嗜碱性芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究II.诱变株选育及产酶条件

嗜碱性的短小芽孢杆菌R115(Alkaliphilic Bacillus pumilus)经0．4mg／ml亚硝基胍和0.4μg／ml利福平处理,获得一株具有高产稳产碱性蛋白酶的变异株(B45),产酶活力由2803μ／ml提高到6000u／ml(28℃测定),该诱变株的最适产酶条件为起始pH10．5-11．0,温度30—35℃,培养时间52—54b。0．4-0．6％K2HPO4．可增加酶的产量。     

中性蛋白酶AS 1.398固定化酶的研究

枯草芽孢杆菌AS1.398中性蛋白酶经海藻胶包埋制成固定化酶,用396的胶包埋率达98%,表现活力为7%左右。其最适反应pH为7.0,最适温度为55℃,与自然酶相一致。固定化酶的耐热性比自然酶高,最稳定的pH为7.0左右,pH8.0以上不稳定。海藻胶容易解体,球形破裂,因此只适合在中性条件下使用。     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯和性质的研究

由短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)209产生的胞外碱性蛋白酶的粗酶制剂(5×10 4u／g),经硼砂NaOH缓冲液抽提,硫酸铵沉淀,Sephadex G一25脱盐,DEAE-纤维素柱层析,冷冻干燥获得部分纯化的酶。纯酶的活力为199x10u/g,比活力提高2,6倍。此酶的最适pH8．5—9．0,在pH6一10之间稳定,因此是属于微碱性蛋白酶“’。最适温度为50℃,在50℃以下稳定,在60℃处理10分钟活力损失95％。0.003村c丑件的存在对酶的热稳定性和pH稳定性均有显著提高。Ag+,Cu2+,Fe2+,Hg+,Zn2+ 对酶有抑制作用;Mn2+有明显的激活作用;1×10-3M的PCMB,IAA,O-PTH,PMSF对活力无影响;1×10-3M EDTA对酶有30％的抑制作用;在40℃用NBS(1×10-4M)、DFP(2．5mM)对醢进行10分钟处理,酶活力完全损失。此酶能水解多种天然蛋白,如酪蛋白、血红蛋白、蛇毒蛋白等,不水解鱼精蛋白和溶菌酶。以酪蛋白为底物测得的km值为0．66×10-2g／ml。在pH7．3进行圆盘凝胶电泳,虽然呈现九条带,但均具有大小不等的蛋白酶活力。     

嗜碱性芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究——Ⅰ.菌种分离、筛选及发酵条件的研究

从38份土样中筛选到一株嗜碱性短小芽孢杆菌R115,能在pH10以上的环境中生长,并在pH10条件下产生较高的碱性蛋白酶。酶反应的最适pH为10.5,最适温度45℃;在pH12条件下最适温度为28℃。     

蛋白酶应用于外伤治疗的研究——Ⅰ.蛋白酶与抗生素、消毒剂之间活性关系

本文研究了中性蛋白酶、碱性蛋白酶与抗生素、消毒剂的相互活性关系。结果表明在适当的浓度下,混合后彼此的生物活性没有明显的影响。蛋白酶与9000u/ml以下的庆大霉素混合,酶活性可保持93%以上。杜灭芬的浓度在100μg/ml以下,对酶的活性无影响。蛋白酶与抗生素混合后对金黄色葡萄球菌的抑制作用无影响。对临床应用提供了可靠依据。     

蛋白酶B.P与几种试剂蛋白酶的比较

蛋白酶B.P与国内外几种试剂蛋白酶比较,证明其酶种单一,只含有蛋白酶,不含DNA酶和RNA酶,与蛋白酶K和蛋白酶E相似。蛋白酶B.P除含有碱性蛋白酶外还含有较高的中性蛋白酶活性,它可以广泛地水解多种天然蛋白,应用于微生物细胞蛋白的水解,提取DNA和RNA,还可水解叶肉细胞蛋白,提取叶绿体DNA,是我国第一个碱性生化试剂蛋白酶。     

字佐美曲霉酸性蛋白酶的研究I．酸性蛋白酶537菌株的选育及其发酵条件

用紫外光、乙烯亚胺、60钻、甲基磺酸乙酯连续交替诱变处理宇佐美曲霉的白色变种B1,获得一株高产酸性蛋白酶的突变株537,在摇瓶培养条件下其产酶水平是出发菌株的35倍。试验结果表明,对宇佐美曲霉的多因素连续诱变处理,以及采用对萌动孢子处理的方法均有助于获得较理想的结果。此外,简化了的培养基,不仅使所得的突变株提高了产酶水平,而且培养基中不需要添加豆饼水解液,可直接采用豆饼粉和较高浓度的无机氮源。另外,氯化钙、磷酸盐对产酶有促进作用。诱变菌株经多次传代和长期保存后,产酶活力稳定不变。     

Bohaisea-9145海洋低温碱性脂肪酶研究

从 2 0 0 0多份渤海海区海水海泥样品中分离获得一株新型脂肪酶高产菌株BohaiSea 914 5 ,经鉴定为适冷性海洋酵母 (Yarrowialipolytica)。菌株在以豆饼粉、棉籽饼粉和花生粕作为碳氮源并添加 0 5 %花生油的培养基中能较好地生长产酶 ,最适产酶温度 2 6± 1℃ ,产酶周期为 2 3h。所得脂肪酶的最适反应温度为 35℃ ,最适pH 8 5 ,pH4 0～ 9 0范围内稳定 ,热稳定性差。该酶与常见金属离子和化学试剂的配伍性较好 ,受表面活性剂SDS的激活 ,且具有良好的耐盐及抗氧化特性 ,是一种新型的海洋低温碱性脂肪酶 ,在洗涤剂行业特别是冷洗行业中具有良好的应用前景