法氏囊病病毒vp2基因在酵母中的分泌表达及鉴定

应用Pichia酵母表达系统高效分泌表达了传染性传染性法氏囊病病毒vp2基因片段。首先用Primer5．0设计1对引物P1、P2,以插入IBDV vp2基因的PMDl8-T-VP2载体为模板,扩增出带有终止密码子的1.4kb片段,将此片段正向亚克隆到酵母表达载体pPICZα-A上,将构建好的重组载体pPICZα-A-VP2用Sac Ⅰ内切酶线性化后,电击转化整合入Pichia PastorisX-33酵母菌,经高浓度Zeocin^TM筛选、表型鉴定、诱导表达及表达产物的鉴定,得到高效表达vp2基因的酵母工程菌X-33／pPICZα-A-VP2。工程菌72h培养上清的SDS-PAGE电泳与免疫印迹结果显示,vp2基因表达产物大小约为55kDa,比预期的41kDa大。凝胶薄层扫描结合Bradford蛋白质总含量测定结果表明,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的28％,表达量可达23mg／L。间接ELISA结果表明重组表达产物能够有效地区分法氏囊病病毒标准阳性与阴性血清。     

小手术青年患者围术期认知功能的变化

目的:以青年健康志愿者为对照,探明青年患者小手术围术期认知功能的变化.方法:以择期行脐部以下部位小手术(手术时间＜2h)、ASA分级Ⅰ～Ⅱ级的青年患者(18-39岁)60人为病例组,青年健康志愿者30人为对照组.分别于术前一天、术后3天行6项认知功能测定.结果:术后各项测验值普遍高于术前测验值(P＜0.05).病例组在术前有2项分测验低于对照组,术后4项分测验低于对照组(P＜0.05).按Z计分诊断术后认知功能障碍,术后第3天发生5例POCD,其中时照组1例,病例组4例.组间差异无统计学意义(x2=0.539,P=0.463).结论:小手术青年患者认知功能下降在术前已经存在,应激反应有可能是导致围术期认知功能下降的主要原因之一.     

重组酵母鸡γ干扰素的抗病毒活性测定及临床初步应用

为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素,以Con A(刀豆素A)诱导培养4~10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插入到酵母表达载体pPICZa-A上,得到了重组酵母鸡γ干扰素表达载体pPICZa-A-CHIFN-γ,经BstxⅠ线性化后的重组载体被转入酵母菌株X33中,通过PCR的方法来筛选重组酵母菌,在甲醇诱导表达后,SDS-PAGE结果显示有两株重组菌在诱导72h后其表达上清中有大小为16kDa的目的条带。干扰素生物活性测定经典实验(微量病变抑制实验)和临床初步应用结果皆说明重组酵母鸡γ干扰素具有较强的抗病毒的生物活性和较好的临床使用前景。     

中药抗老方剂汇编

为了从祖国医学遗产中发掘有关抗老延年的方剂以供试用推广,我们从1958年10月下旬展开了中药的选方工作。由于对中医知识毫无基础,在工作之始深感无从下手。当即访问了中国医学科学院药用植物系,从而了解到选方的过程,并看到了他们印制的“方剂汇编”,虽然其内容全是有关中风、瘤肿的方剂,但在编排     

维生素E对家蝇寿命及肠上皮细胞内脂褐素堆积的影响

正常家蝇,对照组喂常规饲料,实验组在饲料中补充维生素E(V. E.)。计算各组平均寿命,并按期取近肠,超薄切片,电镜观察。结果证明,补充V. E.组在5批实验中平均寿命分别比同批对照延长13.7％,6.4％,6.3％,21.6％,51.4％(p<0.05至<0.001)。透射电镜下发现,实验组近肠上皮细胞内脂褐素虽亦随日龄增加,但总少于同龄对照,分布较散,电子密度也较低,颗粒内质网似比对照发达。以上表明V. E.可能抑制了脂褐素堆积,并有促进合成,延长平均寿命的功效。     

斯达氏油脂酵母肌动蛋白基因克隆及序列分析

以产油真菌斯达氏油脂酵母(Lipomyces starkeyi AS 2.1560)为材料,提取总KNA,反转录成cDNA.根据真菌肌动蛋白(actin)保守核酸序列设计引物,PCR扩增后获得部分序列,再采用cDNA末端快速扩增技术获得了开放阅读框全长为1128 bP的cDNA序列,该序列编码蛋白质含375个氨基酸残基,等电点为5.49.同源性比较发现该基因(Accession No.EU258762)与其它已知真菌的actin基因相似性在75%以上,氨基酸序列相似性在90%以上.通过不同物种肌动蛋白进化树分析发现L.srarkeyi与亚罗解脂酵母(Yarrowia lipolytica)有较近的亲缘关系.该研究对探索L.starkeyi产油机制有一定的参考价值.     

