利用高保真酶扩增特性调整基因读码框的方法

在基因工程研究中,经常要涉及到对目的基因读码框进行调整的研究。本文报道了利用高保真DNA聚合酶扩增DNA后产生平末端的特性,及限制性内切酶对一重组的原核表达载体pET28a-HA进行读码框调整的研究,测序结果显示读码框按照预期设计正确调整,表明高保真DNA聚合酶可以用于DNA 3'凹陷端的补平,在DNA 3'凹陷端平滑化时多了一个有效的选择。     

红树林耐盐相关基因转化水稻的研究

运用农杆菌介导法将红树林耐盐相关基因mangrin转入粳稻品种‘日本晴’中,通过GUS基因检测愈伤组织转化率,确定农杆菌菌液浓度OD600为0.5,浸染时间30min,共培养时间3d为最佳转化体系;经潮霉菌筛选,获得抗性再生植株。通过PCR扩增检测、Southern blot分析和GUS基因活性检测,结果表明,mangrin基因整合到再生水稻的染色体DNA上。耐盐性测定结果表明,转基因植株在200mmol/L NaCl胁迫下,成活率保持在83.3%,株高增长20%~40%,mangrin基因能提高转基因水稻对盐胁迫的抗性。     

柑桔基因转化新方法的研究

尽管应用基因转化进行果树品种改良已日益引起重视,但是在受体的应用和转化方法上还存在着诸多困难。一方面,大多数果树尚不能从细胞或原生质体再生成完整植株,即使少数已可以再生的果树树种,也并非众多品种都能再生成功,而是存在着明显的基因型差异性。同时,还有再生植株童期过长的问题。另一方面,目前在植物基因转化中常用的两种方法即DNA直接吸入法和农杆菌介导的载体法,若以细胞或原生质体为受体,不仅存在再生困难的问题,而且再生过程费时长;若以叶盘、愈伤组织或珠心组织等为受体,既需要在转化后除去农杆菌,又需要排除转化与非转化组织的嵌合性。这些因素都大大地限制了基因转化在果树中的应用。因此,根据多年生果树的生长特点,建立一种适用的基因转化技术已成当务之急。本文采用农杆菌介导的附体腋芽转化-离体扩繁鉴定的方法,成功地将GUS基因转入沙田柚。结果证明这是一种简单、快速、高效的基因转化方法。     

拟南芥蛋白磷酸酶TOPP4的原核表达和多克隆抗体纯化

以拟南芥野生型Col-0为材料,对其I型蛋白磷酸酶(TOPP)家族进行序列分析,对家族成员之一的TOPP4进行原核表达及多克隆抗体的制备和纯化。结果显示:(1)该研究构建出原核表达载体pEGM-4T-3-TOPP4和pET-28a-GFP-N150并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。(2)经IPTG诱导,表达出分子量约为62kD的GST-TOPP4和分子量约为34kD的His-GFP-N150可溶性重组蛋白。(3)纯化的重组蛋白GST-TOPP4作为抗原免疫新西兰兔后,获得了效价大于1∶400 000的多克隆抗体血清。(4)抗体血清经连接了His-GFP-N150蛋白的溴化氢活化的树脂纯化,得到特异性较高的anti-TOPP4多克隆抗体。研究认为,该研究纯化出了特异的TOPP4蛋白多克隆抗体。     

响应曲面法优化泡沫分离枸杞酸性多糖

本文采用泡沫分离法纯化枸杞酸性多糖。在单因素实验基础上,采用Design-Expert软件中的Box-Behnken Design设计考察稀释倍数n、表观气浮速率G和浮选时间t三个因素对枸杞酸性多糖富集比和回收率的影响,建立了各因素对其综合影响的回归方程,通过该方程预测了其最佳工艺条件为:稀释倍数为10、表观气浮速率为207 mL/min,浮选时间为62 min。在此条件下枸杞酸性多糖的富集比和回收率分别为3.61%和81.76%,验证值分别为3.81%和82.47%,与预测值的相对误差分别为5.5%和0.87%。     

视网膜母细胞瘤结合蛋白6真核表达载体的构建及其对NF-κB信号通路的影响简

目的：研究视网膜母细胞瘤结合蛋白6（RbBP6）对TNF-α激活的NF-KB转录活性的影响。方法：构建RbBP6的真核表达载体并在293T细胞中过表达,或利用RNA干扰技术敲低RbBP6的表达,采用NF-KB双萤光素酶报告系统检测RbBP6对TNF-α激活的NF-KB转录活性的影响。结果：过表达RbBP6对NF-KB转录活性无明显影响,而瞬时干扰RbBP6能够明显抑制NF-KB的转录活性。结论：实验结果提示RbBP6在NF-KB信号通路中可能发挥重要调控作用。     

佳禾早占成熟种胚高效率组织培养方法的研究(简报)

水稻作为最主要的粮食作物之一,其产量和质量都倍受人们关注,通过将一些优良基因导入水稻,或是通过物理、化学等手段诱变,培养优质、高产、多抗新品种是现代育种科学的发展方向。但无论是基因片段的转入或是物理、化学的诱变处理,其对象多是具有分化再生能力的愈伤组织。自1965年以来,研究者们先后以水稻各部位为材料,诱导出愈伤组织和再生出植株,取得了较好的结果。但由于这些材料的来源受季节的限制,取材不便,而成熟种胚则不存     

人工湿地氮去除关键功能微生物生态学研究进展

人工湿地是一种能有效处理水体氮素污染的生态技术,其中微生物是驱动人工湿地系统中氮素去除的重要引擎。近20年来,随着分子生物学技术的广泛应用,有关人工湿地氮去除功能微生物生态学方面研究取得了一些重要进展。以硝化-反硝化作用和厌氧氨氧化作用这两种重要的人工湿地微生物脱氮途径为主,针对氨氧化细菌/古菌、厌氧氨氧化菌和反硝化菌等关键脱氮功能微生物的研究,重点归纳总结了目前有关这几类关键功能菌群在人工湿地中的丰度、活性、多样性、分布特征与影响因素,及其对废水中氮去除的作用,并在此基础上对今后的重点研究工作提出了展望。面向未来人工湿地氮去除关键功能微生物的研究应侧重其在污水净化和温室气体减排等方面的生态功能研究,同时加强其代谢过程与机制以及不同功能菌群间的关联研究。     

定期血糖监测对糖尿病患者血糖控制及生活方式的影响

目的:探讨定期血糖监测对糖尿病血糖控制及生活方式的影响。方法:随机抽取我中心2010-2011年度确诊的老年2型糖尿病患者110例,随机分为干预组和对照组,每组各55例;2组均接受正规降糖药物治疗及生活方式指导,干预组每周进行一次血糖监测,每3个月测一次糖化血红蛋白,对照组按患者意愿测定血糖指标,通过12个月的观察,研究两组患者在血糖控制及生活方式上的差异。结果:干预组患者空腹血糖(FPG)由定期监测血糖前的(7.26±1.36)mmol/L降至(6.68±1.10)mmol/L;餐后2小时血糖(2HPG)由定期监测血糖前的(12.34±2.29)mmol/L降至(11.09±1.98)mmol/L;糖化血红蛋白由监测前的(7.99±1.61)%降至(6.60±0.87)%;差异具有显著性(P<0.05);生活方式亦有明显改善,差异具有显著性(P<0.05);而对照组的改变不如干预组。结论:通过定期血糖监测可以有效地控制血糖、糖化血红蛋白,促使老年2型糖尿病患者改变不良生活方式。