过表达miR-155抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

目的:研究过表达miR-155对BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响。方法:(1)用重组腺病毒Ad-BMP9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,定量PCR(qPCR)检测miR-155的表达,RT-PCR检测Runx2和ALP的表达。(2)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测miR-155的表达,ALP活性和染色检测早期成骨能力。(3)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,诱导分化14d茜素红S染色检测晚期成骨能力。(4)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测成骨分化相关基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN的表达。(5)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,Western blot检测p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达。(6)qPCR和Western blot分别检测HIF1α和VEGF的mRNA表达水平和蛋白质表达水平。(7)应用荧光素酶报告基因对miR-155的靶基因进行筛选和验证。结果:在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化过程中,过表达miR-155降低ALP活性及染色;减少钙盐沉积;成骨分化相关基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN表达降低;抑制p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达;HIF1α和VEGF的mRNA和蛋白表达水平减少。在对靶基因的检测中,过表达miR-155可以抑制HIF1α蛋白水平的表达,但对其mRNA水平无明显影响。结论:miR-155过表达减弱BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化,可能是通过抑制Smad/BMP信号通路发挥作用,也有可能是通过抑制靶基因HIF1α的表达来发挥作用。     

非侵袭性真菌性鼻窦炎的实验室诊断及致病菌分析

目的探讨非侵袭性真菌性鼻窦炎的实验室诊断方法,分析其致病菌,为鼻窦炎合并真菌感染的临床诊断、治疗提供依据。方法对我院临床及鼻内镜下所诊断的10例真菌性鼻窦炎患者,鼻内镜手术时直接吸取病变的鼻窦黏膜及窦腔内容物,通过直接镜检、真菌培养、传统鉴定及分子生物学鉴定和组织病理学检查对其进行检查。结果 10例病例中,直接镜检阳性者8例;病理学检查可见真菌菌丝或者孢子者8例;接种培养及基因鉴定阳性者5例(感染菌株包括2例烟曲霉复合体、1例杂色曲霉、1例枝孢样枝孢霉、1例帚霉)。不同方法检测出的阳性病例并非完全重叠。结论真菌镜检、真菌培养、真菌分子生物学鉴定、组织病理学检查在诊断真菌感染时可以互补,有助于明确诊断及发现新菌株。     

小菜蛾对阿维菌素抗性基因的AFLP连锁图谱的构建

世界性害虫小菜蛾Plutella xylostella (L.) 田间种群已对阿维菌素药剂产生了高抗药性。本研究以小菜蛾对阿维菌素的抗性品系、敏感品系和回交群体组建作图家系,再利用AFLP技术构建小菜蛾对阿维菌素抗性基因的连锁图谱。用10组AFLP引物组合对未经药剂处理的小菜蛾成虫DNA选择性扩增,共获得1 044条可区分的DNA条带,271条带具有多态性,χ²检验表明只有123个位点符合1∶1 （P=0.05）,其中的112个构成28个连锁群,其总长度为1 222.7 cM; 用10组AFLP引物对经药剂处理后存活的小菜蛾成虫DNA扩增,所得的DNA条带中有54个条带符合分离比1∶1,经Mapmaker 3.0对多态性位点分析,只有E1M4-15、E1M1-4和E1M4-2标记位点位于同一连锁群,3个AFLP标记与抗性基因的遗传距离分别为0 cM,8.3 cM和13.1 cM。比较分析得出,抗性基因所在的连锁群是第5连锁群。结果显示AFLP连锁图谱对小菜蛾对阿维菌素的抗性监测具有很好的应用潜力。     

两种能引起人类严重疾病的食物传染病原菌

出血性大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｌａｃｏｌｉ０１５７：Ｈ７）和单核细胞增生性李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）是由食物传染的病原菌，能够引起人类严重疾病并往往误诊，本文综述了这两种病原菌的传染途径、致病性、生物学特性和主要的鉴定方法。     

