寨卡病毒感染者血液、尿液和唾液中IgA抗体水平初步研究

为研究寨卡病毒(ZIKV)感染者血清、尿液和唾液样本中特异性IgA抗体水平,进一步了解ZIKV感染免疫机制,本研究重组表达制备寨卡病毒NS1蛋白,对其浓度、纯度进行鉴定,初步评估了NS1蛋白抗原性,并建立间接酶联免疫(Indirect-ELISA)方法,检测患者临床血清、尿液和唾液样本中的寨卡特异性IgA抗体。利用健康人群血清、尿液和唾液标本,评估检测方法的特异性,并确定以阴性对照的均值加3倍标准差作为判定检测结果的阈值,特异性为100%。对经病毒核酸检测所确诊病例的33份血清样本、4份尿液样本和3份唾液样本进行检测。选择3份具有较高IgA抗体水平的血清,通过2倍系列稀释的方法评价了血清样本中特异性IgA抗体的滴度,可有效检出经3 200倍以上稀释的血清样本中的IgA抗体。重复性检测实验显示板间变异系数为(3.0±0.8)%,板内变异系数为(2.7±1.0)%。寨卡患者血清、尿液和唾液样本中的特异性IgA抗体的检出率分别为75.8%(25/33)、100%(4/4)和33.3%(1/3),提示IgA抗体在3种体液标本中均具有显著的存在,具有充当体外诊断指标的意义。同时尿液、唾液标本中特异性IgA抗体的存在,提示潜在的粘膜免疫效应,有助于增强对病毒体内播散和体外传播的理解,也初步提示了寨卡病毒NS1蛋白可用于相关免疫学诊断试剂的研发。     

在大肠杆菌中分别表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1和G2

利用ＰＣＲ方法扩增了汉滩病毒７６－１１８株囊膜糖蛋白Ｇ１和Ｇ２的编码区基因,并将ＰＣＲ产物克隆了Ｔ－载体中,用限制性内切酶将Ｇ１和Ｇ２的编码区基因切下,并克隆到表达载体ＰＢＶ２２０中构建Ｇ１和Ｇ２的表达质粒,诱导表达后在ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ凝胶中未见表达产物带,表达的Ｇ１和Ｇ２能与部分抗Ｇ１和Ｇ２的单克隆抗体发生反应,但用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ方法不能检测到表达产物。用表达的Ｇ１和Ｇ２免疫小白鼠能刺     

用不同载体在大肠杆菌中表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1和G2

为提高汉瘫病毒囊膜糖蛋白G1和G2的表达水平,利用两种不同的表达载体pKK223－3和pGEX－4T－1构建G1和G2的表达质粒,其中PGEX－4T－1为融合蛋白表达载体。诱导所构建的G1和G2表达质粒表达G1和G2,用表达的G1和G2免疫小白鼠诱导产生的抗汉瘫病毒特异性的间接免疫荧光抗体摘度无明显差别,从而说明表达载体对汉瘫病毒G1和G2在大肠杆菌中的表达水平影响不大,表达水平都较低。同时,利用PGEX－4T－1构建G1和G2的部分多肽的表达质粒,但表达水平较完整的G1和G2无明显提高。     

汉滩病毒核蛋白羧基端多肽原核表达载体的构建及表达

本文为建立分型检测方法,探讨了汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)核蛋白羧基端多肽的抗原性。首先,分别构建编码HTNV核蛋白及其羧基端多肽的原核表达载体pRSETA—S、pRSETA—S—C;然后,将其转化入表达菌BL21(DE3)pLySs诱导表达,采用SDS—PAGE、Westem—blot进行鉴定。我们成功构建了pRSET A—S及pRSETA—S—C原核表达载体。SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达,呈不溶状态,Westem—blot显现目的蛋白具有良好的抗原性。为大量制备分型用核蛋白多肽抗原创造了条件。     

人类肠道病毒71型亚单位疫苗壳聚糖佐剂作用的研究

为了解人类肠道病毒71型(EV71)重组保护性衣壳蛋白(rVP1)亚单位疫苗壳聚糖佐剂的作用,本研究利用rVP1蛋白与壳聚糖佐剂制备的疫苗口服免疫新西兰白兔,通过ELISA方法检测兔血清、粘膜洗液(小肠、鼻腔和肺)及粪便中特异性IgG、IgA抗体水平,中和试验检测血清中和抗体滴度,并通过抗原刺激体外培养的兔脾淋巴细胞分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的水平评价rVP1口服免疫效果。结果显示,单纯口服rVP1蛋白仅可诱导产生较低水平的血清IgG和粘膜IgA抗体,而含佐剂疫苗组与单纯抗原免疫组差异显著,并可诱导产生中和抗体。细胞免疫检测结果显示rVP1含佐剂组兔脾淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4水平明显高于未加佐剂组。本研究为研制EV71VP1口服疫苗奠定了基础。     

CRC系列期刊之<生物技术评论>和<植物科学评论>

《生物技术评论》(ＣｒｉｔｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ)该刊是美国著名的出版公司———ＣＲＣ出版有限责任股份公司出版的系列期刊之一 ,原名为ＣＲＣＣｒｉｔｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ,是 1983年创刊的。该刊为季刊 ,每年 1卷 ,每卷末期附带全年作者索引和主题索引。该刊收录的文章涉及生物技术的各个领域 ,包括与食品和饮料工业、燃料生产、化学及制药业、废物处置以及其它与社会、环境和经济领域密切相关的从发酵技术到遗传操作和蛋白质工程的技术。该刊刊登世界不同地区的技术现…