蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆

人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodon cnliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母茵的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并加以改进,通过4次PCR延伸反应,得到了全长基因。经扩增后回收目的片段,双酶切后连接到克隆载体,将得到的转化子酶切鉴定后,任意选择6个克隆进行双向测序,得到了全序列正确的3个克隆。本工作为类凝血酶在大肠杆菌和酵母系统中的高效表达奠定了基础,也为长度为700-900bp片段的合成提供了帮助。