酵母校正tRNA的提取及其对番茄花叶病毒增殖的抑制作用

从酵母(Saccharamyces cerevisiae SUP-6-1温度突变株,含SUPt RNATyr,SUFtRNAleo,SUPtRNAHis)和菠菜提取了总tRNA,经过BD-纤维素柱层析,得到部份纯化的amber终止密码校正tRNA,它们在兔网织细胞裂解液翻译体系中能促进番茄花叶病毒(ToMV)RNA183k抄读蛋白的合成。研究了酵母SUP6-l校正tRNA对ToMV在烟草中增殖的影响。在用酵母SUP6-l校正tRNA处理的植株顶部新生叶中病毒滴度接种3、5、11、15和20天后,分别是对照的3％、12％、3 8％、42％和67％。用校正tRNA处理的烟草植株中层叶片,在接种后11—20天明显低于对照。下层接种叶中的病毒滴度无显著差异。讨论了校正tRNA对ToMV增殖抑制的机理。     

烟叶脉坏死病毒原鉴定及cDNA克隆与序列分析

田间采集辽宁地区烟叶脉坏死病标样所得分离物,在测定的１２个科３５种植物中只侵染茄科的一些烟草品种及洋酸浆（ｐｈｙｓａｌｉｓｆｌｏｒｉｄａｎａ）,可由桃蚜（Ｍｙｚｕｓｐｅｒｓｉｃａｅ）传播。病叶汁液稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－２）－v１０￣（－３）;失毒温度（ＴＩＰ）为５５一６０℃;体外保毒期（Ｌ）为４８－７２小时。病毒粒体形态呈线条状７２０×１２ｎｍ,病叶脉坏死部细胞质中含风轮状内含体。病毒提取物的紫外最大吸收为２６５ｎｍ,最小吸收为２４５ｎｍ,Ａ＿（２８０）／Ａ＿（２６０）为０．８２。该病毒分离物与ＰＶＹ￣０抗血清呈阳性反应。以病毒ＲＮＡ为模板,按国外报道的ＰＶＹ￣Ｎ序列合成引物经逆转录合成ｃＤＮＡ。用ＰＣＲ扩增出约０．８０ｋｂ的ＣＰ基因片段,将这一片段插入载体ｐＧＥＭ７Ｚ－ｆ（＋）中转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ菌株得到了ＣＰ基因的克隆。ｃＤＮＡ序列分析表明,和国外报道的ＰＶＹ￣Ｎ序列同源性极高,初步表明引起辽宁地区烟叶脉坏死病的毒原为ＰＶＹ￣Ｎ。     

中国海岸带围垦遥感分析

海岸带围垦是沿海区域缓解人口增长与城镇扩张所带来土地压力的重要途径和方式。建国以来,中国大陆沿海围垦大量滨海湿地以满足社会经济发展所导致的土地需求,对滨海湿地的资源、生态和环境造成影响和胁迫。为掌握近35年来中国大陆沿海地区的围填海状况,以5a为间隔,选取1985—2010年间Landsat系列卫星影像数据,基于遥感与GIS技术,解译6个年份的围垦岸线,计算分析围垦面积,研究并提出围垦强度系数。结果表明,1985—2010年,中国大陆沿海共围垦土地755183 hm~2,年均围垦30207 hm~2,围垦强度达到1.7 hm~2a~(-1)km~(-1),围垦总量趋势表现先减少后增加。环渤海经济圈与长三角经济圈围垦强度最大,其围垦总量占到全国总体的85.7%。围垦的时空分布及其利用形式受沿海区域自然地理条件和地区经济发展水平的制约和影响。     