利丰收（83008）对作物的生理效应和应用技术

利丰收（83008）是一类高聚物，它的基本结构框架是苯丙烷，含有酚羟基、羧基、羰基等活性集团，能延缓叶绿素和蛋白质的降解，提高超氧化物歧化酶（SOD）的活性和可溶性蛋白质的含量，减少雨二醛（MDA）的积累，抑制电解质的渗漏，保护细胞膜的结构与功能，提高植物的抗逆性。利丰收的性质类似萘乙酸，其功能相当于ABT生根粉。有可溶于水、价格便宜、天然无毒等优点。利丰收对作物的生理效应可概括为：（1）用于播前处理，可提高种子的发芽势、发芽率，提前出苗，改善幼苗素质，缩短移栽作物缓苗期，提高移栽成活率。如江宁县农业局用1…     

miR-29a靶向调控PDGFB促进非小细胞肺癌细胞凋亡

为了探究miR-29a对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁组织、肺癌细胞以及人正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B中miR-29a的表达,在肺癌A549转染miR-29a mimics后,使用荧光定量PCR和CCK-8法分别检测miR-29a的表达以及各组细胞的活力,使用流式细胞术检测A549细胞凋亡;通过荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁组织PDGFB m RNA的表达,采用Western blot检测PDGFB蛋白的表达;使用双荧光素酶报告基因检测miR-29a可能的靶基因;在肺癌A549细胞转染miR-29a mimics后继续转染PDGFB过表达质粒,通过qPCR和Western blotting分别检测PDGFB mRNA和蛋白的表达。结果表明,与癌旁组织相比,miR-29a在肺癌组织的表达显著下调(p<0.01),PDGFB在肺癌组织的表达显著增加(p<0.01);转染miR-29a mimics后,肺癌A549细胞中miR-29a表达显著增加(p<0.01);CCK-8法结果显示miR-29a mimics组A549肺癌细胞在24 h和48 h后细胞增值率较miR-NC对照组显著降低(p<0.01);流式细胞术结果显示miR-29a mimics组的细胞凋亡率较miR-NC对照组显著增加(p<0.01);与miR-NC+PDGFB 3’UTR WT组相比,miR-29a mimics+PDGFB 3’UTR WT组的荧光强度显著降低(p<0.01);荧光定量PCR和Western blotting显示miR-29a mimics+PDGFB组PDGFB m RNA和蛋白表达量与miR-29a mimics+vector组相比显著增加(p<0.01)。本研究结果表明miR-29a在肺癌组织和肺癌细胞株中低表达,及抑制PDGFB的表达并且促进肺癌细胞凋亡。     

不连续Ficoll密度梯度法分离家蝇脑突触体

1前言突触体是在神经组织匀浆中断裂又封密的神经末端，它们具有内源性神经末端的基本特点，所以是研究神经化学过程的理想系统。昆虫脑突触体用于研究神经化学是很好的材料，但从哺乳动物脑组织中分离突触体的条件不适合昆虫神经组织。1970年Telford和Matsumura在蜚妹脑中分离突触体的结果不理想’“在昆虫脑突触体制备上两个飞跃性的事件是：1976年Donnellan利用FIColl密度梯度法“‘从麻蝇脑中提取到突触体。其次是1980年，Breer发展的漂浮技术（loatationtechnl－qo一，即用一个nC011梯度12钧（…。）在体积小的离心管中形成均匀变…     

鸡突发葡萄球菌病的诊断及治疗

葡萄球菌引发鸡患病给养鸡业造成的损失是相当大的。笔者在基层兽医站遇到3起由禽葡萄球菌引起的鸡病。现将该病传染、发病及防治情况介绍如下。1病况介绍1998年龙城区七道泉子镇某村一养殖大户鸡突然发病。其症状：鸡腿足关节呈浆液性关节炎，除鞘肿胀，滑膜变厚，腔内液体增多。病鸡精神沉郁，卧地不起，有的胸、腹下已溃烂，有深黄褐色液体流出。周围羽毛湿且脏，翅膀背侧面、尾部、头、脸有少量出血班。肠道局部有炎症。发病后2～3d死亡。2病理变化病死鸡胸部、前腹部羽毛稀少，并脱落；腹下呈紫黑色水肿，破溃，有紫黑色液体流出；胸腹…