四种常见猪肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用

【背景】猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)是当前导致猪群发生病毒性腹泻的4种主要病原,并且常发生混合感染。【目的】建立一种可鉴别诊断这4种腹泻病毒病的检测方法,对于临床诊断具有重要意义。【方法】针对PEDV的M蛋白基因、TGEV的N蛋白基因、PDCoV的N蛋白基因和PoRV的VP7蛋白基因分别设计特异性引物,进而构建相应的重组质粒标准品。通过对PCR反应条件优化,建立可同时检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的多重RT-PCR检测方法。随后通过敏感性、特异性和重复性试验对该方法的有效性进行验证。【结果】敏感性试验结果显示,对PEDV-M、TGEV-N、PDCoV-N和PoRV-VP7重组质粒标准品的最低检测下限分别为1.75×10²、1.5×10³、1.6×10²和1.6×10²copies/μL;特异性试验结果显示,仅可检出本研究中的4种靶病毒,而猪群常见病毒CSFV、PRRSV、PCV2和PRV未能检出。重复性试验结果显示,选取10⁸、10⁶和10⁴copies/μL 3个不同浓度的重组质粒作为模板,其他条件不变,分别进行5次重复试验,5次试验均扩增出清晰、均匀的条带。对山东各地区送检的52份临床腹泻样品通过建立的四重RT-PCR方法进行检测,发现PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的阳性率分别为37%(19份)、6%(3份)、10%(5份)和25%(13份)。其中PEDV和PoRV混合感染2份(4%),PEDV和TGEV混合感染2份(4%),PEDV和PDCoV混合感染1份(2%)。通过单重RT-PCR对该多重RT-PCR临床样品检测结果进行重复验证,结果显示多重RT-PCR与常规单重RT-PCR结果符合率为100%。最后随机挑选5个检测为阳性的临床样本进行测序验证,结果均为相应病毒的基因片段。【结论】本研究建立了可同时检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的四重RT-PCR检测方法,研究结果为临床4种猪腹泻病毒病的鉴别诊断及流行病学调查提供了技术手段。     

康复训练联合高压氧对高血压脑出血术后患者脑血管动力学、血管内皮功能和血清NSE、UCH-L1、GFAP的影响

摘要 目的：观察康复训练联合高压氧对高血压脑出血术后患者脑血管动力学、血管内皮功能和血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）、泛素羧基端水解酶（UCH-L1）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的影响。方法：按照随机数字表法将2021年3月~2022年12月我院收治的112例行微创钻孔置管引流术的高血压脑出血术后患者分为对照组（n=56,接受常规康复训练）和观察组（n=56,对照组基础上结合高压氧干预）。对比两组量表评分[日常生活能力量表-改良Barthel指数（MBI）、Fugl-Meyer运动功能评定量表（FMA）、美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）]、脑血管动力学指标[平均血流量（Qmean）、外周阻力（R）、平均血流速度（Vmean）]、血管内皮功能[内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）]、血清NSE 、UCH-L1、GFAP水平以及不良反应发生情况。结果：与对照组干预后相比,观察组MBI、FMA评分更高,NIHSS评分更低（P<0.05）。与对照组干预后相比,观察组Vmean、Qmean更高,R更低（P<0.05）。与对照组干预后相比,观察组NSE、UCH-L1、GFAP更低（P<0.05）。与对照组干预后相比,观察组NO更高,ET-1更低（P<0.05）。两组不良反应发生率对比未见差异（P>0.05）。结论：康复训练联合高压氧干预高血压脑出血术后患者,可有效改善脑血管动力学、血管内皮功能和血清NSE、UCH-L1、GFAP水平,减轻神经功能损伤,提高生活自理能力。     

不同表面处理对全瓷材料表面粗糙度及表面自由能的影响

目的:比较分析三种不同表面处理方法对全瓷材料表面粗糙度及表面自由能的影响。方法:选用两种氧化锆(LAVA Plus,Wieland)和两种玻璃陶瓷(E.max Press,ELDC),按照生产商的制作方法制作成盘状试件(直径13 mm,厚1 mm),并将以上四组全瓷材料按照不同的表面处理方式分别分为以下三个亚组:粗磨组(rough grinding)、抛光组(polishing)和上釉组(glazing)。利用三维形貌扫描仪测量样本表面的面粗糙度(Sa),表面张力仪测量各组样本表面接触角并计算表面自由能。结果:各组材料粗磨组粗糙度值均显著高于其抛光组及上釉组;对于两种氧化锆陶瓷,抛光组与上釉组间粗糙度值无显著差异(P0.05),而对于两种玻璃陶瓷,抛光组的粗糙度值显著低于上釉组(P0.05);上釉组表面自由能均显著高于相应粗磨组及抛光组(P0.05),粗磨组和抛光组间无显著性差异。结论:抛光和上釉均能显著降低全瓷材料的表面粗糙度,对于氧化锆陶瓷,抛光能达到类似上釉的表面粗糙度,对于玻璃陶瓷,抛光能够获得更加光滑的表面。上釉后全瓷材料的表面自由能显著高于抛光组。     

