DNA shuffling技术提高干扰素比活性的研究

DNA shuffling技术可以定向进化干扰素,获得比rhIFN-α2b标准品更高比活的干扰素.rhIFN-α2b基因与Infergen基因用DNaseI酶切成30-50 bp小片段,回收之后进行无引物PCR 重聚和有引物PCR扩增基因.将重组基因连接到载体pUC19中,转化至DH5α并挑选阳性克隆测序.将测序正确的突变基因连接到载体pET30a中并转化至BL21（DE3）中,然后诱导蛋白表达、SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot分析.经过表达细胞诱导、细胞裂解、包涵体变性、复性和单克隆抗体亲和层析之后,获得高纯度的重组干扰素.经测定纯化后的重组干扰素比活达到5.8×108IU/mg,比rhIFN-α2b标准品高出5倍左右.实验结果证明此实验方法对提高干扰素的比活是有效的,可以获得比标准品更高比活的干扰素.     

49例肝硬化患者营养不良的相关因素分析

目的：探讨肝硬化患者营养不良的相关因素。方法：已确诊49例肝硬化住院患者空腹测血常规、血生化、肝纤维化、血凝分析、微量元素测定、尿常规,及人体测量学指标：身高、体重（weight）、上臂围（Mid-upperarmcir cumference,AC）、上臂肌围（Mid-upper arm muscle circumference,AMC）、肱三头肌皮褶厚度（Triceps skin fold thickness,TSF）、髂骨上皮褶厚度（Ilium skin fold thickness,ISF）、腓肠肌围（（Gastrocnemius muscle circumference,GC）,计算体重指数（Body mass index,BMI）、Pignete指数、比胸围（Ratio of Chest circumference and body Height,C/H）、Rohrer指数、Vervaeck指数等指标110项,采用主观全面营养评价法（Subjective global assessment,SGA）进行营养评估。结果：计量资料应用t检验、计数资料应用X2检验进行单因素分析,筛选出与肝硬化营养不良有关的因素26项,纳入Logistic回归向前逐步选择法（似然比）行多因素分析,GC、AC、ISF、阴离子间隙（AG）4项指标的降低与肝硬化患者营养不良的发生有关系。结论：在采用SGA法评估肝硬化患者营养状况时,应注意GC、AC、ISF及AG的变化。     

高糖条件下小鼠巨噬细胞对骨骼肌细胞成肌分化和胰岛素敏感性的影响*

目的: 探讨高糖环境下小鼠巨噬细胞对骨骼肌细胞成肌分化和胰岛素敏感性的影响。方法: Transwell小室内共培养小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12细胞和单核巨噬细胞RAW264.7细胞并给予60 mmol/L葡萄糖处理,结合培养条件随机分为单独培养对照组(SC组,n=12)、共培养对照组(CC组,n=12)、单独培养高糖组(SH组,n=12)和共培养高糖组(CH组,n=12)。相差显微镜观察细胞形态,共培养1 d和3 d后收集C2C12细胞,CCK-8检测细胞活性,免疫荧光技术检测细胞融合率和基础与胰岛素刺激的GLUT4蛋白表达,实时定量PCR检测成肌调节因子Myf5、MyoD和myogenin基因表达,2-NBDG法检测细胞基础和胰岛素刺激的糖摄取。结果: 正常糖浓度下,与RAW264.7细胞共培养促进C2C12细胞肌管形成,促进E-MHC蛋白表达(P＜0.01),促进MyoD和myogenin基因表达(P＜0.05),提高胰岛素刺激的2-NBDG摄取(P＜0.05),提高基础GLUT4水平(P＜0.05)。高糖刺激抑制C2C12细胞肌管形成,抑制成肌调节因子基因表达,抑制2-NBDG摄取,抑制GLUT4表达(P＜0.05)。高糖环境下与RAW264.7细胞共培养时未见明显肌管形成,与共培养对照组和单独培养高糖组相比,细胞活性、E-MHC蛋白水平、成肌调节因子基因水平、2-NBDG摄取和GLUT4蛋白水平均明显下降(P＜0.05)。结论: 与RAW264.7共培养促进C2C12成肌分化并提高胰岛素敏感性, 高糖条件处理这一作用可逆转,抑制C2C12成肌分化的同时诱发C2C12细胞胰岛素抵抗。     

