利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Mlk3基因探讨其对血压的影响北大核心CSCD

为探讨混合谱系激酶3(mixed lineage kinase 3,Mlk3)基因敲除(knockout,KO)对小鼠血压的影响,采用CRISPR/Cas9系统构建Mlk3基因敲除(Mlk3 knockout,Mlk3KO)小鼠模型。T7核酸内切酶I(T7 endonuclease I,T7E1)酶切法验证向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的活性。体外转录CRISPR/Cas9 mRNA及sgRNA,显微注射至受精卵并移植入假孕母鼠。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及DNA测序检测基因型。实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)检测Mlk3 mRNA表达,Western blotting及免疫荧光检测Mlk3蛋白表达。尾套法监测小鼠血压。免疫组化及Western blotting检测小鼠主动脉肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化水平。PCR基因型鉴定及DNA测序显示Mlk3敲除成功,且Mlk3敲除小鼠未检测到Mlk3蛋白表达,证实CRISPR/Cas9系统成功构建了Mlk3敲除小鼠。Mlk3敲除小鼠在基础状态下血压显著高于同笼对照,且Mlk3敲除小鼠主动脉平滑肌层MLC的磷酸化高于对照组,说明Mlk3具有抗高血压的内源性保护作用。本研究为探讨蛋白激酶Mlk3抗高血压及抗高血压诱导心血管不良重塑的作用机制提供了理想的动物模型。     

中国栽培大豆“中油83—14”11S种子贮存蛋白基因的分子克隆

利用植物cosmid载体PEND4K,以国内高蛋白栽培大豆“中油83—14”为材料,构建了含30Kb以上DNA片段的基因文库．用野豌豆(Vicia faba)豆球蛋白基因的克隆为探针,对构建的cosmid文库进行杂交发现野豌豆豆球蛋白基因与“中油83—14”大豆的基因组克隆(genomic clones)有杂交,说明两者之间有同源性,杂交强度不同,并且这些克隆的酶谱不同;说明这些克隆为豆球蛋白基因组分．大豆球蛋白基因的分子克隆为高表达的大豆球蛋白基因的利用提供了基础,是作物遗传工程改良的主要一步．     

酵母双杂交技术筛选与hCLP46蛋白相互作用的蛋白

目的：利用酵母双杂交技术,筛选人类白细胞cDNA文库中能与人类CD34＋干/祖细胞异常表达蛋白hCLP46（Human CAP10-Like Protein46）相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,深入探讨hCLP46的功能,为骨髓增生异常综合症MDS-AML的病理提供线索。方法：以pGBKT7-hCLP46为诱饵质粒筛选人类白细胞cDNA 文库,得到阳性克隆,并对验证后的阳性克隆的外源性片段进行测序及同源性分析。结果：从人类白细胞cDNA文库中得到86个阳性克隆,经过验证,最终得到5个阳性克隆。对验证后的阳性克隆的外源片断进行测序及同源性分析,最终得到4个不同的候选基因序列。结论：应用酵母双杂交系统,共筛选得到4个不同的基因,其编码蛋白与hCLP46 有相互作用,可能与MDS-AML发病机制相关。     

西双版纳热带次生林和橡胶林蚯蚓数量分布及其与环境因子的关系

2006年1月,通过样地调查法比较了西双版纳次生林和橡胶林2种不同土地利用方式的蚯蚓数量分布状况及其与环境因子的关系.结果表明:自然林转变为橡胶林后,土壤养分及植物有机碳输入均明显减少,同时蚯蚓群落发生较大的变化:在橡胶林,热带外来种蚯蚓无围海蚓的密度(52.27 ind·m-2)显著高于林地内本地种蚯蚓远环蚓的密度(0.53 ind·m-2),但在次生林,2种蚯蚓的密度和生物量无显著差异;橡胶林本地种蚯蚓远环蚓的密度(0.53 ind·m-2)和生物量(0.32 g·m-2)与次生林(6.93 ind·m-2、7.76 g·m-1)相比呈下降趋势.无围海蚓的幼蚓在其种群中占有较大比例,类似增长型种群年龄结构,而远环蚓则主要以成蚓为主.相关分析表明,橡胶林的细根生物量与无围海蚓的密度呈显著正相关.由预示蚯蚓群落结构的这种变化可能与橡胶林土地利用引起的植被变化、土壤养分下降等因素密切相关,同时外来种蚯蚓与本地种蚯蚓本身的生态适应对策也不可忽视.     

