丙型肝炎病毒NS5A基因在昆虫细胞中的表达及其分布研究

应用PCR方法从含有丙肝病毒全部非结构蛋白基因的质粒pBAC25中扩增出全长的NS5A基因DNA片段(约1.34kb),PCR扩增NS5A基因片段克隆到转移载体pBlueBacHisA中.重组转移质粒pBlueBacHis5A DNA与野生型杆状病毒(AcNPV)DNA共转染SF-9昆虫细胞,通过空斑纯化获得带有NS5A基因的重组病AcNS5A.对重组病毒基因组DNA进行酶切和PCR鉴定,证实HCV NS5A基因已插入重组病毒基因组中.AcNS5A感染SF-9细胞后,在细胞中表达出一条64kD的蛋白,用Western-blot分析,结果表明这种蛋白与抗HCV HS5A特异性抗体发生强烈反应,说明NS5A基因已在细胞中得到表达,应用免疫荧光技术与免疫组化技术进一步研究NS5A蛋白在昆虫细胞中不同时间的表达情况及其分布,结果表明,NS5A蛋白在AcNS5A重组病毒感染细胞24h后主要分布在细胞质膜上,而在48h后则同时分布于细胞质膜和细胞核内,在72h则完全布满整个细胞,我们认为NS5A蛋白定位于质膜和细胞核中,暗示着在病毒复制过程中NS5A蛋白可能参与病毒RNA在质膜上复制和细胞基因表达的调控.     

家蚕信息素结合蛋白BmPBP2和BmPBP3基因的初步鉴定及表达分析

嗅觉对昆虫的生存、繁殖等起着重要的作用。依据家蚕Bombyx mori全基因组序列设计特异引物,扩增得到了两个信息素结合蛋白BmPBP2和BmPBP3基因的cDNA片段。结合已报道的家蚕信息素结合蛋白BmPBP1和两个普通气味结合蛋白BmGOBP的信息,对其基因结构分析表明,这5个基因均由3个外显子组成,具有保守的外显子/内含子边界和典型的6个Cys残基,且3个PBP基因在基因组上串联分布。序列同源性分析表明,BmPBP2和BmPBP3与烟草天蛾的PBP2和PBP3的同源性高达69%和63%。半定量RT-PCR分析结果显示,BmPBP2和BmPBP3基因在成虫触角中特异表达,且雌雄表达水平相当。这些结果表明BmPBP2和BmPBP3可能起着性信息素识别的作用。     

低磷营养胁迫下水稻化感抑草潜力的变化特性及其作用机理

在低磷(0.5 mg·L^-1) 营养胁迫下,运用生理生化方法分析了化感水稻PI312777（PI）与非化感水稻Lemont (Le) 对稗草抑制作用潜力的变化特性及其内在机理.结果表明,在低磷营养胁迫下,化感水稻品种PI对受体稗草根干重的抑制能力明显提高,在处理后的5 、10和15 d,其对稗草地下部干重的抑制率分别增加了5.64%、3.89%和12.13%,增加幅度比非化感水稻品种Le显著.生理生化分析结果表明,与正常营养条件相比,用低磷营养下生长的化感水稻PI的根系分泌物处理稗草5、10和15 d,受体稗草叶片中POD活性的促进率分别提高了20.19%、15.47%和6.68%,吲哚乙酸氧化酶活性的促进率分别提高了18.08%、17.71%和12.50%,硝酸还原酶活性的抑制率分别增加了13.89%、18.60%和2.10%. 在低磷营养胁迫下,化感水稻通过抑制受体植物的硝酸还原酶活性,影响其对氮营养的吸收,同时显著提高了吲哚乙酸氧化酶活性,减缓了受体稗草的生长速度,提高了其抑草作用潜力.     

六周有氧运动改善动脉粥样硬化小鼠骨骼肌氧化损伤和促进肌肉因子生成

动脉粥样硬化累及外周动脉能引起骨骼肌病变，其中氧化损伤是骨骼肌病变的重要表现，并且动脉粥样硬化也会减少有益肌肉因子的生成分泌。肌肉因子鸢尾素(irisin)、肌肉素(musclin)和BAIBA被认为参与改善动脉粥样硬化。然而，目前尚不明确动脉粥样硬化诱导骨骼肌病变的分子机制，以及有氧运动训练对其骨骼肌氧化损伤和肌肉因子生成的影响。本研究采用高脂饮食(HFD)喂食载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠12周，以建立动脉粥样硬化模型，然后观察动脉粥样硬化小鼠骨骼肌中的氧化损伤、Nrf2抗氧化信号通路以及肌肉因子鸢尾素、musclin和BAIBA生成的变化，并通过6周有氧运动观察对动脉粥样硬化小鼠骨骼肌氧化损伤的改善作用，以及鸢尾素、肌肉素和BAIBA生成的影响。ApoE^-/-小鼠在HFD喂养12周时，采用多普勒超声评估动脉粥样硬化病变，与标准饮食喂养的野生型(WT)小鼠相比，ApoE^-/-小鼠主动脉内-中膜厚度(P<0.01)、峰值血流速度(P<0.05)和阻力指数(P<0.05)显著增加，血浆甘油三酯...     

