一种筛选自然感受态缺陷突变株方法的改进*

对平板筛选自然感受态缺陷突变株的方法进行了改进,采用改进后的方法可以节省转化ＤＮＡ用量８０％以上,而且筛选时转化ＤＮＡ相对浓度提高约１倍,筛选效果较好。     

南方鲇肝脏线粒体DNA的简便分离纯化方法

摸索出可消除南方鲇肝脏ｍｔＤＮＡ制备中出现的白色干扰物的方法,采用该方法处理后的ｍｔＤＮＡ可用于限制性分析。     

双层平板法检测嗜盐古菌铁载体

采用双层平板法应用于嗜盐古菌铁载体的原位检测.双层平板的上层为不添加铁离子的嗜盐古菌培养基,嗜盐古菌可在其上生长,在缺铁胁迫下可向外界分泌铁载体;下层为含有CAS检测液用于铁载体检测的琼脂.当上层平板生长的嗜盐古菌分泌的铁载体透过培养基渗透到下层检测琼脂后,即可在下层检测平板上产生明显的特征性的铁载体螯合晕圈,表明双层平板法在嗜盐古菌的铁载体检测中确实可行,且较原有的嗜盐古菌铁载体检测方法简便、直接.     

测定极端嗜盐古菌保持完整细胞形态最低NaCl浓度研究方法探析

细菌要维持其完整的细胞形态需要一定的渗透压,根据极端环境微生物耐盐程度的差异大致分为非嗜盐、弱嗜盐、中等嗜盐、极端嗜盐和耐盐菌5大类.本研究组通过测定不同浓度NaCl条件处理下,600 nm处的光谱吸收的改变值结合显微照相的方法,对极端嗜盐古菌维持完整细胞形态所必须的最低NaCl浓度进行研究.发现极端嗜盐古菌CY1保持完整的细胞形态的最低NaCl浓度为8%～10%.并建立了较为系统、可靠的测定极端嗜盐古菌保持完整细胞形态最低NaCl浓度的研究方法.     

假单胞菌荧光与非荧光铁载体对铁离子的应答差异

假单胞菌既能产荧光铁载体也能产非荧光铁载体.通过对假单胞菌在不同铁离子浓度下,在通用CAS(Chrome azroul S)检测平板、改进的蔗糖-天冬氨酸(SA)平板(MSA)上以及通用液体CAS培养基和MSA培养基内的铁载体产生情况的比较,发现在通用CAS的液体培养基上产生的主要为非荧光铁载体(pyochelin),而在改进的MSA培养基上产生的主要为荧光铁载体(pyoverdine);在铁离子的应答方面,pyoverdine较pyochelin灵敏,较低的铁离子浓度即可抑制荧光铁载体的产生,但是不能抑制非荧光铁载体.     

沙吸附DNA的分布及转化活性

尽管自然环境中存在着大量的DNase,大分子体外DNA在土等生态环境中存在并保持转化活性。实验表明DNA被沙土吸附之后会被沙土保护而产生对DNase的抗性。然而对沙中DNA的检测多是通过PCR或者探针杂交的方法来进行,采用转化方法进行来检测的却鲜有报道。为了研究DNA释放进沙之后的分布及转化活性,建立了流过式微型离心沙柱。将20μLpUC18置于1.0g直径介于1.2~2.5mm之间的沙中,1.5mL0.1mol/LCaCl2洗脱之后再用200μLTEN缓冲液提取。结果表明吸附于沙中的DNA经提取后仍然具有生物转化活性,并且与洗脱液、提取液具有不同的转化活性和对DNase抗性,说明DNA与沙粒的结合不只是一种简单的附着,而是3种复杂的复合体结构。相对于没有沙保护而只能在室温下保留7d转化活性的DNA,在被沙吸附保护之后的DNA可以保存转化活性达35d以上。研究结果还表明在存在感受态细胞的情况下,生物释放出来的DNA并非直接与沙粒结合,而是优先与感受态细胞结合。推测认为沙吸附DNA的转化活性同DNA的构象及同感受态细胞接触的机会相关,而与DNA的浓度不直接相关。这些结果为研究环境中存在的DNA库及其与混居的微生物间的相互作用,水平基因转移及其生态效应提供了有价值的信息。     

细菌生物膜的结构及形成机制研究进展

细菌生物膜是细菌在特定条件下形成的一种特殊细菌群体结构,菌体被包裹在其自身分泌的多聚物中。近年来,有关生物膜组成结构、形成机制、抗逆性机制及其应用防治等诸方面的研究工作进展迅速,本文主要针对细菌生物膜的结构及形成机制方面的研究进展进行了介绍。     

不同培养时期的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌间发生的跨属自然遗传转化

携带穿梭质粒的大肠杆菌与作为受体的枯草芽孢杆菌分别培养至不同生长阶段混合均匀后静置40min,涂布选择性平板,37℃培养30h后得到一定数目的转化子,DNaseⅠ敏感实验证实质粒是通过自然遗传转化而非其它形式发生转移。实验发现大肠杆菌可以在特定生长时期向胞外分泌DNA,并且在对数期具有最高的提供质粒的能力,而生长后期的细胞因为体系中DNase量的增加转化频率下降。进一步的研究发现枯草芽孢杆菌在营养丰富的LB培养基中也具有与基本培养基中相当的转化能力,并且在对数生长前期具有较高的转化频率。     

枯草芽孢杆菌在琼脂平板上进行的自然遗传转化

本文对发生在琼脂平板上的枯草芽孢杆菌自然遗传转化进行了初步的研究。结果表明,在相同条件下,该菌在琼脂平板上的自然转化率明显高于传统液体转化,并且转化反应对ＤＮａｓｅ 的抗性增强,通常被认为不能建立感受态的ＬＢ 培养物当涂布到平板上后也很快具有了自然转化的能力,说明在固相物表面进行的转化过程与传统的液体法存在一定的差异。在琼脂平板上,也能观察到具不同遗传标记的菌株间进行的细胞间自然转化。     

南方鲇线粒体DNA物理图谱及分析

南方站（SilurusmeridionalisChen）是我国重要的淡水经济鱼类,广泛分布于长江和珠江流域。南方站与翎（Sasotus）形态结构相似,生态习性相近,两者曾长期混淆在一起,1987年成庆泰等将其定为一新种［’1。目前,对南方站的研究主要集中于生物学特性、生长发育、生理生化及营养成分分析、组织学及繁殖生物学等方面,有关其线粒体DNA（mitochondrialDNA）方面的研究还未见报道。为进一步开展南方翎的遗传育种研究工作,我们构建了南方都mtDNA的物理图谱并进行了初步分析。l材料和方法1．l材料来源南方站由湖北省水产科学研究所提供。1…