RNAi载体导入黄瓜的遗传转化体系北大核心CSCD

以黄瓜(Cucumis sativus)子叶和子叶节为外植体,利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法建立黄瓜遗传转化体系并进行优化,将南方根结线虫(Meloidogyme incognita)寄生相关基因的RNA干扰载体导入黄瓜,通过潮霉素(Hyg)浓度梯度筛选得到99株潮霉素抗性植株。经PCR和Southern-blot检测,获得10株目的基因以单拷贝形式整合的转基因黄瓜,子叶和子叶节的Southern-blot阳性率分别为13.9%和6.9%。该研究建立并优化了RNA干扰载体导入黄瓜的高效遗传转化体系,成功获得了转基因黄瓜植株。     

两种柱前衍生反相高效液相色谱法测定血液和尿液中游离氨基酸

建立以PITC法和AQC法为柱前衍生试剂测定血液和尿液中游离氨基酸含量的测定方法。采用Waters-e2695操作系统,色谱柱为Shim-vp,ODS(250mm×4.6mm,5μm)(日本,岛津公司),以甲醇/乙腈/水和醋酸钠溶液(pH 6.5)为流动相,梯度洗脱。分别采用紫外和荧光检测器对血液和尿液中游离氨基酸进行含量测定。结果显示,两种衍生化方法灵敏度好、分离度高,具有良好的线性范围(r>0.990 0),准确度高(平均回收率为75.1%～127.0%),进样精密度好(RSD为0.12%～3.42%)。PITC法在尿液中游离氨基酸含量测定中显示了良好的测试准确性;而AQC法测定尿液中组氨酸、苏氨酸、脯氨酸超出线性范围,需要对尿样的前处理进行深入研究。     

可溶性人TNFR75的表达、纯化及活性鉴定

将编码可溶性人TNFR75 (shTNFR75 )的cDNA与酵母整合载体pPICZαA重组 ,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞GS 115 ,获得了shTNFR75在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞 .甲醇诱导的pPICZαA shTNFR75 GS115重组酵母工程细胞培养上清 ,经CNBr活化的TNF Sepharose4B亲和层析柱纯化 ,纯化产物纯度为 92 % ;经Western印迹分析 ,可被TNFR75单克隆抗体特异性识别 ,分子量约为 31kD ;受体配体结合试验 ,shTNFR75纯化产物与rhTNFα和rhTNFβ的结合能力与其阳性对照基本相同 ;中和试验显示 ,该shTNFR75可完全阻断TNF对L92 9细胞的细胞毒活性 .表明酵母系统分泌表达的shTNFR75产物具有良好的结合TNF的能力 .     

物联网助力营养工作发展

作为多种高新科技跨学科联合运用的结晶,在国家产业升级和创新驱动发展战略的引导下,物联网正在快速融入工作和生活的方方面面,其“万物互联”的特性能够大幅提升营养工作的信息获取能力,解决营养工作信息获取“最先一公里”的困局,为精准化营养工作奠定基础。     

新疆维吾尔族2型糖尿病人群肠道中Faecalibacterium prausnitzii的定量研究

目的定量检测新疆维吾尔族2型糖尿病(T_2DM)和糖耐量正常(NGT)人群肠道中的普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii)水平。方法提取上述人群粪便细菌总DNA后,采用16SrDNA基因实时荧光定量PCR对普拉梭菌水平进行定量检测;运用Pearson分析普拉梭菌水平与研究对象的空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、体重和体重指数(BMI)的相关性。结果 (1)16S rDNA基因实时定量PCR结果显示:与新疆维吾尔族NGT组相比,普拉梭菌水平在T_2DM中较低(t=2.590,P=0.014),差异有统计学意义。(2)新疆维吾尔族上述人群肠道中普拉梭菌水平与FBG呈负相关(r=-0.434,P=0.012),体重呈负相关(r=-0.359,P=0.044),TG呈负相关(r=-0.410,P=0.034)。结论 Faecalibacterium prausnitzii水平在肠道中降低可能与2型糖尿病的发病有关,其机制需进一步研究探讨。     

抗生素2,4二乙酰基间苯三酚作为荧光假单胞菌2P24菌株生防功能因子的实证分析

荧光假单胞杆菌2P24菌株分离自小麦全蚀病自然衰退土壤,它是酚类抗生素2,4二乙酰基间苯三酚（2,4DAPG）的高产菌,对多种土传病害具有较好的防治能力。利用同源重组构建2,4DAPG合成基因的定位突变体,并对突变体进行基因互补,通过检测突变菌株和恢复突变菌株抗生素产量和生防效果确定2,4DAPG在菌株2P24生防功能中的作用。实验中,定位突变体丧失产生抗生素和拮抗病原菌的能力,而恢复突变体的抗生素产量和拮抗能力均恢复至野生菌水平。在对番茄青枯病的防病试验中,2,4DAPG突变体的防效低且下降快,而恢复突变体的生防能力与野生菌相当,且效果稳定。由此可确定2,4DAPG是菌株2P24防治番茄青枯病的主要因子,在防效上起关键作用。     

靶向表达TNFR75的逆转录病毒载体的构建及其产毒细胞系的建立

 将编码人 TNFR75的 c RNA与血管内皮细胞特异性启动子 (KDRp)及缺失自身启动子的逆转录病毒载体 p LXSN- D2 99重组 .重组质粒 p LXSN- D2 99- KDRp- TNFR75与脂质体共转染包装细胞 PA31 7,经抗生素 G41 8(60 0 mg/L)筛选 1 4d,获得 1 5个稳定的产病毒细胞克隆 .将各细胞克隆分别扩大培养收集所产病毒上清 ,并感染 NIH3T3细胞检测病毒滴度 ,其中 1个克隆滴度达 2×1 0 5CFU/ml.提取该克隆细胞总 RNA进行 RT- PCR分析 ,获得的 c DNA片段长度与目的基因一致 .结果提示 ,建立了 TNFR75反转录病毒产毒细胞系 .     

