抗速灭威单链抗体基因在巴斯德毕赤酵母中的表达及性质研究

选用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统表达特异性抗速灭威单链抗体(scFv)基因,以为速灭威特异性抗体的大量制备奠定基础。设计引物扩增阳性克隆scFv基因,亚克隆至表达载体pPICZαC,获得重组酵母表达质粒pPICZαC-scFv,线性化pPICZαC-scFv并高效电转P.pastoris(X-33),对转化子进行抗性梯度筛选得到一株高效表达的X-33-Pp-SMW-12-6菌株。对获得的菌株先后进行表达条件的优化、优化条件下的诱导表达及单链抗体性质研究。结果表明:P.pastoris-scFv的质量接近其亲本E.coli-scFv的质量,X-33-Pp-SMW12-6在优化条件下的表达产量达28mg/L,比未优化前的产量提高了约8mg/L,经纯化后抗体纯度可达85%以上。因此,利用P.pastoris表达系统制备抗速灭威单链抗体比细菌表达系统更有效、更经济。     

槲皮素下调hTERT表达对肝癌HepG2细胞生长影响研究

目的观察槲皮素对肝癌HepG2细胞生长及对hTERT基因表达的影响。方法以台盼蓝拒染法计数肝癌细胞的生长抑制率,透射电镜从形态变化上了解凋亡的发生,流式细胞术检测细胞周期变化,western-blot、RT-PCR检测hTERT基因表达改变,PCR-TRAP法检测端粒酶活性。结果台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性,槲皮素处理48h后的Ic50为25.5μm。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,流式细胞仪检测表明经10～20μm/L的槲皮素处理,肝癌HepG2细胞周期阻滞于G0/G1期,且HepG2细胞hTERT蛋白和mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制。结论槲皮素能抑制肝癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导HepG2细胞发生凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

指端切割伤断离皮片改良缝合原位再植52指体会

目的:介绍指端切割伤断离皮片改良缝合原位再植术的治疗方法、效果和经验总结,分析影响手术疗效的因素.方法:对37例52指指端切割伤断离皮片行改良缝合原位再植.术后随访1～24个月.结果:术后各型指端切割伤断离皮片成活率分别为:Ⅰ型94.7%;Ⅱ型88.2%;Ⅲ68.8%.在指端切割伤断离皮片改良缝合原位再植术式中,其操作简便,疗效确切.虽存在一定的失败风险,但不失为一种积极的治疗方法.结论:只要切割伤离断的皮片仍较完整,而无手术禁忌证,均可予以改良缝合原位再植.彻底的清创、消毒及所植皮片均匀稳定受压、牢固固定,加上感染的预防是成功的关键.     

不同精氨酸添加水平对哺乳仔猪生长性能的影响

为了研究日粮中不同精氨酸(Arg)水平对哺乳仔猪生长性能的影响,试验选用70头7日龄健康哺乳仔猪(长×大),按照所饲日粮精氨酸添加水平的不同(分别为0、0.2%、0.4%、0.6%和0.8%),随机分为5组,每组14头,单栏饲养,试验期为14 天,并分别于7、14和21日龄空腹称重,记录每周采食量;并在采食后1 h颈静脉采血,检测血浆中氨基酸、血浆尿素氮、胰岛素和生长激素浓度.结果表明:7～21日龄段,试验组血浆精氨酸浓度随日粮精氨酸添加水平增大而升高,与对照组相比,0.6%和0.8%精氨酸添加组血浆尿素氮水平分别降低(P<0.05)30%～40%,生长激素和胰岛素的浓度提高(P<0.05)24%～27%,平均日增重分别提高了(P<0.05)42.2%和41.4%;各组采食量在整个试验期内无显著差异.本试验结果表明7～21日龄,仔猪日粮中精氨酸适宜添加水平为0.6%.     

