豹蛙抗瘤酶的毕赤酵母高效表达、纯化及活性测定

豹蛙抗瘤酶(Onconase,ranpirnase,ONC)对体内外多种肿瘤有很强的杀伤作用,是当前全球重点研究的100种新药之一,为获得高表达与高活性的重组豹蛙抗瘤酶(Recombination onconase,rONC),根据成熟ONC的cDNA序列和毕赤酵母密码子偏好性设计基因并提高其GC含量,分泌信号肽采用酵母α交配因子的pre肽,分别构建表达载体pPIC9/ONC、pPIC9K/ONC和pPICZα-A/ONC,并转染毕赤酵母X-33、GS115和SMD1168,筛选阳性克隆并进行诱导表达。在摇瓶规模筛选最佳载体-宿主组合及优化培养条件之后,进行10 L规模最优培养基的筛选,发酵产物经双水相萃取偶联G50凝胶层析分离纯化。结果表明,pPICZα-A/X-33/ONC组合表达量优于其他组合,且在p H 5.5、23℃条件下诱导7 d,最高表达量达到13 mg/L;在10 L规模条件下,rONC于pH 5.5的低盐基础培养基(Lower basic salt medium,LBSM)、甲醇浓度0.25%条件下诱导7 d,最高表达量为180 mg/L;纯化后的rONC纯度≥95%,收率高于90%;生物活性检测发现,rONC在体外能杀伤多种癌细胞。初步建立了rONC的高效表达与纯化体系,为后续的功能和作用机理研究奠定了一定基础。     

生态保护区外斑块对景观连接度的影响评价

快速的城市化过程带来的生境斑块破碎化及损失会影响物种迁移、捕食等生态活动,对生物多样性构成威胁。然而,现有生态保护区可能无法覆盖其内生物的必要活动范围。生态保护区外的生境斑块对于维持生态过程也具有重要作用,因此识别生态保护区外的关键斑块并加以保护非常重要。以北京市延庆区为研究区,划分两种生境斑块,即核心生境斑块和潜在生境斑块,并基于图论构建生境网络。考虑地表覆盖类型、坡度、人类活动等因素构建生境阻力面。结合未来土地利用类型变化的模拟,研究城市化过程对区域生境网络和景观连接度的影响,选用CLUE-S模型模拟土地利用类型变化的格局。结合生境斑块特征和未来城市土地利用变化情况设计了3种未来生境变化情景。利用连接概率指数(PC)和网络连接度变化率(dI)评价不同生境变化情景下生态保护区外潜在生境斑块的景观连接度重要性,判断保护优先顺序,并分析景观格局变化对不同迁移能力物种的影响。结果表明：生态保护区外的全部潜在生境斑块对维持生境整体景观连接度有最大2.15%的影响,单个潜在生境斑块对维持景观连接度有最大0.28%的影响。此外,景观格局及其变化对不同迁移能力物种的影响差异显著,因此需针对保护物种和城市生境特征设计保护方案,研究区需要优先保护大中型斑块和位于关键位置的小型斑块。为了满足对生物多样性保护的需求,建议在区分生境斑块保护优先顺序时考虑生境斑块对景观连接度的贡献和城市化扩展过程的压力。研究为城市生物多样性保护和生境管理提供了方法参考。     

正选择基因无启动子的供体质粒pN(CDS)(N2)-R的构建及应用

为提高对发生基因编辑细胞的筛选效率,本研究构建了具备正负筛选功能的供体质粒pN(CDS)(N2)-R,其正选择基因是无启动子NeoR,负选择基因是能自主表达的RED。利用该质粒和CRISPR-Cas9系统对小鼠B16细胞FasL进行编辑。G418筛选2周,获得混合克隆。镜下观察显示,混合克隆质量较高。junction PCR结果表明,有基因编辑发生。DNA测序结果表明,NeoR准确插入靶位点。细胞杀伤实验表明,FasL功能被有效敲除。该供体质粒的多克隆位点,充分利用同尾酶酶切位点,因而具有广泛的适用性。综上所述,在对各种位点进行编辑时,使用该供体质粒有助于混和克隆的筛选。     

右美托咪啶对经尿道前列腺电切阴茎勃起的影响*

目的:探究右美托咪定(DEX)对经尿道前列腺电切术(TURP)后阴茎勃起的影响。方法:选取2017年1月至2018年3月于我院确诊为良性前列腺增生并行经TURP的86例患者,按照随机数字表法均分为实验组和对照组,每组43例。其中,实验组于手术初始即使用输液泵持续输注右美托咪定(输注剂量0.5μg/kg)直至手术结束,对照组患者于手术开始时即开始使用输液泵持续输注等量的生理盐水直至手术结束。于麻醉前(T1)、麻醉插管后导尿前(T2)、DEX或生理盐水泵入10 min时(T3)、手术开始后导尿时(T4)四个时间点比较两组患者的平均脉压差(MAP)、心率(HR)、阴茎勃起发生率及术后膀胱刺激征的发生率。结果:T1、T2、T3时刻,两组间HR和MAP水平比较差异无统计学意义(P0.05),T4时,对照组HR和MAP均选择低于实验组,差异具有统计学意义(P0.05);两组患者T1及T2时阴茎勃起率比较差异无统计学意义(P0.05),对照组T3、T4阴茎勃起率分别为27.91%、74.42%,实验组患者T3、T4阴茎勃起率分别为6.98%、11.63%,差异具有统计学意义(P0.05)。实验组术后膀胱刺激征出现率为9.30%,低于对照组的32.56%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:右美托咪定用于TURP术中可以有效稳定患者术中血流动力学,并降低患者术后阴茎异常勃起率,且术后患者膀胱刺激征发生率显著降低。     