医学研究生"高通量测序技术"应用能力的培养

高通量测序技术目前已广泛的应用于临床研究领域。与传统测序方式相比,该技术具有通量高、耗时短、成本低等特点。研究生教育中对高通量测序技术的新进展及其在疾病研究、临床诊断等方面的应用方面的介绍较少。培养医学研究生对高通量测序技术的应用能力,可以增强研究生对高通量测序技术的方法、原理、应用范围、数据分析的理解,为医学研究生应用高通量测序技术发现及解决临床问题打下一定的基础。     

夏季遮光减缓芍药叶片衰老的光合机制研究

为探究夏季强光和轻度遮荫对芍药(Paeonia lactiflora)衰老生理的影响,以主栽品种‘紫凤羽’、‘红凤羽’及芍药野生种为供试材料,设大田全光照及轻度遮荫处理,分析夏季强光(SL)和轻度遮荫(SS)对芍药叶片光合特性、叶绿素荧光参数、叶绿体超微结构、膜脂过氧化等的影响。结果表明:SS处理92 d后,各供试材料叶绿体呈典型的椭圆状,内外膜结构清晰完整,基粒和类囊体膜结构垛叠紧密;野生种、‘红凤羽’和‘紫凤羽’绿色期分别延长了40、20和10 d,且根增重率分别增加了119.76%、67.74%和1.42%。在SS处理下‘红凤羽’和野生种净光合速率(P_n)和表观量子效率(AQY)降低幅度均小于‘紫凤羽’,说明‘红凤羽’和野生种的遮荫效果明显好于‘紫凤羽’。在SS处理下‘红凤羽’和野生种的电子传递速率(ETR)和实际光化学反应效率(Φ_(PSⅡ))的增加幅度均大于‘紫凤羽’,说明在SS处理下‘红凤羽’和野生种的光抑制程度受影响更小。在光保护机制方面,‘红凤羽’和野生种在轻度遮荫处理下其调节性能量耗散(NPQ)下降幅度大于‘紫凤羽’,且叶黄素循环(A+Z)/(A+Z+V)上升幅度大于‘紫凤羽’,说明SS处理下‘红凤羽’和野生种与‘紫凤羽’相比更倾向于通过叶黄素循环途径耗散过量的激发能,以保护光合器官免受伤害。在膜脂过氧化方面,各供试材料在前期SS处理下其超氧化物歧化酶(SOD)活性、超氧化物歧化酶活性/丙二醛含量(SOD/MDA)和相对电导率(RIL)变化幅度不显著,其中‘红凤羽’和野生种更稳定;但在9月1日的SS处理下,各供试材料SOD活性显著降低,且RIL显著上升,说明因外界光强降低而轻度遮荫表现为弱光逆境,使得遮荫延缓衰老进程效果具有阶段性。研究结果为选育强光耐受性强的品种和实现根高产栽培提供依据。     

机场鸟击特点及防范体系构建

鸟击是威胁机场飞行安全的主要因素之一,根据机场鸟击特点有针对性地制定鸟击防范体系对提升飞行安全、减少经济损失具有重要意义。本文收集了重庆市江北机场2009—2016年的鸟击事件信息并送检鸟击残留物,在2010年3月—2011年2月调查了江北机场及周边区域的鸟类群落,将江北机场鸟击物种信息与鸟类群落的物种信息进行相似性分析,同时将江北机场的鸟击信息数据与中国民航2007—2015年的鸟击信息数据进行对比研究。结果显示:(1)江北机场鸟击物种与飞行区鸟类群落的相似性显著高于农耕区(t=2.507,P=0.041)和城镇园林(t=2.562,P=0.037),其中,夏季白天的鸟击物种与飞行区鸟类群落相似性最高(S=0.413 8),表明飞行区鸟类鸟击率更高,是鸟击防范工作的重点区域,夏季更应关注飞行区的鸟类控制;(2)江北机场与中国民航鸟击在季节、时间等方面基本一致,均呈现秋、夏、春季以及夜间鸟击高发的特点;(3)迁徙鸟和家鸽Columba livia domestica、燕子、树麻雀Passer montanus、小云雀Alauda gulgula等部分机场当地常见鸟是鸟击高发的物种。根据分析结果,结合江北机场及各机场鸟击防范工作经验,本文建议从组织机构、制度管理、监控、信息分析、设备防范、环境管理、航班动态调整、应急处置等方面构建鸟击防范体系,以期为江北机场及其他机场提供参考。     

简化高效外殖体遗传转化系统的建立

本文报道了一种简化的,高效的叶盘、茎盘,叶柄等外殖体的转化方珐。利用带mini—Ti的致癌土壤农杆菌(Agrobacterium-tumefaciens)与外殖体短时间的共培养,在含有100μg／ml卡那霉素的台适培养基上筛选到频率达40％以上的转化植株。转化的细胞再生的植株茎、叶等各部分外殖体均有抗卡那霉素的特性,DNA—DNA分子杂交的结果表明转化的植株的DNA中含有npt基因的同源区。转化的植株具有正常的形态,能够正常开花、结实。白花授粉子一代的植株的特性表明外源基因能够通过种子传递。本文讨论了影响转化的因素。     

肘静脉压监测在心力衰竭患者中的应用护理

心力衰竭是心血管系统常见的疾病,致残致死率高。因此,正确评估患者的心功能,对其治疗意义重大。我科于2010年6月～2012年6月采用肘静脉压测定代替中心静脉压测定,以了解治疗前后患者心功能情况,从而指导临床治疗。现将肘静脉压测定中的护理介绍如下。