中药超微粉对早期断奶仔猪白细胞分类和抗氧化功能的影响

为了研制高效、安全、无污染的抗生素替代物作为断奶仔猪饲料添加剂,本研究观察了中药超微粉对21日龄断奶仔猪外周血白细胞分类和血清抗氧化功能的影响。结果表明,D7时,超微粉组MDA含量显著小于抗生素组和对照组(P<0.05),NO含量显著小于对照组(P<0.05);D14时,超微粉组NO含量显著大于抗生素组和对照组(P<0.05);D28时,超微粉组NEU计数和百分率及MON百分率均显著小于、LYM百分率显著大于对照组(P<0.05),N/L小于抗生素组(P>0.05)、显著小于对照组(P<0.05),SOD活性显著大于抗生素组和对照组(P<0.05),GSH活性显著大于对照组(P<0.05)。上述指标的变化,与该超微粉对断奶仔猪的防病促生长作用有一定联系。     

乳酸菌抗菌机理研究进展

乳酸菌的抗菌机理涉及其产生的各种代谢产物 ,包括酸性物质、乳酸菌素、二氧化碳和过氧化氢等。其中酸性物质可以消耗大量细胞能量并影响细胞膜的稳定性 ;乳酸菌素可作用于细胞膜 ,造成膜内物质和能量的泄漏。对于它们抗菌机理的认识有助于我们更好的将乳酸菌应用到食品的安全生产中。     

1516例性病门诊患者人乳头瘤病毒感染情况及其基因型别

目的了解性病门诊患者人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及其基因型别。方法用导流杂交分型检测法对1 516例性病门诊患者进行HPV检测与基因分型,评价HPV及其基因型别与疾病类型的关系。结果 1 516例受检者中,HPV总阳性率为55.61%。基因型分析发现,26例鲍温病样丘疹病患者均有高危型HPV感染,而762例尖锐湿疣患者中低危型HPV感染占70.86%。21种HPV基因型均被检出,以HPV6(28.86%)、11(17.23%)、16(10.41%)型感染最为常见。检出的843例阳性患者中单一型别感染占61.68%,以HPV6和HPV11感染为主;HPV多重感染以高低危型HPV混合感染为主。结论 HPV基因型别分布与疾病类型密切相关,HPV亚型的鉴别对相关疾病的预防和治疗具有临床应用价值。     

RNA干扰抑制结肠癌细胞血管内皮生长因子表达

目的 应用RNA干扰技术抑制结肠癌血管内皮生长因子（VEGF）表达。方法 将VEGF基因作为RNA干扰的靶区,通过E-RNAi网上提供的服务,设计两个特异的RNA干扰序列,将其装入含U6启动子的载体上,构建成抗VEGF基因的小发夹样RNA（shRNA）表达载体,再转染人结肠癌细胞HT29,通过RT-PCR、Northern杂交、免疫荧光和Western杂交,观察VEGF表达受抑的程度。结果 成功构建了两种抗VEGF基因的shRNA表达载体,RT-PCR、Northern杂交、免疫荧光和Western杂交,均发现其能明显抑制HT29细胞VEGF基因的表达,抑制率分别达42%、88%、73%和82%。结论 针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制结肠癌细胞VEGF基因的表达。     

RNA干扰抑制结肠癌血管内皮生长因子的体内实验研究

目的:应用RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达,并通过体内实验,观察在体内复杂环境下能否有效抑制VEGF表达,以及结肠癌细胞凋亡的情况,为RNA干扰技术的临床应用奠定基础。方法:体内实验中,将RNA干扰质粒以水动力法导入结肠癌裸鼠模型,通过RT-PCR观察VEGF mRNA表达受抑的程度;Western杂交检测VEGF蛋白的表达情况;通过测量比较瘤体大小和Tunel法,观察VEGF受抑制后,肿瘤形态和细胞凋亡的变化。结果:体内实验中,通过RT-PCR和Western杂交检测,发现这两种抗VEGF表达载体能够有效抑抑制裸鼠结肠癌模型瘤体VEGF的表达;VEGF受抑制后,瘤体增长受到抑制,Tunel法显示,RNA干扰可致肿瘤细胞凋亡增加。结论:Tunel法分析显示,当VEGF受抑制后,肿瘤细胞凋亡发生率明显增加,针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制裸鼠VEGF基因的表达。