人鼻病毒1B感染人扁桃体上皮细胞和人肺支气管上皮细胞的比较代谢组学研究

人鼻病毒(Human rhinovirus,HRV)是呼吸道感染的主要病原体之一,明确HRV的致病机制能为有效防控该病毒感染提供科学依据.为确定1B型HRV(human rhinovirus type 1B,HRV1B)感染致宿主细胞的代谢组改变及差异性,本文采用非靶向代谢组学技术研究HRV1B感染人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60B和人肺支气管上皮细胞BEAS-2B后代谢组的改变情况.HRV1B感染UT-SCC-60B细胞6h和12h分别有21个差异显著代谢产物(differentially significant metabolites,DSMs)(上调13个、下调8个)和51个DSMs(上调42个、下调9个),HRV1B感染UT-SCC-60B和BEAS-2B细胞6h和12h后,比较分析发现分别有303个DSMs(上调69个,下调234个)和324个DSMs(上调88个,下调236个),未知DSMs占据比例较大.脂肪酸、脂质、氨基酸、核苷酸和糖类的比例随着感染时间的延长而增加,7-酮基脱氧胆酸、溶血磷脂酰胆碱、垂盆草甙、组氨酸-甘氨酸、腺苷酸等涉及到胆汁酸代谢、脂肪酸和脂质代谢、糖代谢、氨基酸代谢和核苷酸代谢.因此,细胞水平表明HRV1B感染改变了人上皮细胞的脂肪酸、脂质、氨基酸、核苷酸和糖类的代谢水平.     

脑胶质瘤组织miR-211、miR-374、miR-510表达水平与临床病理特征及预后的关系研究

摘要 目的：探讨脑胶质瘤组织微小RNA（miR）-211、miR-374、miR-510表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法：选择2013年8月至2015年8月我院诊治的83例脑胶质瘤患者作为研究对象,选择同期由于脑外伤在我院行内减压术切除的正常脑组织样本31份作为对照样本。采用荧光定量PCR检测miR-211、miR-374、miR-510表达水平,生存分析采用Kaplan-Meier法,应用Cox比例风险回归模型分析预后的影响因素。结果：与正常脑组织相比,脑胶质瘤组织中miR-211、miR-374表达水平明显下降,miR-510表达水平明显升高（P<0.05）。脑胶质瘤组织miR-211、miR-374、miR-510表达均与WHO分级和卡氏功能状态量表(KPS)评分有关（P<0.05）。miR-211、miR-374低表达患者的5年总生存率明显低于高表达患者,miR-510低表达患者的5年总生存率明显高于高表达患者（P<0.05）。WHO分级、KPS评分、miR-211、miR-374和miR-510表达是脑胶质瘤患者预后的影响因素（P<0.05）。结论：脑胶质瘤组织中miR-211和miR-374表达下调,而miR-510表达上调,miR-211、miR-374和miR-510表达均与WHO分级、KPS评分和预后相关,检测miR-211、miR-374和miR-51在脑胶质瘤患者的诊断和治疗中具有一定临床意义。     

甲状腺乳头状癌CT及MRI影像征象及其与雌激素受体、孕激素受体、C-myc表达的相关性研究

摘要 目的：探讨甲状腺乳头状癌（PTC）计算机断层扫描（CT）、磁共振成像（MRI）影像征象及其与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、C-myc表达的相关性。方法：回顾性分析2019年6月-2020年12月于我院74例诊断为PTC患者的计算机断层扫描CT、MRI影像资料,以手术病理结果作为金标准。分析患者的CT、MRI影像学特征。采用免疫组织化学染色分析ER、PR、C-myc的表达情况。采用Spearman秩相关分析评价CT、MRI影像学特征及其与ER、PR、C-myc表达水平的相关性。结果：PTC患者CT、MRI主要表现为混杂密度/信号,多数病灶形态不规则,病灶突破甲状腺被膜外缘呈咬饼征改变、侵犯周围组织及病灶内见细颗粒状钙化时提示恶性程度较高,患者早期出现颈部淋巴结转移较多。ER、PR、C-myc阳性表达者分别为51例（68.92%）、44例（59.46%）、64例（86.49%）。C-myc阳性表达与PTC肿瘤直径有关,组间差异有统计学意义（P＜0.05）;ER、PR、C-myc阳性表达与PTC形态、咬饼征及淋巴结转移有关,组间差异均有统计学意义（P＜0.0）;ER、C-myc阳性表达与PTC边界有关,组间差异有统计学意义（P＜0.05）;ER阳性表达与PTC增强后病灶范围缩小/模糊有关,组间差异有统计学意义（P＜0.05）;ER、PR、C-myc阳性表达与其余CT、MRI影像学表现特征无关,组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。咬饼征与PR、C-myc表达水平呈正相关（P＜0.05）,淋巴结转移状态与ER、PR、C-myc表达水平呈正相关（P＜0.05）,其余影像学表现特征与ER、PR、C-myc表达水平无明显相关性（P＞0.05）。结论：CT、MRI影像征象可在一定程度上评估PTC患者肿瘤细胞的生物学行为,可间接反映肿瘤分化程度、浸润程度等情况,对指导临床综合治疗及评估患者预后可提供客观依据。     

小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达及免疫原性测定

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）引起的急性、接触性传染病,对我国的畜牧业发展造成了严重的影响,目前主要通过疫苗进行防控。为检测PPRV主要抗原蛋白血凝素（hemagglutinin,H）蛋白的免疫原性,从GenBank数据库中查找了近年来公布的H蛋白氨基酸序列,选择1条符合我国流行趋势的序列,对其基因序列进行优化合成后克隆至pET28a载体上。筛选出表达量高的Rosetta（DE3）菌株进行表达,表达产物经SDS?PAGE、Western Blot及质谱分析鉴定。经镍柱亲和层析纯化出单一H蛋白,取20 μg与佐剂混合后免疫小鼠,收集血清进行抗体效价检测,结果显示,血清中H蛋白抗体滴度在二免2周时达到1∶6 400,表明H蛋白具有较好的免疫原性。进一步对二免2周时血清进行中和抗体检测显示,小鼠血清对PPRV疫苗株具有中和效应,中和效价不超过1∶40。研究结果对H蛋白用于PPRV疫苗的研发提供了理论依据。     

