人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)组合突变体FrGGI在CHO细胞中的高效表达

为了得到t—PA组合突变体FrGGI在CHO细胞中的高效表达,将表达质粒筛选基因启动子上游的增强子(enhancer)去除．构建了FrGGI真核表达质粒pZLFrGGI。酶切线性化后．采用大剂量DNA电击介导法,转染dhfr基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-dhfr^-)。氨甲喋呤(MTX)筛选转染细胞,混合加压．挑选克隆。在1×10^-7mol／L MTX压力下。获得表达水平达1 500～2500Iu/106细胞·24h的细胞株。此细胞株表达水平稳定,形态良好．倍增时间约为36h．且有进一步提高表达水平的潜能,有望发展为工程细胞株。     

用氯鼠酮大面积防治农田小型害兽试验

地处亚热带的广西,生态环境复杂,危害农业生产的害鼠种类繁多,鼠患历年严重。作者于1990年3—5月在广西百色市那毕地区对害鼠的种群组成进行了调查,并在1000公顷农业区开展了害鼠防治试验,以观察氯鼠酮(CHLOROPHACINONE)对农田多种害鼠的防治效果,结果简报如下。 1.防治区概况 百色市那毕乡防治区位于右江上游河谷的大迴环处,海拔约500米,地势平坦,年降水量约1 000毫米,年平均温度22℃,无霜期超过270天。是百色市重要的农业生产基地。防治区的环境可以划分成以水稻为主的农耕区;以种植甘蔗和菜蔬旱作物为主的河堤区和居民住宅区3类不同的生物小区。     

中国的胎生爬行纲动物

爬行纲的动物大多数为卵生。有些生活在高寒环境的蜥蜴和蛇为卵胎生和胎生。本文对我国爬行纲动物的胎生种类作了介绍,并对此种生殖方式的生物学意义进行了分析。     

索果诺尔渔场叶尔羌条鳅的生态调查

索果诺尔为蒙语“东海”之意,是内蒙古阿拉善盟西北部最大的内陆湖泊,也是该地区自1958年起进行天然捕捞的唯一渔场,1960年夏季,我们作了有关该湖叶尔羌条鳅(简称条鳅)的生态调查。 索果诺尔位于巴丹吉林沙漠中,地居东经101°36′—101°42′,北纬42°20′—42°25′,归额济纳旗管辖,由甘肃省祁连山的融雪和雨季山水供给湖水,面积约八万亩。海拔高度约850米,水深不及1.5米,水质的碱性较强,pH高达9.3,氯化钠含量为7毫克/100毫升,二氧化碳含量为496.5毫克/1000毫升。并不适宜一般淡水鱼类生活。湖底呈杯盘形,其土质的层次是黄沙—泥灰沙—粘土。湖的深处长有水绵     

应用多重RT—PCR技术检测食管癌患者外周血多种肿瘤基因标志物的研究

目的:建立多重RT-PCR同步检测技术,联合检测黑色素瘤抗原MAGEA3基因、人类斯钙素hsTC1基因、上皮细胞角质蛋白CK20、CK19基因及癌胚抗原CEA基因mRNA在食管癌患者外周血中的表达。方法:在分析MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19、CEA和β-actin六种基因mRNA全长序列资料的基础上,自行设计并筛选出6对引物及6条寡核苷酸探针,利用多重RT-PCR技术并结合基因芯片对样本进行检测。结果:全部样品均可检出β-actin,55例食管癌患者外周静脉血中MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA的阳性表达率分别为25.45%、47.27%、49.09%、34.55%和52.73%;多重RT-PCR技术同时检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因,如果至少表达其中一种即可作为阳性表达者,其阳性表达率可达72.73%。而10例食管癌组织中均为阳性,28例正常健康捐献者的外周血中有2例CEA表达阳性,27例非肿瘤病人的外周血中有3例CK20阳性,3例CK19阳性,3例CEA阳性。测序结果证实RT-PCR产物确为MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因。结论:联合检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA可以增加外周血循环癌细胞检测的敏感性,本研究建立的多重RT-PCR技术可以做为一种快速、灵敏的检测手段。     