洋河流域土地利用时空变异及其对生态服务功能价值的影响

洋河流域位于我国北方典型的农牧交错地带,是首都重要水源涵养地和生态保护屏障,也是2022年冬奥会举办地之一。对流域土地利用变化及其生态服务功能价值影响的研究可为首都水源保护以及冬奥会场地环境质量的改善提供重要理论依据和决策支持。利用Arc GIS技术分析了洋河流域1990—2013年间的土地遥感数据,估算了这些变化对流域生态服务价值的影响。结果表明:1990—2013年洋河流域林地和未利用地面积呈增加,而水域、草地则呈减少的趋势。由单一土地类型利用动态绝对值说明,除林地以外2000—2013年洋河流域其他土地类型受人类或自然环境变化的影响明显高于1990—2000年。土地转移主要发生在流域西部的兴和县、阳高县、天镇县和下游的张家口市、宣化县和怀来县。近年来流域土地面积变化幅度和变化范围均增加。1990—2013年间洋河流域土地利用的年总生态服务价值经历先增加后减小、总体减少的过程,但林地和未利用地的生态服务价值却一直增加。由于林地面积增加从而导致1990—2013年流域的原材料生产、气候调节、气体调节、生物多样性保护和提供美学景生态功能占年总价值的比值增加。林地、草地和耕地是洋河流域生态服务的主要贡献者,也是生态服务价值变化的敏感因子。     

青岛沿海7种异毛类纤毛虫形态学描述

借助活体观察及银染法等对采集于青岛沿海的7种异毛类纤毛虫(绿色爽口虫Climacostomum virens、蓝菌丽克虫Licnophora lyngbycola、盐蚕豆虫Fabrea salina、佛氏环须虫Peritromus faurei、简单瓶囊虫Folliculina simplex、延长类瓶囊虫Folliculinopsis producta、弯曲突口虫Condylostoma curva)进行了活体形态与纤毛图式水平的分类学研究, 其中绿色爽口虫为国内新记录。对迄今缺乏详细研究的简单瓶囊虫与延长类瓶囊虫补充了大量活体形态描述, 如皮层颗粒、色素颗粒的分布与颜色变化等, 同时运用现代银染技术首次报道了该两种游泳体的纤毛图式。       

生物进化与特化

作者试图把生物的适应性变化区分成生物的进化和特化两种不同的概念,进化即生物逐渐演变,向前发展的过程;特化是指生物的水平发展的物种形成过程,即生物多样性的形成过程,这种区分可以避免许多不必要的争论,把这个新的概念体系和以往人们对生物进化研究的理论相结合。并用该方法重新解释以往人们的研究发现,可以看出生物发展的历史就是生物进化和特化交替进行的历史,以此可解释许多不同理论之间的矛盾。     

四种营养评价法对肝硬化患者营养不良评价的一致性探讨

目的:探讨主观全面营养评价法(subjective global assessment,SGA)、简易营养评价法(mini-nutritional assessment,MNA)、简易营养评价精法(short form mini-nutrition assessment,MNA-SF)及欧洲NRS2002(Nutritional risk screening)营养风险筛检法四种营养评估法对肝硬化患者营养不良评价的一致性。方法:采用SGA、MNA、MNA-SF、NRS2002四种营养评估法对本院收治的肝硬化患者49例进行营养评估,应用诊断一致性检验评价四种营养评估法之间的一致性。结果:四种方法评估肝硬化营养不良发生率分别为:SGA法为32.7%,MNA法为67.3%,MNA-SF法为51.0%,NRS2002法为40.8%;四种营养评估法吻合程度从强到弱依次为:MNA法与MNA-SF法,k=0.671;SGA法与MNA-SF法,k=0.554;MNA-SF法与NRS2002法,k=0.553;MNA法与NRS2002,k=0.501;SGA法与NRS2002法,k=0.477;SGA法与MNA法,k=0.381...     

肿瘤睾丸抗原 CT45-5在 DNA 损伤应答中的作用

目的:用建立的 CT45-5-siRNA 研究肿瘤睾丸抗 CT45-5在 DNA 损伤应答中的作用.方法:通过靶向CT45-5基小干扰 RNA(siRNA)下调 CT45-5的表达,用 MTT 比色法检测经喜树碱和托泊苷处理后细胞对 DNA 损伤诱导剂的敏感性,用流式细胞技术检测电离辐射后细胞周期的变化.结果:在 DNA 损伤诱导剂处理后,在脆性组氨酸三联体(Fhit)高表达细胞中下调 CT45-5的表达可以使细胞表现出更强的 G2期阻滞及对 DNA 损伤诱导剂更耐受,而在 Fhit 缺失表达的细胞中却没有此现象.结论:CT45-5可能是以 Fhit 赖的途径参与了 DNA 损伤应答.