PKC-ERK通路在热损伤诱导单核细胞凋亡中的作用

应用流式细胞检测术、Western印迹、激酶活性测定等技术,检测PKC与ERK在热损伤诱导单核细胞株Raw264.7细胞凋亡中的作用。结果显示热损伤导致PKC短暂激活,PKC激活剂佛波脂(PMA)与热损伤联合作用导致PKC持续活化;并且PKC的持续激活抑制热损伤诱导的Raw264.7细胞凋亡,而PKC的抑制可促进细胞凋亡;ERK活性检测显示热损伤抑制ERK磷酸化,而PMA激活ERK磷酸化活化,并且这种激活作用通过PKC;进一步细胞凋亡检测显示ERK抑制剂PD098059可解除PMA对热损伤诱导Raw264.7细胞凋亡的抑制作用,从而提示PKC通过ERK负调控热损伤诱导的Raw264.7细胞凋亡。     

脓毒症单核巨噬细胞特异性结合肽的筛选

利用噬菌体随机肽库展示技术,筛选出与脓毒症单核/巨噬细胞特异性结合的短肽,探索脓毒症治疗的新方法.分别以经过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)处理的人外周血单核细胞株(THP-1)细胞作为筛选的靶细胞,以未经LPS处理的THP-1细胞作为非特异性噬菌体吸附细胞,对噬菌体随机环七肽库进行4轮“差减"筛选,经过细胞ELISA验证阳性噬菌体克隆,对获得的阳性克隆进行DNA测序及生物信息学分析,并进一步利用免疫荧光实验,鉴定噬菌体克隆与LPS处理THP-1细胞的结合特异性.4轮筛选后,随机挑取的噬菌体克隆,测序后得到可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合肽.对去冗余后的七肽进行Clustal W多序列比对分析和BlastP蛋白同源相似性分析,细胞免疫荧光检测确定获得的噬菌体展示七肽可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合.噬菌体随机肽库技术为脓毒症单核/巨噬细胞表面靶位的筛选提供了高效、快捷的筛选体系,实验获得的多肽基序具有高度保守性和细胞特异性,这些多肽的生物活性将是下一步的研究内容.     

一种用于穿透多肽筛选的随机文库的构建及筛选

以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein, EGFP)为示踪物,在pET-14b载体上构建编码12个氨基酸的随机多肽表达文库.建立一种简便、经济、有效的文库筛选方法,从所构建的文库中筛选出细胞穿透多肽（cell-penetrating peptide, CPP）. 采用点突变技术,首先在pET-14b载体多克隆位点NdeⅠ和XhoⅠ之间加入4个限制性内切酶位点,随后在BamH Ⅰ位点后加入三联终止密码子,接着再利用亚克隆的方法在Kpn Ⅰ 和XhoⅠ之间插入EGFP,形成一个新的用于原核表达示踪蛋白的载体pET-14bMCStop/EGFP.最后再利用点突变技术在上述构建的示踪载体的多克隆位点XhoⅠ和BamH Ⅰ之间插入36个随机碱基序列.以His-Tat-EGFP作为工具建立有效的筛选方法,利用这种方法对文库进行筛选. 酶切和测序表明,示踪载体的构建是正确的,且在大肠杆菌中可有效地表达出His标记的EGFP.在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库至少包含了10⁵个独立克隆,其中90%以上的克隆插入的随机片段都是36个碱基.建立的筛选方法是可行的,并用此方法进行了初步的筛选.     

定位试验地耕层土壤植物寄生线虫空间分布特征

采用经典统计学与地统计学相结合的方法,对中国科学院沈阳生态实验站定位试验地耕层土壤中植物寄生线虫的空间分布特征进行研究。结果表明,在田间尺度下螺旋属（Helicotylenchus）、垫刃属（Tylenchus）是上下两层土壤中植物寄生线虫的优势属,矮化属（Tylenchorchychus）为下层土壤中的优势属,这3个属线虫数量占植物寄生线虫总数的92％。除下层矮化属线虫外,上下两层土壤中植物寄生线虫空间变异为48％-100％,其空间自相关范围为35～91m。克里格插值分析表明,上层土壤中植物寄生线虫总数与螺旋属线虫数量、上下层土壤中垫刃属线虫数量呈现出相似的空间分布格局。这些结果反映了不同属的植物寄生线虫沿水平和垂直方向活动性上的差异;由此可以进一步推测垫刃属和矮化属线虫向下迁移能力强于螺旋属线虫。     