腹腔镜与开腹手术对胃癌根治术患者TNF-alpha和IL-6 水平的影响研究

目的:探讨腹腔镜与开腹手术对胃癌根治术患者肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平的影响.方法:选取自2011年3月至2013年5月期间来我院就医并行胃癌根治术的72例胃癌患者作为研究对象.并将所有患者随机平均分成腹腔镜组和传统开腹组各36例.其中,腹腔镜组行腹腔镜辅助下胃癌根治术,传统开腹组行传统开腹胃癌根治术.比较两组手术时间、术中出血量、肛门排气时间及住院时间;比较两组患者术前及术后血清TNF-α和IL-6水平.结果:腹腔镜组术中出血量、肛门排气时间及住院时间均明显低于对照组(P＜0.05)腹腔镜组术后TNF-α和IL-6水平明显低于开腹组(P＜0.05),两组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:腹腔镜辅助下胃癌根治术较传统开腹胃癌根治术术后血清TNF-α和IL-6水平低,对机体免疫功能影响较小,可减少患者术后感染机会,值得在临床中推广应用.     

高能聚焦超声治疗晚期胰腺癌的临床研究

目的:研究高能聚焦超声(下简称HIFU)治疗晚期胰腺癌病人疼痛的疗效和外周血免疫功能的变化.方法:应用FEP-BY01肿瘤热疗机对靶组织进行超高温热疗,观察镇痛效果及外周血T细胞亚群活性变化.结果:12例具有疼痛症状的胰腺癌治疗后疼痛缓解率,总缓解率为91.6%(11/12),其中完全缓解率为3.8%(1/12),中度和明显缓解率为66.7%(8/12);治疗前与正常对照组相比,CD3无明显变化(P>0.05),CD4明显降低(P<0.05),CD8偏高,但无明显差异(P>0.05).CD4/CDB明显下降(P<0.05).与治疗后相比,CD3无明显变化,CD4、CD4/CD8呈增加趋势,CD8呈降低趋势.但均无明显差异(P>0.05).热疗未发生严重并发症.结论:HIFU治疗对胰腺癌具有较好的止痛作用,可以改善患者的细胞免疫功能.     

基于流式细胞术分选的高效表达外源基因细胞的筛选

目的：以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告基因,用流式细胞术筛选高表达EGFP的细胞,从而获得外源基因高效表达细胞株。方法：构建在EGFPC端编码区融合新霉素（neomycin）抗性基因的融合基因EGFP-Neomycin,将其插入pcDNA3.1（＋）载体,构建EGFP-Neomycin融合基因表达载体pcDNAEN,转染CHO-K1细胞,G418加压筛选和倒置荧光显微镜观察证实所表达的EGFP-Neomycin融合蛋白具有新霉素抗性和激发EGFP荧光双功能;将编码组织型纤溶酶原激活剂（tPA）的cDNA插入pcDNAEN中CMV启动子下游,构建表达tPA的表达载体pcDNAEN/tPA。结果：流式细胞术分析和tPA纤维蛋白溶解活性测定表明,pcDNAEN/tPA转染CHO-K1细胞的EGFP相对荧光强度（RFT）的自然对数值与tPA表达水平呈明显的直线相关关系,相关系数为0.983;比较部分未经流式细胞仪分选的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆和RFT分布在100～1000的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆的tPA表达水平,经流式细胞术分选获得的细胞克隆的tPA平均表达水平和最高表达水平分别是未经分选获得的细胞克隆的3.9倍和4.1倍。结论：构建的EGFP-Neomycin融合基因具有双功能,建立了利用流式细胞术筛选外源基因高效表达物细胞株的方法。     

搅拌式生物反应器培养促进拟胚体的形成及其向心肌细胞分化

目的：摸索搅拌式生物反应器培养小鼠胚胎干细胞（mESC）的最佳条件,建立一种批量制备拟胚体（EB）的方法。方法：研究mESC不同接种密度及生物反应器初始搅拌速度对EB形成的数量和质量的影响,以细菌培养皿中形成的EB为对照,用抗坏血酸诱导其向心肌细胞分化,比较两种培养体系对EB心肌细胞分化潜能的影响,通过免疫荧光染色及RT PCR对ESC来源的心肌细胞进行鉴定。结果：当mESC接种密度为1×105~3×105个/ml,搅拌速度设定为15~30r/min时,搅拌式生物反应器能高效制备出大量相对均一的EB,EB中几乎没有坏死细胞。与细菌培养皿制备的EB相比,生物反应器培养的EB向心肌细胞分化的效率更高,并表达心肌特异性基因。结论：搅拌式生物反应器培养促进EB的形成及其向心肌细胞分化,是一种更为理想的EB培养系统。