P75NTR在绒山羊毛囊生长周期中的表达

实验旨在研究绒山羊（Capra hircus）毛囊生长相关基因的表达规律,为绒山羊分子育种提供参考。本实验采用RT-PCR、组织免疫荧光、Western blot等方法,研究神经营养素受体P75^NTR在辽宁绒山羊皮肤组织中的表达和分布情况。结果表明：在毛囊生长周期的三个时期,均监测到P75^NTR mRNA及蛋白的存在,P75^NTR的荧光信号在退行期要强于其他两个时期,且在退行期毛囊外根鞘细胞中检测到P75^NTR的高表达。以上结果表明,P75^NTRmRNA及蛋白的表达与毛囊生长周期变化有一定的相关性,P75^NTR受体在绒山羊的毛囊周期性变化中发挥着重要的功能。     

褪黑素对中国绒山羊在非生绒期促绒生长与绒产量的影响

用简易的外科手术对阿白羊,盖县红山羊及二者杂交改良型绒山羊在梳绒后于其颈部皮下埋植一种含褪黑素的胶囊,经５周后受试羊群开始长绒,而对照群羊则未见绒生长。在９月中旬天然生绒开始时,受试群羊绒已分别长至３－５ｃｍ,,而对照群则刚开始生长至２ｃｍ。表明上述各受试群当年被成功地诱发二次生绒。     

动物模型BLUP法估计内蒙古白绒山羊育种值的研究

应用动物模型ＢＬＵＰ法估计了阿尔巴斯白绒山羊种羊场１９８９－１９９８年共１０个年度３９８１只个体的抓绒量和体重的单性状育种值,以及这两个性状的综合育种值。在模型中考虑的固定效应有年龄效应和性别－群体－年度效应、随机效应有个体的加性效应和个体永久性环境效应。比较育种值选择与表型值选择的结果表明：⑴公羔依据断乳重选择与依据育咱值选择的结果差异较大;⑵育成母羊依据表型值选择与依据综合育种值选择的结果差异     

三个山羊品种KAP8基因的PCR-SSCP分析

目的：为了筛选绒山羊产绒性状的候选基因。方法：采用PCR-SSCP法对三个山羊品种角蛋白辅助蛋白8（KAP8）进行了多态性研究。结果：三个品种中KAP8.1均未出现多态,而KAP8.2均出现了三种带型：AA、BB和AB。Hardy-Weinberg分析表明辽宁绒山羊和黎城大青羊未达到平衡状态,辽-苛高代杂种山羊达到了平衡。测序结果显示,和Genebank登陆序列相比,AA和BB均发生了碱基变化。其中AA型出现了以下变异：216bp（G-A）,217（A-G）,BB型出现了以下变异：216bp（G-A）,232bp（C-T）。分析表明AA型变异造成了氨基酸序列发生了变化（R-K）,而BB型突变未造成氨基酸发生改变。结论：KAP8.2可能是影响绒山羊产绒性状的基因之一。     

成年绒山羊皮肤干细胞克隆定向诱导分化为成骨细胞

成年绒山羊皮肤经0.02%中性蛋白酶4℃过夜消化,分离表皮,37℃消化30min,经100μg/mlIV型胶原处理的培养皿黏附10min筛选干细胞,培养到第二代时采用有限稀释法进行单细胞克隆纯化,角蛋白15、角蛋白19免疫荧光染色部分细胞强阳性,添加成骨细胞诱导液定向诱导分化,经碱性磷酸酶、茜素红染色鉴定为阳性,表明分离的细胞是皮肤干细胞且有能力诱导分化为成骨细胞。     

微卫星DNA标记在绒山羊群体中的初步研究

利用7个微卫星标记对4个绒山羊品种共计18个个体的遗传多样性进行了研究。计算了有效等位基因数、遗传杂合度、遗传距离等,分析了群体相关的遗传变异。结果表明：辽宁多绒山羊的有效等位基因数最大,杂合度最高,而辽宁绒山羊的有效等位基因数最小,杂合度最低;奈氏遗传距离说明：库布旗杂种绒山羊和辽宁多绒山羊的亲缘关系最近,而和阿尔巴斯绒山羊的亲缘关系最远。     

