随机引物在分子生物学研究中的应用

随机引物指非特异序列的寡聚核苷酸作为DNA合成过程中的引物, 是相对于特异引物的概念.90年代它与PCR技术结合衍生了几项新技术:采用不同长度随机引物进行DNA指纹分析而衍生出的RAPD、AP-PCR及DAF方法; 进行mRNA多态分析的“差异显示”; 以及rPCR, T-PCR等技术. 以RAPD为例介绍了随机引物PCR的技术特点及其在分子生物学研究中的应用.     

松毛虫利用初步研究

马尾松毛虫(Dendrolimus punctatus Walker)发生广,繁殖率大,是森林的大害虫。为了加速防治,我们开展了松毛虫利用的研究,现将初步研究结果整理于后供参考。 (一)松毛虫幼虫制肥试验 1.松毛虫含肥量的分析及与其他常用农家肥料的比较 我们将松毛虫幼虫杀死后与水各半掺后置于缸中,加盖让其腐烂,然后将所浸的液体进行了肥分的分析。其结果为含氨态氮0.4365％,全量氮0.625％,含全磷0.55％,含全钾0.41％,完全证明了松毛虫含肥量是很高的。现将松毛虫与其他农家常用肥料的比较列表于下:     

斑管巢蛛生物学特性的研究

斑管巢蛛(Clubiona reichlini Schenkel,1944)是桔园蜘蛛中的优势种之一,在湖南长沙一年可发生2—3代,田间世代重叠。以成、若蛛越冬,若蛛4—6次蜕皮发育为成蛛。雌、雄蛛均可多次交配,雌蛛-生平均产卵362.5粒,孵化率为90.8％。世代平均历期133.6天,寿命236.6天,性比♂∶♀=1∶1.9。在桔园中捕食卷叶蛾的低龄幼虫;粉虱、蜡蝉、花蕾蛆的成虫及雄蚧等多种害虫;低龄若蛛嗜食桔全爪螨,捕食量高达44头/日。经室内观察,斑管巢蛛在无水无食的条件下可生存27—65天。 斑管巢蛛是果园、茶园、森林和棉花等旱地作物农林蜘蛛中优势种群,尤以山丘蜜桔园中发生量大,据长沙地区桔园调查,其个体数量占总蛛量的52.3％。它生活力强,捕食量大,对上述生境中的农林害虫有一定控制作用。但是目前国内外未曾见到有关斑管巢蛛生物学特性的研究报道。因此,我们从1983—1985年在室内、外进行了较系统的试验和观察,现将结果整理如下。     

长沙城市斑块湿地资源的时空演变

利用GIS技术,对长沙市1955、1972和1990年地形图湿地数据及2007年长沙市湿地资源普查数据进行提取和分析,选取最具代表性的斑块湿地作为研究对象,从时间与空间、动态与静态、规模与填埋等视角,研究50年来城市斑块湿地生态系统各层次要素的时空演变过程和变化规律.结果表明:(1)时间层次上,长沙城市斑块湿地总面积呈现先增后减、总体增加的态势;斑块湿地面积变化幅度不断加大,速率逐步加快;(2)规模层次上,面积在32 hm2规模以下的斑块湿地呈增加态势,32 hm2规模以上斑块湿地呈减少态势;(3)动态空间层次上,被填埋斑块湿地的比例在建成区和郊区呈相反的演变结果;(4)静态空间层次上,斑块湿地密度在建成区范围和郊区范围演变结果相背.研究显示,伴随着城市化进程,不同时间尺度、不同规模尺度、不同空间属性、不同空间状态的城市斑块湿地常常呈现差异很大、甚至是截然相反的演变结果;无论是动态空间还是静态空间,建成区与郊区的空间分界线往往是城市斑块湿地演变态势的分水岭.     

人工湿地不同季节与单元之间根际微生物多样性

采用选择性平板培养基法和PCR-DGGE法比较研究了三级垂直潜流人工湿地污水处理系统中不同季节与单元之间根际微生物数量与多样性,结果表明,随着“秋-冬-春-夏”的季节的变化,2种方法测定的微生物数量都呈现“高-低-高”季节性变化现象,但选择性平板培养基法显示秋季数量最多,PCR-DGGE法显示夏季数量最多.从三级处理单元的1-3级,两种方法测定的微生物数量都呈现“低-高-低”的规律.除土样11外,其余相同季节的土样均出现聚集在同一个分支下.得到的4个差异序列(YP1-YP 4),经BLAST比较,分别找到同源性最近的已知类群,分别为肠杆菌属、弧菌、欧文氏菌、产酸克雷伯菌.BLASTX比较发现YP1与细菌代谢分解有机物有关;YP2蜡样芽胞杆菌生命活动相关,具有解磷的作用;YP3与APOE载脂蛋白e功能相似,参与细菌的分解代谢;YP4功能可能与细菌去氮有关.     

帕金森病相关蛋白质LRRK2在脑中的表达分布与定位分析

帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种最常见的神经退行性运动障碍,常染色体显性遗传PD可由LRRK2 (leucine-rich repeat kinase 2)基因突变引起.原核表达和纯化得到LRRK2多肽与GST的融合蛋白,免疫新西兰雄兔,得到了anti-LRRK2兔多克隆抗体. 抗体用途分析实验表明,自制的anti-LRRK2兔多克隆抗体可用于Western 印迹, 免疫组织化学,免疫细胞染色等实验.利用自制的抗体,Western 印迹证明,LRRK2在大鼠脑主要神经解剖学部位均有表达.免疫荧光双染色的结果表明,LRRK2定位于线粒体.本研究对了解LRRK2在PD中的分子生物学功能具有重要的意义.     

胎膜组织贴壁细胞：一种新的间质干细胞来源

[目的] 建立体外分离纯化胎膜组织贴壁细胞（fetal membrane derived adherent cells,FMDACs）的方法,并且研究FMDACs的基本生物学特性。[方法] 用胰酶消化法分离FMDACs,体外传代培养,并进行向成骨、成脂细胞的诱导分化培养,流式细胞仪、免疫细胞化学检测表面抗原,核型分析及致瘤性实验。[结果] 成功地进行了FMDACs的原代培养及传代培养,FMDACs具有良好的增殖能力,表达CD44、CD29,不表达CD34、CD14、CD45,经诱导后能够分化为成骨细胞和成脂细胞,传代多次后核型正常,无致瘤性。[结论] 胎膜组织中可以分离得到具有间质干细胞特性的贴壁细胞,具有较强的自我更新和多向分化能力,遗传背景稳定无致瘤性。FMDACs为临床应用进行细胞治疗和基因治疗提供了新的来源。     

人类人工染色体构建及其作为基因载体的价值

人类人工染色体（ＨＡＣ）作为基因载体将解决基因治疗存在的一些关键问题。本文探讨了在不完全了解着丝粒、复制起始点、端粒等人类以体基本功能单位的情况下构建ＨＡＣ的三种策略。利用染色体基本功能单位在细胞内构建成功的第一代ＨＡＣ,解决了ＨＡＣ构建的一些难题,同时也带来了某些新的问题。ＨＡＣ作为基因治疗载体具有很多优势,但第一代ＨＡＣ离它作为基因治疗载体还相距很远．为此,作者正在进行解决这些问题的尝试。     

微卫星荧光标记基因组扫描

微卫星荧光标记基因组扫描为 2 0世纪 90年代发展起来的一项分子生物学技术 ,在基因定位、个体识别等方面有广泛的应用 .文中对其原理、策略、分析方法及应用作了论述 ,并探讨了它的发展前景 .