玉米根尖质膜的受钙激活蛋白激酶的特性

以生长3－4d的玉米（ZeamaysL．）根尖为材料,用两相法得到高纯度的质膜,鉴定了质膜上存在一受钙激活的蛋白激酶。该类激酶主要位于质膜内侧;钙的半激活浓度为50μmol／L;外源钙调素对激酶没有明显的活化作用;钙调素拮抗剂三氟拉嗪（TFP）可明显抑制激酶活性,半抑制浓度为75μmol／L;该类激酶对外源底物组蛋白ⅢS型有较高的特异性。结果显示此激酶属于钙依赖钙调素不依赖蛋白激酶。质膜上33kD和58kD两种蛋白可能是这种钙依赖蛋白激酶的内源底物。     

木犀草素通过抑制p65 NF-κB、促进p85 PI3K调节微血管内皮细胞VCAM-1表达

通过抑制微血管内皮细胞血管细胞黏附分子(VCAM)-1的表达,木犀草素可阻遏中性粒细胞与微血管内皮细胞的黏附,起到抗炎作用。木犀草素调节VCAM-1表达与三条信号通路有关：丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子kappa B (NF-κB)/IκB和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt通路。其中,MAPK和NF-κB/IκB通路参与VCAM-1正向调节,PI3K/Akt通路参与VCAM-1负向调节。本文研究了木犀草素对微血管内皮细胞该三条通路中的关键蛋白p38 MAPK、p65 NF-κB、p85 PI3K磷酸化。结果表明：木犀草素在反应的30s和1min促进p38 MAPK磷酸化,在30 s、1 min和5 min促进p85 PI3K磷酸化,而在30 s、1 min、5 min和30 min抑制p65 NF-κB磷酸化。阻抑p38 MAPK通路导致VCAM-1表达下调,而p38 MAPK抑制剂SB203580可通过抑制p38 MAPK磷酸化也下调VCAM-1,提示木犀草素对微血管内皮细胞VCAM-1的调节作用独立于p38 MAPK磷酸化。由此可知,木犀草素通过抑制p65 NF-κB磷酸化或促进p85 PI3K磷酸化调节微血管内皮细胞VCAM-1表达。本文为木犀草素抗炎作用的分子机制研究提供了新的线索。     

反相高效液相色谱法测定鹿衔草中熊果酸和齐墩果酸的含量

建立反相高效液相色谱法测定鹿衔草中熊果酸和齐墩果酸含量,并进行方法学考察.采用Kromasil C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(88:12);柱温25 ℃;流速0.8 mL/min;检测波长210 nm.熊果酸进样量在0.922～18.44 μg,齐墩果酸进样量在0.506～10.12 μg范围内呈良好线性关系,其中熊果酸平均回收率为98.5%,RSD为2.13%(n=6);齐墩果酸平均回收率为 101.3%,RSD为1.69%(n=6).本方法使鹿衔草中主要成分熊果酸和齐墩果酸达到基线分离,操作简便、结果可靠,可为鹿衔草质量控制和评价提供有效手段.     

高效液相色谱-光电二极管检测器法测定栀子中乌索酸的研究

建立反相高效液相色谱法测定了栀子中乌索酸的质量分数,同时采用光电二极管阵列检测器检测乌索酸色谱峰的纯度。色谱柱为Nuc leosil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(85∶15,V/V),流速0.8 mL.m in-1,检测波长205 nm,柱温25℃。乌索酸在0.1696~1.5264μg范围内线性关系良好(r=0.9999),检出限为0.3 mL-1(3σ),平均回收率为98.0%。方法简便,准确,重现性好,线性范围宽,适于测定栀子药材中乌索酸的质量分数。     

HPLC法测定植物中乌索酸的含量

采用HPLC法测定6种植物中乌索酸的含量,为扩大植物中乌索酸药物资源的开发利用提供分离测定方法。色谱柱为SyrmnetryShieldRP18,流动相甲醇-水-磷酸(88：12：0．1),流速1．0mL／min,检测波长210m,柱温2．5℃。该方法的线性范围为0．192-3．072μg,R=0．9999,平均回收率为98．12％,RSD=1．7％(n=5)。HPLC法测定乌索酸含量灵敏、准确、重现性好。     