内蒙古白绒山羊若干数量性状遗传参数的研究

本研究应用女母回归法、公畜内女母回归法、半同胞相关法和单元内半同胞相关法对内蒙古阿尔巴斯白绒山羊的产绒量、绒厚、毛长、体重、绒伸直长度和细度等六个性状的遗传参数进行了估测。结果表明：（1）绒量遗传力介于0.26～0.45之间;绒厚遗传力介于0.33～0.56之间;毛长遗传力介于0.23～0.32之间;体重的遗传力介于0.1 6～0.36之间;绒伸直长度遗传力为0.24;绒细度的遗传力为0.14。（2）产绒量与绒厚、绒厚与毛长、长度与绒厚、长度与毛长的遗传相关分别介于0.33～0.79、0.51～0.69 、0.38～0.60、0.74～0.90之间,存在较强的正向遗传相关;绒量与毛长、绒量与体重、绒厚与体重、细度与绒厚、细度与绒量、细度与体重的遗传相关分别为0.11～0.38、0 .06～0.17、0.15～0.36、0.02～0.11、0.24～0.35、0.13～0.32之间,存在较弱的正向遗传相关;毛长与体重、长度与绒量、长度与体重、长度与细度、细度与毛长之间的遗传相关介于-0.14～-0.28、-0.09～-0.20、-0.18～-0.23、-0.27～-0.31、-0 .17～-0.28之间,存在中等偏弱的负向遗传相关。（3）绒量、绒厚、毛长、体重的重复率分别为0.42、0.27、0.59、0.18。     

绒山羊分子生物学数据库的设计与构建

结合国内外对绒山羊的分子生物学研究,利用已有的遗传多态、基因序列和结构、功能等方 面的数据,以计算机网络为载体,参考国际通用数据库的格式,建立一个简洁、友好、通用而且专用 性强的绒山羊分子生物学数据库。该数据库主要由文献索引库,基因组学库及绒山羊知识库组成。 数据库的建立为绒山羊的分子生物学研究提供一个良好的数据平台,为从事绒山羊遗传多态、遗传 进化、分子育种、绒毛生长机理等方面的理论和应用研究的工作者提供方便和帮助,并为探索其他 草食家畜分子生物学数据库的构建积累经验。     

褪黑素对绒山羊皮肤FGF5等绒毛生长相关基因的影响

目的:旨在分析埋植褪黑素后对绒山羊皮肤绒毛生长相关基因表达的影响,进而探讨褪黑素促绒毛生长的机理。方法:以内蒙古白绒山羊为研究对象,选取体况相近的4月龄母羔羊10只,按试验要求随机分为2组,处理组按照2mg/kg BW(体重)的剂量每两个月耳后皮下埋植褪黑素,对照组不埋植,试验时间为1年。实验开始后每月采集绒山羊体侧皮肤和毛样,利用荧光定量PCR技术检测9个绒毛生长相关基因的表达变化。结果:(1)埋植褪黑素后各个基因的平均表达水平都有所上调,其中显著上调FGF5(P<0.0001),而对β-catenin、MSX-2、Wnt10b、BMP2、BMPRIB、NTRK3、Delta1、hairless等无显著影响(P>0.05);(2)埋植褪黑素明显提高了FGF5与hairless的相关性,并且使FGF5与β-catenin、NTRK3的相关性由负相关变成正相关,与Wnt10b的相关性降低,FGF5与其余4个基因的相关性变化不大。结论:结果提示,褪黑素上调绒山羊皮肤FGF的表达,影响FGF5与hairless、β-catenin、NTRK3之间的相关性;山羊中FGF5基因对被毛表型的作用与其他动物不同;褪黑素对复杂组织和单个细胞的作用不同;MAPK信号通路是受褪黑素影响最大的一个信号途径。推测褪黑素可能通过调节绒山羊皮肤中RORα来发挥作用,影响FGF5与hairless、β-catenin、NTRK3和Wnt10b等的相关性,同时抑制MSX2和BMP2的功能,进而促进绒毛的生长。     

CRISPR/Cas9编辑绒山羊FGF5基因细胞株的建立

拟利用CRISPR/Cas9技术建立编辑FGF5基因的绒山羊细胞株。在FGF5基因的第一外显子设计靶点并合成gRNA靶点引物,构建2个编辑FGF5基因的Cas/gRNA真核表达质粒载体。电穿孔法转染绒山羊成纤维细胞后T7核酸内切酶（T7E1）检测载体活性,选择活性最高的载体转染细胞,单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。经测序分析共获得20个FGF5基因敲除细胞株（包括FGF5^+/-和FGF5^-/-）,总突变率为14.81%。双敲除突变细胞株可作为供体细胞进行重构胚构建,为创造高产绒性状的FGF5基因编辑绒山羊奠定基础。