芳香烃龙胆酸降解途径蛋白质组学的研究

芳香烃是一类重要的环境污染物,微生物降解是其主要的处理方法。研究显示降解过程中产生保守型和诱导型的各一组同工酶。目前,仅有保守型的龙胆酸加双氧酶（GDOI）及其下游片段被克隆。产碱假单胞菌NCIB9867（P25X）的突变株-SNZ28 GDOI被打断,在龙胆酸诱导的情况下,该突变株仍能检测到龙胆酸加双氧酶活性。采用二维蛋白电泳分析突变株SNZ28在有和没有龙胆酸诱导条件下的蛋白质表达差异。电泳结果显示了两者存在有15个蛋白点的差异。通过MALDI-TOF和Q—TOF分析,其中的12个蛋白质点与数据库中已知多肽片段有同源性。其中,P4点与青枯菌（Ralstonia species）龙胆酸1,2加双氧酶同源。该结果在蛋白质组学上证实了GDOII的存在。     

低温胁迫下二倍体杂交种高山松光系统Ⅱ功能稳定性研究

以人工气候室内的高山松(Pinus densata)及其亲本油松(P.tabulaeformis)和云南松(P.yunnanensis)实生苗为材料,通过测定低温胁迫和恢复后其幼苗的快速叶绿素荧光诱导动力学(JIP-test)参数,分析高山松及其亲本的光系统Ⅱ(PSⅡ)功能稳定性以及对低温胁迫的响应差异,以探讨高山松适应高海拔低温环境的光合生理生态机制。结果表明:经过33 d的低温(12℃/5℃,昼/夜)处理后,高山松PSⅡ功能参数单位截面积吸收的能量(ABS/CSo)、捕获的能量(TRo/CSo)、电子传递的能量(ETo/CSo)、耗散的能量(DIo/CSo)、有活性反应中心的数量(RC/CSo),以及原初光化学反应的最大量子产额(φPo)、吸收光能用于QA-以后的电子传递的能量比例(φEo)、捕获光能用于QA-以后的电子传递的能量比例(Ψo)、光能利用能力参数(PIabs)、2 ms时相对可变荧光(VJ)、荧光上升的初始斜率(Mo)、荧光曲线与Fm所围面积(Area)、介于F0和Fm之间的相对面积(Sm)和QA氧化还原次数(N)均与处理前无显著差异;油松和云南松的φPo、φEo、Ψo、PIabs、Area与对照差异显著,云南松的VJ、Mo、Sm、N、ETo/CSo、DIo/CSo、ABS/CSo也与对照存在显著差异;温度恢复之后(25℃/18℃,昼/夜),这些荧光参数的恢复程度表现为高山松>油松>云南松。可见,低温胁迫显著影响了油松和云南松的光能传递和光能利用能力以及受体库大小,且云南松遭受伤害的程度高于油松,而高山松的PSⅡ功能及其稳定性在遭受低温胁迫时明显高于亲本油松和云南松,且胁迫解除后恢复程度高,从而使得高山松能够在高海拔低温环境中累积代谢所需的有机物,保证其正常的生长和发育。     

山东蓼属及近缘植物（蓼科）果实外果皮解剖学研究

利用光学显微镜对山东产蓼属（Polygonum）及近缘植物20种2变种的果实外果皮解剖学特征进行了观察研究。结果表明,其果实外果皮细胞在横切面上为方形、短矩形或狭长矩形,排列为栅栏状,细胞腔形状多样,大小取决于细胞壁增厚程度,具树状分枝或二叉分枝,垂周壁平直或波纹状。根据细胞垂周壁式样及细胞腔形状划分为3种类型,即：A.细胞腔近狭三角形,具树状分支,垂周壁强烈折曲,壁内多褶皱和空隙,如萹蓄。B.细胞腔近狭长、具树状分支,该类型又分为两个亚型：B1细胞腔形状无规则,垂周壁强烈折曲或波纹状,如春蓼;B2细胞腔形状规则,垂周壁平直,如拳参。C.细胞腔狭小,二叉至四叉分支,垂周壁平直,如篱蓼。果实外果皮解剖学特征对蓼族各属的范围界定及某些存疑种的系统学位置的处理具有重要意义。     

氧自由基与脑胶质瘤瘤周水肿关系的实验研究

目的：探讨自由基和脑胶质瘤瘤周水肿的关系。方法：体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞株,采用立体定向技术将细胞株接种在右侧尾状核,建立大鼠脑胶质瘤模型,共60只,术后5天将荷瘤大鼠随机分为3组（EDA高剂量组,EDA低剂量组和对照组）,每组各20只,每组10只用来测定荷瘤大鼠瘤周脑组织含水量、SOD活性及MDA含量,剩余10只用来观察荷瘤大鼠生存时间。结果：EDA干预组荷瘤大鼠瘤周脑组织含水量下降,SOD活性增高,MDA含量下降,以EDA高剂量组更为显著。各组荷瘤大鼠瘤周脑组织含水量与SOD活性呈负相关,而与MDA含量呈正相关。且EDA组荷瘤大鼠生存时间延长。结论：由基参与大鼠脑胶质瘤瘤周水肿的形成,自由基清除剂能够减轻大鼠脑胶质瘤瘤周脑组织水肿。     

三叶斑潜蝇发育起点温度和有效积温的研究

不同恒温条件下测定了三叶斑潜蝇Liriomyza trifolii (Burgess)各虫态的发育历期,并用直线回归法计算出各虫态的发育起点温度和有效积温.结果表明,三叶斑潜蝇的历期、发育速率与温度间相关性明显,其卵、幼虫、蛹及全世代发育起点温度分别为9.20℃、10.80℃、6.43℃、8.40℃,有效积温分别为68...     