正交试验法优选毛泡桐中乌索酸提取工艺条件

采用正交设计L9(34)方法,考察乙醇浓度(A)、超声时间(B)、超声功率(C)、料液比(D)对乌索酸提取率的影响,用高效液相色谱法测定含量,并与常规提取法进行对比,确定了毛泡桐中乌索酸的最佳超声提取工艺条件。所考察的因素对毛泡桐中乌索酸提取的影响按各因素作用主次顺序为:乙醇浓度>料液比>超声时间>超声功率;乌索酸超声提取的最佳条件为:A3B3C2D1,即毛泡桐叶粉末用6倍量体积分数95%乙醇超声提取2 h,超声功率为200 w。与常规的提取方法相比,超声提取具有提取时间短、操作简单、提取率高、无需加热等优点。优选的工艺条件稳定,操作简便,方法可行,可用于毛泡桐中乌索酸的提取。     

幼龄华南虎三种哺育方法结果初报

华南虎(Panthera tigris amoyensis)又称中国虎,为我国特有虎亚种,是现存5个虎亚种中最濒危的一种.它曾广泛分布于我国黄河流域以南至珠江以北的广大地区,现仅分布在福建、江西、广东和湖南交界的南岭山地林区,野外数量不足30只(韩宗先,2004),被列为国家Ⅰ级保护野生动物.IUCN(世界自然保护联盟)将其濒危等级划分为极危(CR),亦被认为是"最优先需要国际保护的动物"(IUCN,2010).     

短短芽孢杆菌X23中edeB基因的克隆、原核表达及转录时相分析

短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevis）X23可产生非核糖体肽类抗生素伊短菌素，已被广泛用于植物病害的生物防治。伊短菌素合成基因簇中，edeB基因参与调控伊短菌素的合成积累。本研究利用基因同源重组技术，以edeB基因作为外源基因的重组片段，构建了原核表达载体pET28a-edeB，转化至大肠杆菌BL21(DE)中进行诱导表达；通过转录组测序检测edeB基因在短短芽孢杆菌不同培养时间（12、18、24、30和36 h）的转录时相。结果表明：edeB基因全长为771 bp，编码256个氨基酸。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示，在分子质量为30 kD处有一条特异条带，与生物信息学预测的EdeB蛋白的大小一致，且EdeB蛋白主要以包涵体的形式存在。转录时相分析结果表明，edeB基因在各个培养时间点均有表达，表达模式为先升高后降低，且在30 h时表达水平最高。这些结果为进一步研究edeB基因调控伊短菌素合成积累的分子机制奠定了基础，为短短芽孢杆菌高产伊短菌素菌株的构建提供了理论依据。     

褐飞虱核受体基因NlE75的分子特性和功能分析

【目的】蜕皮激素通过信号级联反应调节昆虫的蜕皮和变态过程，而核受体基因E75是信号通路的早期响应基因。本研究旨在分析褐飞虱Nilaparvata lugens NlE75的分子特性及生物学功能，为褐飞虱的防治和新农药的开发提供新分子靶标。【方法】本研究基于序列比对和同源检索以及褐飞虱转录组数据获得NlE75的cDNA序列，并利用RT-PCR和RACE技术对其进行cDNA克隆；利用生物信息学软件预测分析NlE75编码蛋白的结构特性；利用MEGA5.0邻接法(neighbor-joining, NJ)构建系统进化树。利用RT-qPCR检测NlE75及其转录本在褐飞虱不同发育阶段(卵、1-5龄若虫和成虫)、5龄若虫不同组织(头、胸、腹、表皮、翅芽、脂肪体、中肠和足)中和3龄若虫被注射0.2μg/头20-羟基蜕皮激素(20-hydroxyecdysone, 20E)后的表达谱。通过注射法进行RNAi敲降褐飞虱3龄若虫20E合成关键基因NlCYP314A1后，利用RT-qPCR检测3龄若虫中NlE75的表达量；通过注射法进行RNAi下调3和5龄若虫NlE75及3龄若虫中其转录本的表达后，利用RT...