PSP94-TNFαD11a融合基因在NIH3T3细胞中的表达及其产物活性分析

 为了分析 PSP94- TNFαD1 1 a融合基因的表达和表达产物的生物学活性 ,将含该融合基因的质粒 pc DNA- PSP94- TNFα D1 1 a转染 NIH3T3细胞 ,72 h后收集细胞培养上清 ,并提取细胞总RNA,经 RT- PCR,得到与目的基因长度相符合的 c DNA片段 ;以 PSP94c DNA为探针 ,对 RT-PCR产物进行 Southern印迹分析 .结果表明 :转染 PSP94- TNFαD1 1 a融合基因的 NIH3T3细胞 ,其 RT- PCR产物杂交信号为阳性 .细胞培养上清用 TNF抗体行 Western印迹和 ELISA分析 ,检测结果为阳性 .生物学活性分析表明 ,细胞培养上清不仅具有 PSP94抑制人前列腺癌细胞 PC- 3生长的活性 ,而且显示出 TNFα对 L92 9细胞的细胞毒作用 .以上结果表明 ,pc DNA- PSP94- TNFαD1 1 a质粒能够正确表达目的基因 PSP94- TNFα D1 1 a,且表达的 PSP94- TNFαD1 1 a融合蛋白具有预期的双重生物学活性 .     

94个氨基酸的前列腺分泌蛋白与TNFα衍生物的协同抗肿瘤作用(英文)

体外研究显示,重组PSP94与重组TNFα衍生物11a(rhTNFαDlla)有协同抗前列腺癌的作用。将编码这两种蛋白的基因与真核表达载体pcDNA30重组,构建成pcDNAPSP94TNFαDlla真核表达质粒,两基因中间通过一个编码6个氨基酸的人工接头连接。在体外,对pcDNAPSP94TNFαDlla质粒表达PSP94TNFαDlla蛋白的生物学活性鉴定表明,该蛋白即具有PSP94抑制前列腺癌细胞生长的活性,又具有TNFαDlla对L929细胞的细胞毒作用。肌肉注射该质粒DNA,注射后第9天血液中可检测到目的蛋白的表达,目的蛋白浓度的高峰期约在注射后第14天,第25天仍可检测到目的蛋白的表达。该质粒DNA以50μg只的量给人前列腺癌裸鼠模型骨四头肌内注射,同时设pcDNAPSP94、pcDNATNFαDlla、pcDNA30空载体和生理盐水对照组。注射后第20天处死动物,抑瘤率分别为:pcDNAPSP94TNFαDlla组24%,pcDNAPSP94组19%,pcDNATNFαDlla组瘤体大小与生理盐水组无明显差异。以同样方法给药,pcDNAPSP94TNFαDlla质粒DNA对小鼠Lweis肺癌的抑制率31%,是pcDNAPSP94组抑瘤率的22倍,是pcDNATNFαDlla组抑瘤率的21倍。提示,PSP94与TNF具有协同抗肿瘤的作用 。     

新疆维、哈两民族粪样中奇异菌簇和产气柯林斯菌属水平与2型糖尿病的相关性研究

目的检测新疆维吾尔族、哈萨克族糖耐量正常人群及2型糖尿病患者粪便中奇异菌簇和产气柯林斯菌属的水平,分析奇异菌簇和产气柯林斯菌属与2型糖尿病的相关性。方法收集新疆维吾尔族、哈萨克族糖耐量正常人群及2型糖尿病患者血样和粪便样本,采用16S r DNA实时荧光定量PCR技术检测粪便样本中奇异菌簇和产气柯林斯菌属的水平;运用Pearson分析目标菌属水平与4组人群的空腹血糖(FBG)、年龄、身高、体重、体重指数(BMI)、腰围、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的相关性。结果 (1)与哈萨克族糖耐量正常组比较,该民族T2DM组中奇异菌簇、产气柯林斯菌属水平均降低(P=0.012,P=0.024),两民族糖耐量正常组之间奇异菌簇、产气柯林斯菌属水平差异有统计学意义(P=0.025,P=0.007);(2)奇异菌簇水平与HDL-C(r=0.281,P=0.031)呈正相关,与体重(r=-0.514,P=0.000)、BMI(r=-0.400,P=0.002)、TC(r=-0.503,P=0.000)、LDL-C(r=-0.581,P=0.000)水平呈负相关;产气柯林斯菌属水平与HDL-C(r=0.550,P=0.000)水平呈正相关,与体重(r=-0.449,P=0.000)、BMI(r=-0.432,P=0.001)水平呈负相关。结论肠道中奇异菌簇和产气柯林斯菌属,可能与与新疆维吾尔族、哈萨克族2型糖尿病患者的脂代谢紊乱密切相关。