地衣芽孢杆菌对家兔体液免疫功能的影响研究

本研究采用地衣芽孢杆菌制成微生态制剂,饲喂断奶后的家兔４０天,再用兔病毒性出血病（ＲＨＤ）组织灭活疫苗免疫,检测家兔产生的血清抗体对ＲＨＤ病毒的特异性血凝抑制价和血清免疫球蛋白的含量。结果,试验组家兔的血清抗体对ＲＨＤ病毒的特异性血凝抗体和血清免疫球蛋白含量均明显高于对照组。表明,地衣芽孢杆菌对家兔的体液免疫功能有促进作用,ＲＨＤ组织灭活疫苗与地衣芽孢杆菌制剂相结合较单独使用疫苗的效果更佳     

滇池可培养好氧反硝化细菌多样性及其脱氮特性

【目的】氮污染已成为当今水体污染的一个重要因素,为了解滇池可培养好氧反硝化细菌的多样性,获得高效好氧反硝化细菌资源,为污染水体或浅层地下水的生物修复提供材料。【方法】采用富集培养方法从滇池沉积物和水体样品中分离好氧反硝化细菌,对好氧反硝化细菌的16S r RNA基因序列进行系统发育分析,并筛选其中的高效好氧反硝化细菌。【结果】分离出260株好氧反硝化菌,经16S rRNA基因序列分析,260株菌分属于2门13科14属的59个种。假单胞菌属(Pseudomonas)为优势细菌属,其次是不动杆菌属(Acinetobacter)、气单胞菌属(Aeromonas)和代尔夫特菌属(Delftia)。筛选到12株高效好氧反硝化细菌菌株,其中8株属于假单胞菌(Pseudomonas spp.),4株为不动杆菌(Acinetobacter spp.)。定量分析发现菌株N15-6-1的反硝化效果较好。对菌株N15-6-1的脱氮条件优化结果显示,在以蔗糖为碳源,温度为30–35℃、C/N=12、静止培养时,反硝化能力较强,其在48 h内硝态氮的去除率达到98.81%,总氮的去除率达96.27%。【结论】滇池存在着较丰富的可培养好氧反硝化细菌,好氧反硝化细菌的分离丰富了好氧反硝化菌的种类,其中的高效脱氮菌株为污染水体或浅层地下水的生物修复提供了初步的候选菌株。     

抗坏血酸在高粘度聚乙烯醇胶体溶液中分散均一性考察

目的:考察了采用实验室常用的磁力搅拌法和改进的机械搅拌法后,聚乙烯醇胶体溶液中抗坏血酸的分布均一度。接着,在机械搅拌法的基础上,研究了抗坏血酸粉末与抗坏血酸溶液在胶中分散的均一性。方法:分散混合方法:机械搅拌法,磁力搅拌法;均一性检验方法:以单位质量胶载药量RSD值作为指标;统计学分析方法:t检验。结果:采用磁力搅拌法不能够较好地混合抗坏血酸与PVA胶体溶液;而机械搅拌法RSD值控制在10%以内,说明胶中抗坏血酸均一分布,符合生产要求。T检验表明两种方法具有显著性差异。药物溶于水后分散更为均一。结论:解决药物在高粘度溶液介质中均匀分散的问题。     

嵌合表皮生长因子疫苗E5T-mSEA的设计及抑瘤活性检测

表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)及其配体在多种肿瘤细胞中高表达,免疫注射表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)-载体蛋白所产生的抗体能够干扰EGFR与EGF的相互作用,进而抑制肿瘤生长。本实验室设计了EGF和TGFα的嵌合配体E5T,并将具有免疫增强作用的葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal enterotoxin A,SEA)与之融合。融合蛋白在大肠杆菌内表达后,通过金属螯合亲和层析,得到了纯度较高的E5T-mSEA融合蛋白。将E5T-mSEA免疫小鼠,能够产生高滴度的抗体,该抗体能够同时识别EGF和TGFα。将抗E5T-mSEA免疫血清与肿瘤细胞共培养,在1:10的稀释度下能显著抑制EGFR阳性肿瘤细胞的生长,而对EGFR阴性肿瘤细胞293T的生长没有明显影响。     

氨基酸注射液在不同疾病人群中的应用

氨基酸作为蛋白质的基本组成单位,为促进生长,进行正常代谢,维持生命活动提供重要的物质基础。而处于疾病状态下的人群,对于氨基酸更是有着特殊的需要,不仅需要从食物中摄取氨基酸,还需要通过静脉给予氨基酸来满足机体的需要甚至达到治疗疾病的目的。本文综述氨基酸注射液在肝脏、肾脏、呼吸道和消化道疾病,以及儿科营养中的应用。     

目标设定：促进糖尿病患者行为改变的方法

目标设定是将患者的自我管理和行为改变意图转换为目标的过程,是一种常见的、行之有效的行为干预策略。本文介绍了目标的种类、目标设定的原则、方法及利用目标设定的方法进行糖尿病教育的效果,分析了目标设定在实际应用中存在的问题,为以后更好地利用目标设定的方法进行糖尿病教育,从而达到改变患者行为的目的提供了理论依据。