₃可减少I/R小鼠大约50%梗死体积(P＜0.05), 1,25-VitD₃组小鼠脑组织中IL-6、IL-1β和Gp91phox表达明显降低(P＜0.05),小鼠脑内T调节细胞标志物Foxp3 mRNA表达明显升高(P＜0.05),而转录因子Rorc mRNA表达明显较低(P＜0.05),提示Th17/γδT细胞反应减少,小鼠脑损伤部位中性粒细胞数量明显降低(P＜0.05)。结论:维生素D可以缓解动脉闭塞(MCAO)再灌注脑梗死发展,其机制可能是通过调节小鼠脑I/R中炎症反应。     

细裂槭与其近缘种的比较形态学及分类学研究

通过对细裂槭与其近缘种大叶细裂槭、疏毛槭的表型性状及叶片微形态进行比较研究,探讨细裂槭在植物分类学上的地位。结果表明:(1)不同产地细裂槭表型性状变异主要来源于居群内。(2)同一产地细裂槭与其近缘种的一些表型性状存在较大的差异。(3)反映叶片大小和翅果形状指标的平均变异系数相对较大,不能准确反映种间关系,故不支持《中国植物志》、Flora of China以及各类地方植物志中以叶片大小和双翅连接角度作为细裂槭、大叶细裂槭和疏毛槭的主要分类依据。(4)疏毛槭叶上表皮和下表皮均具表皮毛,且生活周期内不脱落,与《中国植物志》和Flora of China对疏毛槭的记载略有不同。依据许炳强提出的植物叶脉序演化关系,细裂槭与大叶细裂槭的叶脉序特征基本一致,而疏毛槭较细裂槭和大叶细裂槭原始,该研究结果支持Flora of China对细裂槭和大叶细裂槭的合并处理,并将细裂槭作为疏毛槭的变种处理。     

检测人血清中肺炎球菌10A型荚膜多糖IgG抗体的包被抗原适用性研究

目的 确定用于23价肺炎多糖疫苗免疫后临床血清样本检测的包被用10A型肺炎球菌荚膜多糖(Pn10A)。方法 根据WHO推荐的检测人血清中肺炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量的ELISA(PnPSELISA),包被不同来源(ATCC、A公司、B公司、5个公司混合)的10A多糖[Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)、Pn10A(mix)],检测38份血清中Pn10AIgG抗体的几何平均浓度(GMC)和相同样本免疫前、后的阳转率(免疫后/免疫前≥2为阳转),确定用于临床血清检测的包被Pn10A。结果 用Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)包被检测38份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9);Pn10A(B)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异有统计学意义(P<0.05),数据一致性差(r<0.8);再以Pn10A(A)、Pn10A(ATCC)、Pn10A(mix)包被检测另46份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9),免疫前、后GMC值相近,阳转率相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)均可以作为包被多糖用于检测人血清中肺炎球菌Pn10AIgG抗体;但从长久使用相同抗原检测大批量临床样本的需求考虑,Pn10A(mix)更具有足量、经济的优势。     

外源无机氮素形态对土壤氨基糖动态的影响

微生物生长对底物的可利用性存在不同的响应,外源氮素的形态可以显著影响微生物代谢过程,而土壤氨基糖作为微生物细胞壁残留物,其形成、分解和周转特征与外源碳氮供给密切相关,对土壤氨基糖的研究与同位素标记技术相结合,可以进一步反映微生物对底物的利用特征.本文以葡萄糖及15N标记的NH4+和NO3-为底物,利用气相色谱-质谱联机技术,通过测定氨基糖中同位素富集比例,跟踪新形成(标记)和原有(非标记)的土壤氨基糖的动态变化.结果表明:在培养过程中,15N标记的氨基糖含量显著增加,NH4+向氨基糖的转化显著高于NO3-,反映出微生物对NH4+的选择性利用.土壤中原有的氨基糖也发生了不同变化.其中,非标记氨基葡萄糖在N H4+为底物时,其含量有所增加,但在NO3-为底物时含量逐渐下降;非标记胞壁酸含量在2个处理中均不断下降,尤其以NO3-为底物时更为显著;非标记氨基半乳糖含量的增减幅度均小于20％.这种特异性变化表明,不同来源的微生物细胞壁残留物对土壤氮素周转和稳定的作用不同,真菌细胞壁残留物易于在土壤中积累,有利于土壤有机质的稳定,而细菌细胞壁残留物容易分解,在土壤有机质周转过程中起重要作用.     

螺旋藻对慢性应激大鼠结肠菌群和体重的影响

目的观察螺旋藻对慢性应激大鼠结肠菌群和体重的保健作用。方法采用SD大鼠慢性应激模型,实验期为7周。用平板计数法检测大鼠肠道菌群。结果慢性应激大鼠粪便中发生明显的以双歧杆菌数量下降为特征的菌群失调现象,进食含5%螺旋藻饲料的大鼠粪便中双歧杆菌数量显著增加,肠杆菌相应减少,体重相应增加。结论在慢性应激条件下,饲喂螺旋藻能够有效维持大鼠肠道微生态平衡,促进大鼠生长。