家蚕β-呋喃果糖苷酶基因BmSuc1的CRISPR敲除载体的构建与导入

【目的】CRISPR/Cas9是近些年报道较多的基因编辑新工具,具有简便高效、特异性强等优势。BmSuc1是从鳞翅目经济昆虫家蚕Bombyx mori体内发现的编码β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,β-FFase)的基因,也是首个被克隆和鉴定的动物型β-FFase编码基因。β-FFase是作用于果糖基的蔗糖水解酶,BmSUC1可能与家蚕防御桑叶生物碱的生理过程有关,但目前其发挥作用的分子机制尚不清晰。为了解析BmSuc1在蚕体的作用途径及其生理功能,本研究基于CRISPR/Cas9基因编辑系统构建表达双元sgRNA的CRISPR载体,用于敲除家蚕基因组中的BmSuc1基因。【方法】根据目的基因BmSuc1的ORF序列设计2条sgRNA,通过同源重组的方法分别插入CRISPR载体的Sal I和Nhe I酶切位点。进而利用转基因显微注射技术将该编辑载体注入G_0代蚕卵,经催青孵化饲养家蚕并自交制备G_1代蚕种。【结果】PCR验证及测序结果均表明CRISPR编辑载体构建成功。根据Ds Red2红色蛋白的荧光标记,从G_1代家蚕幼虫中成功筛选出阳性转基因个体。【结论】本文详细介绍了表达双元sgRNA的CRISPR载体的构建方法,所获得的阳性转基因家蚕对于下一步探讨BmSuc1在家蚕糖类营养的吸收与利用途径中的作用奠定了重要的实验基础,有助于阐明蚕-桑相互选择和适应的分子机制。     

玉米PLCs基因家族鉴定及表达谱分析

磷脂酶C(phospholipase C,PLC)是一类能够水解磷脂的酶,作为磷脂酶家族中的一员,在调节植物生长及响应逆境胁迫中发挥重要作用。本文通过对ZmPLCs蛋白的系统发育、其基因结构及启动子中的逆境相关顺式作用元件数量,以及基因的组织特异性表达模式等生物信息学进行研究;并用NaHCO_3和低温处理玉米转录组数据,构建ZmPLCs基因表达谱。结果显示,在玉米基因组水平上共鉴定出9个玉米PLCs基因,基于玉米PLCs水解底物的不同,9个ZmPLCs基因被分为2个亚族,分别定位在玉米的1、2、3、5和9号染色体上。ZmPI-PLCs编码蛋白包含典型的X、Y和C_2结构域,ZmNPCs蛋白包含典型的磷酸酯酶结构域,ZmPLCs蛋白N端由延长链和螺旋结构组成,多定位于线粒体和叶绿体。ZmPLCs基因替换发现ZmPLCs家族可能是通过变异进行扩增的。在9个ZmPLCs基因启动子上包括脱落酸、盐和低温等激素和非生物胁迫相关元件高度富集,转录组数据分析ZmPI-PLC2和ZmNPC2上调响应Na HCO_3,ZmPI-PLC5和ZmNPC3上调响应低温,ZmPI-PLC3和ZmPI-PLC4与玉米根系发育有关,这与基因表达模式相印证,进一步表明玉米PLCs基因参与植物对多种非生物逆境的响应,以及作物对非生物抗性利用的潜在应用价值。     

从基因工程小C肽人胰岛素原类似物（B－R2－A）制备人胰岛素

以融合蛋白的形式,在Ｅ．ｃｏｌｉ中经温度诱导表达了小Ｃ肽人胰岛素原类似物（Ｂ－Ｒ２－Ａ）．表达的融合蛋白可占细胞总蛋白６８％．经磺酸解,及初步分离Ｓ－磺酸型融合蛋白,再经ＣＮＢｒ裂解后,进行还原重组,ＨＰＬＣ分离纯化等步骤,每升发酵液可得到Ｂ－Ｒ２－Ａ约５０ｍｇ。经酶促转化及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５纯化,得重组人胰岛素约２０ｍｇ,其氨基酸组成与人胰岛素相同,并具有与猪胰岛素相同的生物活性．     

卡门柏青霉-PG3脂肪酶的研究

从242株青霉属菌株中筛选出脂肪酶产生菌青霉-PG3。经鉴定,定名为卡门柏青霉(Penicillium camembertii Thom)。卡门柏青霉-PG3在由4％豆饼粉,0.5％糊精,0.75％橄榄油,0.5％K_2HPO_4,0.1％(NH_4)_2SO_4组成的液体培养基中,28℃,振荡培养96小时,发酵液脂肪酶活力(39℃,pH7.0)达60U/ml。PG3脂肪酶以橄榄油为底物,水解反应最适温度为48℃,最适pH为8.0。pH稳定范围6.0—11.0。Cu~(2+),Ca~(2+),Fe~(2+),Pb~(2+)等金属离子对酶活力有抑制作用。PG3脂肪酶对椰子油、菜籽油、亚麻油等油脂的水解率分别达到96％,94％和90％。     

含硒抗体酶性质的研究

在成功地制备了具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）活性含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）的基础上,我们筛选了制备Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ的最佳条件,并对其理化性质及酶学性质和稳定性进行了深入的研究。结果表明,Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ的等电点为６．９５和７．０８,一为１５８ｋｄ;适ＰＨ和最适温度范围比天然酶宽广;抗体酶的贮藏稳定性比天然酶高。高Ｘ射线光电子能谱技术测得在Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ中含硒量为５ｍｏｌＳｅ／ｍｏｌ