病毒来源的抗病毒基因的构建和在植物中的表达

寄主植物对病毒感染产生各种类型的抗病性,包括高度抗病的免疫性,抗侵染,抗扩展和抗增殖的抗病性,过敏性抗病性,耐病性以及对传毒介体的抗性。但是至今我们还不能把编码这些抗性的基因分离出来,进行基因转移。所以在植物基因工程中应用植植物来源的抗病毒基因为时尚早。由于病毒分了生物学的发展,已阐明了一些病毒的基因组的结构与功能,为利用病毒来源的抗病毒基因开辟了道路。随着DNA重组和克隆技术的发展,以及双子叶植物基因转化技术的日趋完善,使植物抗病毒的基因工程得以突破。已由病毒外壳蛋白基因、病毒卫星RNA的cDNA和病毒弱株系的全长cDNA转化植物,获得抗病性的表达。探索病毒来源的反意RNA和中和抗体基因作为抗病毒基因的可能性也在进行中。     

小麦丛矮病毒的研究

小麦丛矮病是我国北方麦区的一个重要病害。已报道[1-4]叫它是由灰飞虱传染的,在小麦病株和带毒灰飞虱Laodepha striatellus Fallen 的超薄切片中都观寮到弹状璃毒颗粒。为了确定病原,我们用微量注射器把从小麦病株中提取的病毒注人灰飞虱,然后放在健康小麦上取食,可使小麦产生典型的丛矮病状。证明小麦丛矮病的病原是种弹状病毒,称谓小麦从矮病毒(WRSV)。还用注射方法测定了WRSV的体外抗性。用10种禾谷类作物和17种禾本科杂草测定了wRSV的寄主范围。试验证明WRSV可侵染属于6个族的17种植物。在免疫的植物中Aegilops ventricosa 可与小麦杂交,是抗病育种中有用的原始材料。在温室条件下测定了43个小麦品种对WRSV的抗病性,41个严重感病,两个春麦品种中3和中4是抗病的。     

延边地区烟草病毒种类及病毒病的防治

对田间烟草进行病毒病种类的调查和鉴定结果表明,延边地区感染烟草的病毒主要是烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(cMV),而以两种病毒的混合侵染为主,达80-1 00％。弱毒疫苗N14．和CMV卫星RNA生防制剂S5,混合使用,或CMV卫星RNA生防制剂S512单独使用防治烟草病毒病,与不使用的对照比较,防治效果明显,达70.2—77.1％,上等烟比率达22.3—30.9％,而对照只有9．2-1 9.2％,亩收入比对照增加21．7—8 0.8％。     

甘薯羽状斑驳病毒cDNA探针的克隆及其应用

从表现病毒症状的甘薯叶片中直接提取甘薯羽状斑驳病毒(Sweet Potato Feathery Mo-ttle Virus,SPFMV),用酚-SDS-蛋白酶K法提取SPFMV RNA,以Oligo(dT)作引物合成eDNA。以质粒pUC19为载体,转化E.Coli DH5a,筛选出插入片段长度为1．9kb的阳性克隆,以此制备探针,与SPFMV(RC株)感染的巴西牵牛(Ipomoea setasa)和牵牛(I.nil)叶片总核酸抽提液进行斑点杂交呈阳性反应。52P和生物素标记的cDNA探针杂交试验均得到理想结果。     

利用RNAi逆转录病毒载体系统对人朊病毒蛋白表达的稳定抑制

朊病毒是引起可传染的致死性海绵状脑病的致病因子,细胞中正常的朊病毒蛋白(PrPC)在该疾病病程发展中起着必不可少的作用。同时,PrPC已被证明在胃癌、乳腺癌等癌症中发挥着保护癌细胞的作用。根据人源PrPC(HuPrPC)cDNA序列,本研究设计了4种19nt的siRNA,将其构建成RNAi逆转录病毒载体系统,进行了其对HuPrPC表达的抑制效应的分析,从中获得了能高效稳定抑制HuPrPC表达的3种靶向序列,其中si626(5′-GGTTGAGCAGATGTGTATC-3′)的抑制效果最为明显,其抑制效率可达85%以上。随后,利用筛选出的si292和si626的稳定干扰细胞系进行了细胞浸润性实验,结果发现,PrPC干扰细胞系细胞浸润能力显著下降。这为进一步研究朊病毒疾病的基因治疗、以PrPC为靶标进行PrPC相关癌症的辅助治疗研究奠定了一定的基础。