狂犬病毒aG株糖蛋白在pET原核系统中的表达及纯化

在狂犬病的临床诊断和基础研究中都迫切需要大量纯度高且价廉的狂犬病毒糖蛋白抗原。本文应用带有Ｈｉｓ６尾的ｐＥＴ原核表达系统对狂犬病毒（ＲＶ）ａＧ株的糖蛋白（ＧＰ）进行表达和纯化。构建的融合表达载体ｐＥＴ－ａＧ１和ｐＥＴ－ａＧ２（－５７ｂｐ）分别含有ＲＶａＧ株ＧＰ基因的全序列及删除了为ＧＰ信号肽编码的５８个碱基的序列。用ＳＤＳ 聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹、间接ＥＬＩＳＡ检测都证明表达产物为ＲＶＧＰ,且位于菌体中的包涵体内。经固定化金属螯合层析（ＩＭＡＣ）提纯,ｐＥＴ－ａＧ１表达产物有较高的特异性和纯度,可用作测定ＲＶＧＰ抗体的免疫诊断试剂。     

甲型流感病毒核糖核蛋白的提纯及其部分理化性质的研究

用Triton x-100和DOC裂解、Sephadex G200柱层析和密度梯度超离心方法,首次从流感病毒感染的鸡胚尿囊膜中提纯了甲型流感病毒RNP。经蛋白质和核酸含量测定、补体结台试验、免疫双扩散及SDS—PAGF鉴定,所提纯的RNP与从病毒中提取的RNP相同。并测出粤防77—38毒株RNP的等电点为4.6,沉降系数为56．1 S。     

猪与人甲_3型流感病毒的比较研究——Ⅰ、抗原性及多肽结构分析

比较1978、81、82年从猪中分离出的甲_3流感病毒与同年代人甲_3流感病毒的抗原性及多肽结耕。从血清学、血凝素肽图以及SDS-PAGE电泳图都表明逐年猪甲_3与人甲_3血凝素(HA)及神经氨酸酶(NA)抗原性密切相关。而且膜蛋白与核蛋白也基本相同。更明确表明人的甲_3流感病毒年年不断地极易传给猪。猪中有了甲_3病毒株其NP迁移位置与其它毒株略有不同,文中对此进行了讨论。用~(125)I标记血凝素肽图比较1979、1981、1982、1983年猪与人甲_3毒株,逐年在肽图上都有明显差异,同年不同时间分离的毒株之间,肽图上也略有改变,更进一步表明此法的灵敏性。     

狂犬病毒感染与细胞凋亡

在狂犬病毒感染中,宿主细胞会发生凋亡性坏死.研究表明,在病毒感染过程中,狂犬病毒糖蛋白及基质蛋白均能诱导宿主细胞发生凋亡,有许多凋亡分子参与这个过程并起着作用.理解狂犬病毒感染与细胞凋亡的关系以及凋亡发生的可能机制,能为狂犬病的防治提供一些药物研究上的新思路.     

中国流行的狂犬病病毒时空进化分析

本研究对1931~2009年间分离于中国20个省区的167株狂犬病病毒的N基因序列进行进化分析,以探讨中国狂犬病病毒株的基因分型和分组情况、时间和空间的动态进化。结果显示:从中国分离的毒株都属于基因1型狂犬病病毒,可以分为2个进化分支共计8个组,分支Ⅰ包括1~4组,分支Ⅱ包括5~8组;选择压力分析表明中国狂犬病病毒处于较强的净化选择约束下,狂犬病病毒N基因中的核苷酸突变主要是同义突变;运用贝叶斯中的马尔科夫链的蒙特卡洛方法估计中国狂犬病病毒N基因核苷酸的平均碱基替代率为4×10-4替代/位点/年,共同祖先出现的时间不超过2000年前;迁移分析表明中国狂犬病病毒株存在跨地域传播。     

狂犬病毒街毒株全长基因cDNA克隆的构建及鉴定

利用分子克隆的方法,将狂犬病毒街毒株的全基因组分为4个片段按照它们基因组上的顺序克隆到真核表达载体pVAX1上,并将G-L间隔区的非编码区替换为表达绿色荧光蛋白(GFP)的核苷酸,构建出表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组狂犬病毒HN10株全长基因组cDNA真核表达质粒,同时,在全长cDNA的两侧嵌入锤头状核酶(HamRz)和丁型肝炎病毒核酶(HdvRz)的序列,并置于CMV启动子的控制下,为下一步拯救出该嵌合病毒提供了可直接使用的全长cDNA真核表达质粒。