典型黑土区春玉米茎流特征及其环境影响因素

明确典型黑土区春玉米茎流变化规律，探究影响春玉米茎流速率的主控因素，对深入了解该区域春玉米蒸腾耗水特性以及调控田间水分管理具有重要参考价值。本研究采用包裹式茎流计和TDR探针对典型黑土区春玉米灌浆期至成熟期茎流速率及耕层土壤水热状况进行连续监测，并结合试验区自动气象站同步采集数据，分析不同时间尺度下茎流速率与环境因子的相关关系。结果表明：典型黑土区春玉米茎流速率具有明显的昼高夜低变化特征，白天瞬时茎流速率峰值最高可达139.9 g·h^-1,夜间仍有微弱茎流。与晴天相比，阴天、雨天条件下春玉米茎流启动、结束时间以及峰值均受到显著抑制。小时尺度下，太阳辐射、饱和水汽压差、相对湿度、空气温度和风速均与茎流速率呈极显著相关；日尺度下，仅太阳辐射、饱和水汽压差和相对湿度与茎流速率呈极显著相关，相关系数绝对值在0.7以上。由于观测期内土壤含水量较高，本研究中耕层水热状况与茎流速率相关性不高(绝对值均小于0.1)。无水分胁迫条件下，无论小时尺度还是日尺度，太阳辐射、饱和水汽压差以及相对湿度始终是该区域影响春玉米茎流速率的3个主要因素。     

伯克霍尔德氏菌GD17对黄瓜幼苗耐干旱的调节

干旱是影响农业生产的主要因子之一。根际促生菌可有效减轻干旱对植物的伤害，但其中的作用机理仍需探究。以接种Burkholderia sp. GD17菌和未接种的黄瓜幼苗为材料，经干旱处理（撤水7 d）后，分析其生理生化和相关基因表达，以此探究GD17菌促生拮抗的作用机理。结果表明，接菌5 d的植株根中GD17菌数量达到6.2×106 CFU/g鲜重，直至第15天撤水处理时仍维持这一数量级。正常浇水的加菌植株地上部鲜重与干重分别较未加菌对照高39%和36%；在干旱胁迫下，分别高38%和32%，叶片相对含水量高8.5%。干旱胁迫下，加菌叶片丙二醛和电解质渗透率分别较未加菌的低45%和26%。正常浇水的加菌植株叶片超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶活性均显著低于未加菌植株的水平，而在干旱胁迫下，加菌植株的3种抗氧化酶活性明显高于未加菌的。干旱显著提高叶片的脯氨酸含量，其中，加菌植株的幅度更大。正常浇水的加菌植株净光合速率高于未加菌植株，但气孔导度、胞间二氧化碳浓度和蒸腾速率没有明显变化，但在干旱条件下，这些参数在加菌植株中的值显著高于未加菌植株。叶绿素荧光成像进一步显示，接种GD17可有效...     

生命健康研究伦理治理中值得关注的三种基本关系——对《涉及人的生命科学和医学研究伦理审查办法》的思考

<正>生命健康领域的研究事关人类福祉，“伦理先行”是生物医学研究的基本要求。早在1964年，第18届世界医学协会联合大会就通过了生物医学伦理的“基本法”——《赫尔辛基宣言》，明确规定“医学研究必须遵守的伦理标准是：促进和确保对人类受试者的尊重，并保护他们的健康和权利”。2016年，国际医学科学组织理事会(Council for International Organizations of Medical Sciences, CIOMS)发布了《涉及人的健康相关研究的国际伦理准则》(简称“CIOMS伦理准则”)，把伦理规范从医学研究扩大到涉及人的健康相关研究。     

贵州乌江流域传统村落植物多样性与稳定性研究

以贵州乌江流域中下游传统村落植物群落为研究对象，为传统村落植物群落的演替、恢复与保护发展提供科学依据。基于野外实地调查，采用α多样性指数、M.Godron法分别测定其物种多样性、稳定性及相关关系。结果如下：（1）本次调查共记录到植物781种，按植物生活型划分，共有乔木57科112属171种，灌木49科93属189种，草本92科261属407种。（2）植被等级从高到低依次为乔木层、灌木层、草本层；植被群落物种多样性于庭院和宅旁较高，林地和种植区较低；群落整体稳定性于种植区和河道较高，于祭祀区、道路较差。（3）生活空间的物种多样性大于自然生态和生产空间，且3种空间群落稳定性存在显著差异。乌江流域传统村落植物丰富度高，种间和种内竞争大，村落群落演替度低，整体稳定性较差。只有结合传统空间的功能特性，优化植物群落结构数量，进行适度的人为修缮与管理，才能在最大程度满足人民生产、生活需求的情况下，保护传统村落植物群落。     

生命科学研究面临的实验可重复性之危机

<正>“实验结果必须重复”是笔者做学生时就学到的研究工作之基本标准，也是笔者在指导学生做实验时提出的基本要求。但让人没有想到的是，近些年这个基本常识却成为科学共同体高度关注的一个问题。早在2011年，美国著名生物技术公司“Amgen”选择了肿瘤研究领域53篇标志性研究论文进行验证，发现其中仅有6篇论文中的结果可以被重复^[1]。Nature杂志曾对多个国家的数、理、化、生等领域1 576位科研人员进行在线问卷调查，其中52%的受访者认为目前发表的研究论文的“可重复性”(reproducibility)出现了显著的危机，38%的受访者认同这种危机的存在，但认为其程度还不是很严重^[2]。2014年，时任美国国立卫生研究院(National Institutes of Health,NIH)院长的柯林斯(Collins F)和同事以“NIH计划加强可重复性”为题发表了他们的担忧：“临床前研究，尤其是动物实验，看上去就正好是当前对可重复性问题最敏感的领域”^[3]。