土壤有机质模型的比较分析

土壤有机质作为土壤C库,其含量和动态变化对全球C循环、土壤肥力、土壤质量和健康起着重要作用。SOM模型利用经验性的假设和已有数据对土壤有机质含量和动态变化进行模拟,尤其是可以对无法取得足够必要数据的试验进行模拟,所以SOM模型成为定量研究土壤有机质积累分解的重要手段,利用SOM模型有助于对土壤有机质分解机理的研究,并且可通过SOM模型对土壤CO2排放量、植物生产量进行预测。同时也可对农业管理措施做出评估,文中对几种SOM模型进行了概述,尤其对有影响的RothC模型和CENTURY模型进行了比较分析。     

人GST-AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区 ,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶 (GST)融合蛋白表达质粒pGEX KG中 .经酶切、序列鉴定分析后 ,用该重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,并经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST AWP1融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 5 6kD的融合蛋白 .将此融合蛋白免疫新西兰兔 ,经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体 .结果表明成功构建了GST AWP1融合蛋白表达载体 ,在大肠杆菌高效表达了GST AWP1融合蛋白 ,并获得高效多抗 ,为下阶段深入AWP1功能研究提供了重要的基础     

施用缓释尿素对潮棕壤线虫营养类群产生的影响

本试验在中国科学院沈阳生态实验站(41°31′N,123°24′E)进行。该站位于下辽河平原,属于暖温带半湿润大陆性气候,年平均气温7～8℃,年降雨量650～700mm,≥10℃活动积温3300～3400℃,无霜期147～164d。供试土壤为潮棕壤,全氮0.69g·kg^-1,有机质15.52g·kg^-1,全磷0.67g·kg^-1,速效磷11.20mg·kg^-1,速效钾90.10mg·kg^-1,pH 6.7。     

p38丝裂原活化蛋白激酶活性放射自显影测定方法的建立和应用

建立p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）放射自显影激酶活性测定方法,并应用于血管内皮细胞中p38 MAPK活性动态变化的研究.结果表明放射自显影激酶活性测定方法具有很好的量效关系、灵敏性和特异性.在脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激的血管内皮细胞,p38 MAPK在LPS刺激15 min后活性增高,30～60 min达高峰,120 min后活性逐渐下降,较好地反映了LPS刺激的内皮细胞中p38 MAPK活性的动态变化.国内实验室完全有可能和条件,建立本国的放射自显影激酶活性测定方法,并应用于信号转导的研究.     

神农架药用植物

国家对野生药材资源实行保护、采猎相结合的原则,并创造条件开展人工种养。国家重点保护的野生药材物种分为三级:一级:濒临灭绝状态的稀有珍贵野生药材物种;二级:分布区域缩小、资源处于衰竭状态的重要野生药材物种;三级:资源严重减少的主要常用野生药材物种。禁止采猎一级保护野生药材物种。破坏野生药材资源情节严重,构成犯罪的,由司法机关依法追究刑事责任。摘编自《野生药材资源保护管理条例》神农架拥有独特的地理位置和优越的气候条件,是当今北半球中纬度内陆地区保存较为完好的亚热带森林生态系统。她的植物成分丰富多彩,也为药用植物的孕育和繁衍提供了良好的生态条件。据考察,神农架有高等维管束植物3200多种,其中的药用植物达1 800多种。因此,神农架也有了"植物王国、天然药库"的美誉。     

金丝猴保护话今昔

我国野生动物濒危程度不断加剧,有233种脊椎动物面临灭绝,约44%的野生动物呈数量下降趋势,非国家重点保护野生动物种群下降趋势明显。摘编自《中国生物多样性保护战略与行动计划》(2011-2030年)