玉米钼辅助因子硫酸化酶基因启动子的克隆与功能验证

为克服组成型启动子启动外源基因过量表达引起的诸多问题,同源克隆(Mo-molybdopterin cofactor sulfurase)基因（ABA3）的启动子(ABA3s)序列,并用PlantCARE软件分析其非生物逆境应答元件, 实时定量PCR检测ABA3基因在非生物逆境诱导下的差异表达后。然后,用该启动子构建启动GUS（β-glucuronidase）基因的表达载体, 基因枪法转化玉米愈伤组织。经组织化学染色法检测其表达后, 在高渗、高盐、低温胁迫处理及ABA诱导下检测GUS酶荧光值与荧光素酶(内参)发光值的比值(GUS/LUC), 以此评价ABA3s启动子在非生物逆境胁迫下的启动活性。结果表明, ABA3基因在模拟干旱、低温、高温、高盐胁迫及ABA、乙稀诱导下差异表达, 说明该基因的启动子(ABA3s)具有非生物逆境诱导活性。序列分析表明, ABA3s启动子全长777 bp, 含有ARE、HSE、MBS、TGA、Circadian等多种非生物逆境胁迫应答元件。用ABA3s启动GUS基因构建的表达载体转化的玉米愈伤组织, 响应干旱、低温、高温、高盐胁迫等多种非生物逆境胁迫, 及ABA和乙稀诱导, GUS检测呈阳性。在8%甘露醇高渗条件下, GUS/LUC比值比空白对照高6倍。上述结果表明, ABA3s启动子具有非生物逆境诱导特性, 经进一步验证其功能后, 可用于玉米抗逆转基因研究。     

传染性法氏囊病病毒VP2基因的真核表达载体的构建及表达

根据GenBank发表的传染性法氏囊病病毒 (IBDV) 5 2 70株VP2 基因序列 ,设计合成了 1对特异扩增IBDVVP₂ 基因的引物。以IBDV超强毒河南分离株HN0 1感染发病鸡法氏囊组织中提取病毒RNA来制模板 ,利用RT PCR扩增出了 1 .4kb的VP₂ 基因 ,将其克隆到pIREShyg载体上 ,构建了pIRES VP₂ 真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO细胞 ,通过潮霉素筛选得到阳性克隆 ,间接免疫荧光实验 (IFA)鉴定VP₂ 在CHO细胞中的表达 ,并用RT PCR的方法从转录水平证实VP₂ 在CHO k1细胞中的表达 ,最终建立了CHO VP₂ 细胞株 株。     

法氏囊病病毒vp2基因在酵母中的分泌表达及鉴定

应用Pichia酵母表达系统高效分泌表达了传染性传染性法氏囊病病毒vp2基因片段.首先用Primer5.0设计1对引物P1、P2,以插入IBDV vp2基因的PMD18-T-VP2载体为模板,扩增出带有终止密码子的1.4kb片段,将此片段正向亚克隆到酵母表达载体pPICZα-A上,将构建好的重组载体pPICZα-A-VP2用Sac Ⅰ内切酶线性化后,电击转化整合入Pichia PastorisX-33酵母菌,经高浓度ZeocinTM筛选、表型鉴定、诱导表达及表达产物的鉴定,得到高效表达vp2基因的酵母工程菌X-33/pPICZα-A-VP2.工程菌72h培养上清的SDS-PAGE电泳与免疫印迹结果显示,vp2基因表达产物大小约为55 kDa,比预期的41kDa大.凝胶薄层扫描结合Bradford蛋白质总含量测定结果表明,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的28%,表达量可达23 mg/L.间接ELISA结果表明重组表达产物能够有效地区分法氏囊病病毒标准阳性与阴性血清.     

硫激肽及其受体调控褐飞虱取食行为

【目的】明确硫激肽(sulfakinin, SK)及硫激肽受体(sulfakinin receptor, SKR)在褐飞虱Nilaparvata lugens取食行为中的作用。【方法】PCR克隆褐飞虱硫激肽基因Nlsk及其受体基因Nlskr cDNA全长序列并进行生物信息学分析；利用qRT-PCR检测Nlsk及Nlskr在褐飞虱不同发育阶段(卵、1-5龄若虫、雄成虫和雌成虫)和雌成虫不同组织(头、触角、翅、口针、足、肠道和马氏管)中的表达量；褐飞虱3龄若虫注射dsNlskr进行基因沉默，qRT-PCR检测4龄若虫中Nlskr的表达量，测定4龄若虫的取食量；基于已构建的Nlskr RNAi后的4龄若虫转录组数据库进行差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)的GO和KEGG分析以及取食相关基因的qRT-PCR验证。【结果】PCR克隆得到了褐飞虱Nlsk(GenBank登录号：AB817281)及Nlskr(GenBank登录号：BAO01059.1)的cDNA全长序列。序列比对结果显示，褐飞虱NlSK成熟肽具有与其他物种保守的C端FMRFam...