miR-346通过靶向调控SRSF10抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖

胶质瘤是最常见的肿瘤之一，预后较差。有研究表明，microRNAs(miRNAs)与包括胶质瘤在内的多种肿瘤有密切联系。然而，miR-346通过靶向调控丝氨酸/精氨酸剪接因子10(serine/arginine splicing factor 10,SRSF10)抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖能力的分子机制目前仍不明确。对GSE165137与GSE139031芯片进行差异表达分析结果显示，miR-346在两个数据集中共同下调，运用CGGA数据库分析显示，miR-346高表达的患者总生存期明显提高(P<0.0001),miR-346的表达随胶质瘤WHO分级升高而降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示，miR-346在胶质瘤细胞U251中的表达显著降低(P<0.05),且miR-346过表达质粒转染成功(P<0.05)。Transwell实验，5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)增殖实验和细胞克隆形成结果显示，与对照组相比，过表达miR-346后U251细胞的迁移、侵袭和增殖能力下降(P<0.05)。生物信息学方法预测miR-34...     

链球菌溶血素“O”纯化的研究

乙型链球菌３２１７２ 株接种于含有月示蛋白胨的牛肉水培养基中培养。得到含有溶血素“Ｏ”的培养液，其溶血效价２５６ ＩＵ／ｍ ｌ。比活为１１．６ ＩＵ／ｍ ｇ 蛋白。经过超滤除去９５％ 的非目的蛋白，所得超滤截留液的溶血效价为２０４８ ＩＵ／ｍ ｌ，比活为３３５．７ ＩＵ／ｍ ｇ 蛋白。在此基础上用离子交换柱层析纯化，所得活性峰溶血效价为８１９２ ＩＵ／ｍ ｌ，比活为４３１１．５ ＩＵ／ｍ ｇ 蛋白。通过以上两步的分级纯化，溶血素“Ｏ”的比活提高了３７１ 倍。此纯化蛋白在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳中呈现一条染色带。     

功能性微肽通量发现和功能验证的研究进展

随着计算生物学和深度测序技术的飞速发展，愈来愈多的研究表明大量之前未被注释、隐藏在非编码RNA中的非经典开放阅读框(openreadingframe,ORF)具有编码功能性微肽(micropeptide)的能力。本文对微肽的基因来源、生物性质、预测方法和功能验证的研究现状和技术策略展开综述，以期为后续开展微肽发现、研究调控机制以及新靶点、生物标志物的开发等提供理论基础和参考依据。     

NLRP3炎症小体在糖尿病及运动中作用的研究进展

慢性非感染性炎症反应已经被证明是糖尿病发生和发展过程中的重要标志，伴有大量炎症因子的产生，从而加重疾病进程。运动作为诸多无创性抑制炎症反应的重要干预措施，在改善糖尿病症状中有着极为重要的作用。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3, NLRP3)炎症小体作为炎症反应的调控因子，通常可以引发多种炎症级联反应和细胞焦亡，与葡萄糖的摄取和血脂异常密切相关。运动可以延缓糖尿病的发病进程，以往的研究聚焦于NLRP3炎症小体对糖尿病的作用，但并未系统阐明运动对该作用的影响。因此，本文综述运动干预通过介导NLRP3炎症小体改善糖尿病症状的研究进展，为运动防治糖尿病提供新的理论基础。     

AKR1B10与GPC-3免疫组化检测对肝细胞肝癌的诊断价值

目的:探讨醛酮还原酶家族1B10(Aldo-keto reductase family 1,member B10,AKR1B10)与磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC-3)免疫组化检测在诊断肝细胞癌(HCC)的应用价值。方法:收集本院56例肝细胞癌,采用AKR1B10、GPC-3和联合法免疫组化染色,比较三种检测方法肝细胞癌的表达及强度。结果:三种免疫组化检测中,AKR1B10组、GPC-3组、联合组的阴性率分别为三组阳性率分别为73.21%、80.36%、91.07%,差异有统计学差异(P0.05)。结论:AKR1B10与GPC-3免疫组化检测对HCC诊断均具有高度特异性、敏感性,AKR1B10与GPC-3联合法准确率和有效率更高,对肝癌患者预后有重大意义。