葡萄糖浓度对转基因聚球藻表达hTNF-α和光合作用的影响

为了开发海洋药物,把人肿瘤坏死因子-α（hTNF-α）转入海洋单细胞蓝藻聚球藻7002。然而,转基因聚球藻的hTNF-α表达率很低,仅为可溶性蛋白的0．08％,这不利于进一步纯化。不同浓度的葡萄糖对转TNF-α聚球藻的生长、hTNF-α的表达和光合作用的影响。当葡萄糖浓度为125mmol／L,hTNF-α的表达率达到最高,是不含葡萄糖的6.57。此外,当葡萄糖浓度为75mmol／L时,藻细胞的净光合作用速率达到最大,是光自养藻细胞的1.69倍。在各种葡萄糖浓度下,藻细胞对葡萄糖的吸收都不明显。     

转TNF-α基因大肠杆菌培养条件的优化

目的：优化转pMD-489-TNF大肠杆菌的发酵条件,提高菌体产量及TNF-α产率。方法：通过单因素及正交实验,对影响转基因大肠杆菌生长及TNF-α表达的培养液成分、诱导剂浓度、培养温度等工艺条件进行了优化。结果：M9＋LB培养基成分的最优配比为3%葡萄糖、2%蛋白胨、4%酵母粉和1%NH4Cl,诱导剂IPTG浓度为0.5mmol/L,诱导时间4h,培养液初始pH是7.0,于37℃培养。结论：优化后的培养条件促进了菌体的生长和TNF-α的表达,菌体干重和TNF-α表达率比没有经过优化时升高了1.34倍和4.11倍,TNF-α产率从0.113%提高到0.479%,提高了324%。     

基于免疫磁珠富集粪便脱落细胞的大肠癌筛选法

大肠癌是目前发病率、致死率均较高的恶性肿瘤,严重危害人民健康生活.现有的临床检测技术均存在一定的局限性,因而限制了其临床应用的范围.与常规临床大肠癌检测相比,粪便脱落细胞检测法具有高特异性、高灵敏性且容易被受试者接受等显著优点.作为最新型的脱落细胞检测法一免疫磁珠富集粪便脱落细胞检测法除具有一般脱落细胞检测法的优点外,还具有细胞回收效率高、肿瘤细胞特异性高等优点.本文阐述了脱落细胞检测大肠癌的原理和基本方法,着重介绍了免疫磁珠富集脱落细胞的原理和操作过程以及针对脱落细胞进行大肠癌检测的多种方法,并对全自动、快速、高通量的自动化脱落细胞检测仪器应用于脱落细胞检测进行了展望.     

技术与方法理性设计改造牛肠激酶的热稳定性

以牛肠激酶作为研究对象,利用理性设计的方法提高其热稳定性。首先通过分子动力学模拟软件Gromacs v 4.5.5,FlexService以及B-FITTER软件预测出了肠激酶的柔性区Fragment 64～69,Fragment 85～90;然后结合β-转角序列统计学信息以及引入位置原有的残基不参与形成氢键的原则,确立了3个突变位点S67P,R87P以及Y136P;通过Quik Change^TM 定点突变的方法引入突变位点,并进行了酶热稳定性分析。结果表明,R87P突变体酶的失活半衰（t_1/2）和T₅₀¹⁰ 较野生型分别提高了3.1 min和11.8℃,同时,动力学常数（K_m/k_cat）测定结果显示酶活未受到显著影响。该策略有潜力应用于其他工业酶分子的热稳定性改造,为推动生物酶的工业化应用奠定基础。     

镉对河南华溪蟹副性腺抗氧化酶活性及脂质、蛋白质和DNA的影响

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海南省东方市野生龙眼种群动态特征研究

野生龙眼是龙眼(Dimocarpus longan)的野生群体,是龙眼进行品种改良与创新的重要基因库。该研究对海南省东方市的野生龙眼资源进行实地调查,并从种群径级结构、静态生命表、存活曲线等方面进行了分析。结果表明:(1)东方市的野生龙眼所处群落的植被类型可以分为季雨林、热带雨林以及季雨林与热带雨林过渡带。(2)三种植被类型下野生龙眼种群大小依次为热带雨林过渡带季雨林。(3)三种植被类型下野生龙眼的存活曲线均趋于Deevey-Ⅱ型,种群各径级的死亡率基本接近。(4)数量变化动态指数表明季雨林、热带雨林区的野生龙眼种群为稳定型;过渡带的野生龙眼种群为增长型且趋于稳定。(5)时间序列预测分析表明,在未来的2、4个龄级后,季雨林下的野生龙眼种群从Ⅴ龄级之后的个体数呈现出增加的趋势,而热带雨林和过渡带是在Ⅳ级之后。从野生龙眼种群的整个发展阶段来看,目前三种植被类型下的野生龙眼幼年个体数相对丰富,种群维持有较充足的后备资源,中树、大树阶段的个体数能在现有基础上得到补充。继续保持现有野生龙眼种群分布的植株和生境斑块且采取有效保护措施,东方市的野生龙眼种群能有较好的恢复潜能。该研究的创新之处在于从不同植被类型下来分析东方市的种群动态结构,为处在不同植被类型的野生龙眼资源的种群特征提供了理论依据。