文蛤形态学及其亚显微结构的研究

文蛤Ｍｅｒｅｔｒｉｘ ｍｅｒｅｔｒｉｘＬｉｎｎａｅｕｓ为有名的经济贝类。本文从外形、色泽、斑纹、大小和绞合部等方面详细描述了文蛤的形态特征,并对文蛤的内部解剖结构及其消化、生殖系统的亚昨微结构进行了报道。     

温度和盐度对皱肋文蛤幼贝存活与生长的影响

在室内控制条件下,研究了不同海水温度和盐度对皱肋文蛤(Meretrix lyrata)幼贝存活与生长的影响。结果表明:皱肋文蛤幼贝适宜生存温度为12.2-35.6℃,最适生存温度为24-30℃;适宜生长温度为23.5-33.0℃,最适生长温度为27-30℃,属典型的南方滩涂贝类。皱肋文蛤幼贝适宜生存盐度为4.3-40.5,最适生存盐度为11-31;适宜生长盐度为17.1-33.4,最适生长盐度为19-23,属广盐性滩涂贝类。该贝低温和高温敏感起始点分别为21℃和33℃;低盐和高盐敏感起始点分别为9和33。皱肋文蛤幼贝对极端温、盐度具有一定的耐受力:在37℃下仍可保持6d,100%不死亡,在39、41℃下分别在3d和5d内全部死亡;在4、6、8、10、12℃下则可分别100%存活3、4、6、9、11d;在盐度为0、5、7、9时保持100%存活的时间分别为5、8、10、10d;在盐度为33、35、37、39时保持100%存活的时间分别为7、5、3、3d,盐度41时当天即出现死亡。     

锌诱导金属硫蛋白在文蛤不同组织中的表达

采用体外暴露法对文蛤Meretrixmeretrix进行锌(0、1.5mg/L、3mg/L、6mg/L)染毒,研究不同染毒浓度的锌离子在不同染毒时间下,诱导金属硫蛋白(metallothionein,MT)在文蛤足、肝胰腺、鳃、外套膜组织中的表达差异。取经不同浓度的锌溶液在染毒2d及4d后的不同组织匀浆、离心后经Bio-GelP-10凝胶柱层析纯化,用TU-1810紫外可见分光光度计测定每个样品中金属硫蛋白的吸光值。实验结果显示:同一浓度锌离子染毒后,MT在文蛤4个不同组织中的表达量差异较显著,一般为足>肝胰腺>外套膜>鳃;不同染毒浓度的锌离子在不同染毒时间下诱导MT在不同组织中的表达也不同,具有一定的组织差异性和规律性。     

利用线粒体COI和微卫星标记分析文蛤7个地理群体的遗传变异

利用线粒体细胞色素氧化酶亚基I(COI)和微卫星标记分析了文蛤7个地理群体(朝鲜新义州,辽宁丹东、蛤蜊岗和盘山,山东东营,江苏如东和启东)的遗传多样性和群体分化。PCR扩增获得142条602 bp的COI核苷酸片段,比对到13个变异位点,包括11个转换和2个颠换,定义了22个单倍型,共享单倍型12个,新义州、丹东和启东群体分别拥有特有单倍型。单倍型多样性最高的是如东群体(h=0.900),最低的是东营群体(h=0.600);核苷酸多样性最高的是丹东群体(π=0.00350),最低的是蛤蜊岗群体(π=0.00115)。基于COI数据的Fu's Fs中性检验和核苷酸不配对分析揭示文蛤种群历史上曾经历过群体扩张事件。分子变异分析(AMOVA)表明,群体内遗传变异占71.64%,群体间遗传变异占28.36%,群体间发生显著的遗传分化(P0.05)。7个微卫星标记扩增280个个体共获得54个等位基因,平均等位基因数为7.7个,平均观测杂合度和期望杂合度分别为0.3878和0.7996。江苏群体具有较高的遗传多样性,但7个群体间遗传多样性不存在显著差异(Kruskal-Wallis检验,P0.05)。Hardy-Weinberg平衡检验结果显示49个群体-位点组合中有18个偏离平衡(P0.05),表现为杂合子缺失。单倍型邻接(NJ)树显示聚类未展示地域性特色,但某几个同一或者相近地理群体的单倍型具有聚类现象(如东和启东部分单倍型出现地理聚类)。依据群体间遗传距离以Kimura 2-parameter为模型建立UPGMA系统发育树,显示丹东群体和江苏的如东和启东群体聚为一支,暗示江苏苗种的异地养殖已经污染丹东文蛤的遗传背景。     

可食用文蛤中氧化性胁迫的生物标记物与甲基毒死蜱和草甘膦的生物富集

近几十年期间,在种群和个体受干扰后,对作为早期指示剂的生物标记物的研究受到越来越多的关注。我们用对水生生态系统污染敏感的生物标记物双壳类软体动物(文蛤)来评估两种有机磷杀虫剂(甲基毒死蜱、草甘膦)的影响。文蛤是水生生态系统污染的一种敏感的指示物种。在不同时间段测定文蛤中不同组织的非酶的(谷胱苷肽)和酶的(过氧化氢酶)抗氧化剂,作为文蛤中生物标记物的反应。在实验室条件下,测定了脂质过氧化作用、蛋白羰基含量、总蛋白含量、总脂质含量以及胆碱酯酶的活性。对不同的生物标记与杀虫剂的生物体内积累的相互关系进行了研究。甲基毒死蜱在文蛤组织中具有最大的诱导氧化胁迫的潜能,导致脂质过氧化反应增加并抑制抗氧化剂。而且,鳃是对该反应最敏感的器官。文蛤是一种极好的甲基毒死蜱的积聚者,因为暴露60天后,可以测定到其组织中浓度为824.0 mg/kg w.w的甲基毒死蜱。随着在草甘膦中暴露时间的增加,与背景水平相比,组织中草甘膦的浓度增加大约8×103mg/kg w.w。可以得出这样的结论:在一种生物中测定几种生物标记物是有用的。在双壳类中,蛋白质的羰基诱导可用于双壳类中化学污染物诱导的氧化胁迫的生物指示剂。抗氧化剂的防御成分是敏感的参数,是评估污染的水生生态系统的有用的生物标记物。辅以蛤组织的化学分析,生物标记参数能够提供一种有力的监测工具。     

文蛤弗尼斯弧菌病研究

由江苏南部沿海滩涂死亡文蛤中分离到一种革兰氏阴性杆菌,经系统生理生化特性鉴定为弗尼斯弧菌(Vibrio furnissii)。该菌能利用文蛤汤作为培养基,在25—37℃海水中大量繁殖,具有较强的毒力。用此菌感染健康文蛤,发病症状及死亡情况均与自然发病一致。我们认为江苏南部文蛤大批死亡与文蛤弗尼斯弧茵病流行有关,这在国内外尚未见报道。     

文蛤糖肽MGP0501的分离纯化及性质鉴定

文蛤粗提液经超滤、层析等纯化得到分子量为15.878×103、纯度为96.42%、糖和蛋白质含量各占约55.18%和44.82%的糖肽MGP0501。MTT法和流式细胞术检测证实MGP0501对A549细胞具有体外抗肿瘤活性,对小鼠移植瘤S180的体内抗肿瘤实验检测亦证实其对小鼠移植瘤S180具有体内抑制作用,表明MGP0501是一种具有抗肿瘤作用的糖肽。