W135群脑膜炎球菌发酵工艺的研究

为研究A、C、Y、W 135群流脑多糖疫苗,针对W 135群脑膜炎球菌的生长特性,采用国产50L发酵罐,针对流脑半综合液体培养基中葡萄糖浓度;培养温度、菌种接种浓度、pH、通氧量及搅拌速度等因素对W 135群脑膜炎球菌生长的影响,选择最适的培养条件。结果表明,选择半综合培养基中补加1%的葡萄糖培养效果良好,菌种接种浓度直接影响多糖复合物产量;最适pH值6.5~7.5的范围可维持W 135群链球菌快速生长;温度控制在36.5±0.2℃可得到较高的培养产物;培养过程中加大通气量及搅拌速度对培养结果有明显改善。确立了W 135群脑膜炎球菌的最适培养条件,在确定培养条件后连续进行3批500L罐放大中试培养,达到规模化生产要求。     

SARS病毒NS-1株稳定性及培养条件的研究

用SARS病毒NS-1株接种Vero细胞,37℃培养,于培养1、2、3、4d收获病毒液,分别置-70℃冻融和4℃释放,于不同时期取样进行病毒滴定。结果显示,SARS病毒NS-1株各代次培养特性和形态学变化完全相同,有较好的抗原特异性,病毒滴度稳定,4℃保存125d,滴度下降2．25lgCCID50／ml,-70℃保存6个月,滴度未见明显下降。SARS病毒NS-1株未经冻融或释放,1d收获的病毒滴度比2、3、4d收获的病毒滴度低,经冻融或释放,1、2、3、4d收获的病毒滴度无明显区别,病毒收获时的病毒滴度与形态学变化成正相关。不同接种条件收获的病毒液,病毒滴度无明显区别。SARS NS-1株有较好的遗传稳定性和保存稳定性,培养2d,4℃释放收获病毒液,细胞悬液与病毒混合接种更简单,易操作,更适合疫苗规模生产。     

含硫氰酸根离子的乳过氧化物酶-I--H2O2系统对Pg和Fn生长的影响

目的研究含生理浓度硫氰酸根离子(SCN-)的乳过氧化物酶(LP)-I--H2O2抗菌系统对牙龈卟啉单胞菌(Pg)和具核梭杆菌(Fn)生长的影响.方法 Pg和Fn各分5组每组含Pg(6.0×108/ml)或Fn(1.0×108/ml)菌悬液、含不同浓度I-的LP-I-系统、SCN,在37 C震荡水浴分别培养0 min(加H2O2前)和30min,5μl DTT终止反应,10倍浓度系列稀释,接种于BHI-S琼脂培养基,厌氧培养4 d,并计数CFU.结果 I-浓度增加至大于等于500 μmol/L时,LP-I-抗菌系统抑菌作用明显高于单独的LP-SCN--系统(P＜0.05).结论生理浓度SCN-存在时,通过增加I-的浓度可达到显著提高LP-I-抗菌系统抑制Pg和Fn生长的作用.     

一株与鳆发光杆菌最相似细菌的研究

对从海鲜食品中分离到的1株少见细菌M1进行系统分类鉴定。采用常规方法[1]进行分离培养,以形态学特征、培养特性、生理生化特征以及分子生物学等方法对其进行分类鉴定。结果可见,该菌株为革兰氏阴性杆状细菌,16SrDNA核甘酸序列测定与鳆发光杆菌最为相似,生理生化特征与发光杆菌属、弧菌属相近,但都不完全相符,而与鳆发光杆菌相似性最高。     

L-乳酸细菌培养条件的优化

实验通过对L-乳酸细菌(Lactobacillus casei FH-2)菌体生长、产酸速率、耐酸水平、高糖发酵性能的优化,实现了优化该菌生长和条件的目的。并对培养基中不同辅料的添加进行了研究。结果证明：共同加入麦根一麸皮浸泡液时,可以提高乳酸的产量,其最佳方案为50℃、4h、1％麸皮浸泡液和2％麦根。乳酸产量为40．5g/L。结论：实验通过优化L-乳酸细菌的发酵条件提高了乳酸的产量。     

植物体细胞胚胎发生的信号传导

概述植物体细胞胚诱导中生长素、细胞分裂素、钙、活性氧信号分子作用机制研究进展,以及体细胞胚成熟培养与 ABA、蔗糖、水分胁迫信号的相互关系．     

无饲养层培养人胚胎干细胞方法的建立

人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hES细胞)是当前医学研究的热点之一．然而hES细胞培养条件苛刻,通常需要采用鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEFs)饲养层来维持其未分化状态,成为目前hES细胞研究的瓶颈之一、本实验成功地将hES细胞接种在细胞外基质包被的六孔板上培养,传代20次后细胞仍然保持良好的未分化状态,各种hES细胞生物学特性(如表面标志物SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-8l,OCT-4,碱性磷酸酶及体内外分化潜能等)均无改变;其冻存、复苏效果与生长在饲养层上的hES细胞无明显差异．因此,该无饲养层培养体系可以用于培养hES细胞,并为hES细胞转基因研究及大规模培养打下良好的基础．     

不同EGF和胰岛素水平对体外培养的大熊猫皮肤成纤维细胞的影响

用DME∶Ham sF12(1∶1)培养液,添加3个水平的EGF和2个水平的胰岛素,组合成6种培养体系(CS)分别培养大熊猫皮肤成纤维细胞。通过对细胞生长速度和染色体数目变异率进行测定,测得在添加10μg/ml的胰岛素和40 ng/ml的表皮生长因子的培养体系中,以1.673±0.185×105/ml密度接种细胞,经3.5天,密度达到6.890×105/ml,其生长速度最快;染色体数目为二倍体的百分率为75.77%。综合衡量,CS-5在本研究中更适合大熊猫皮肤成纤维细胞的培养。     

未授粉子房和胚珠离体培养诱导植物雌核发育研究进展

未授粉子房和胚珠培养离体诱导雌核发育的研究已近半个世纪,目前共有20科40余种种子植物的未授粉子房或胚珠离体培养诱导了雌核发育,但成功获得雌性单倍体的植物只有10科25种2变种。本文重点对离体雌核发育的胚胎学的研究资料进行综述,包括离体条件下胚珠中胚囊的发育状况、雌核发育的模式、雌性单倍体形成的途径以及自发胚乳的离体诱导并指出该领域研究中存在的问题,进一步在研究方法上提出了设想和建议。     

病毒分离和PCR-RFLP法对急性结膜炎标本中腺病毒感染及其型别的分析

目的分析2003年下半年收集的哈尔滨医科大学第一临床医学院急性结膜炎标本中的腺病毒(Adenovirus,AdV)感染情况及其型别。方法采集59例临床确诊为急性结膜炎患者的结膜拭子标本,在观察和分析接种细胞的病变(CPE)情况的基础上,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR—RFLP)法,特异性检测CPE阳性细胞中腺病毒核酸的存在情况,并对PCR阳性扩增产物进行病毒型别的分析。结果70．7％(41／59)的急性结膜炎标本接种于培养细胞后可以引起明显的CPE;其中,53．6％(22／41)的CPE阳性标本可以扩增出腺病毒核酸,RFLP分析证实68．18％(15／22)的腺病毒感染为Ad3型,31．82％(7／22)的腺病毒感染为Ad7。结论2003年下半年哈尔滨市急性结膜炎主要以腺病毒3、7型感染为主。提示结合病毒分离培养和PCR—RFLP方法,可以广泛应用于急性结膜炎相关的病毒感染及其型别的进一步分析与研究。