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鼠抗HFRSV衣壳蛋白McAb F3株可变区基因的获取及特性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
培养鼠抗肾综合征出血热病毒衣壳蛋白F3杂交瘤细胞株,提取总RNA,根据鼠源IgG抗体基因家族可变区基因碱基序列的特点,设计简并引物,通过逆转录聚合酶链反应,获得抗体轻链可变区和重链可变区基因。分别将其克隆入载体PT7BlueT Vector,选取阳性重组克隆各两个,分别测定了所载重链可变区和轻链可变区基因的碱基序列,比较了不同克隆轻链可变区基因之间和重链可变区基因之间碱基序列的差异;分析了各自的氨基酸框架及其对应蛋白的亲水性。结果显示,两个重链可变区基因碱基序列有4处不同,同源性为979%;其中重组克隆ZG364 5F所载重链可变区基因有完整的开放阅读框架,对应的蛋白含有丰富的亲水基因,第112氨基酸处亲水性最高;另一重组克隆ZG364 4F所载重链可变区基因不能通读。两个轻链基因碱基序列有4处不同,同源性为991%,重组克隆ZG365 5F和ZG365 7F所载轻链可变区基因均有完整的开放阅读框架,对应的蛋白均含有丰富的亲水基因,ZG365 5F所载基因对应蛋白第67氨基酸亲水性最高,ZG365 7F所载基因对应蛋白第34氨基酸亲水性最高。 相似文献
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根据HFRSV汉滩型(HTN)代表株76-118和汉城型(SEO)代表株R22基因资料,设计了两组引物,用电脑软件分析证明设计符合引物标准。以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段,并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达。非融合表达产量虽不及融合表达高,但生物活性好。以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被抗原,其工作浓度均达1:100000用另一组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测我国不同地区由8种主要宿主分离的37个HFRSV毒株,2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本,并与cELISA法比较,二者阳性检出率分别为100%和84.6%,符合率为84.6%,但前者比后者敏感性高15.4%。对其中20个毒株的PCR扩增产物先后用RsaⅠ和HindⅢ作二级酶切,建立了逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)分型法。被定为HTN型的9株,SEO型的8株,余3株未能定型。此20个毒株曾用血清学方法分型,仅11株分型成功.与RT-PCR-RFLP法结果符合。分型成功率RT-PCR-RFLP法比血清法高30%。 相似文献
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根据HFRSV汉滩型(HTN)代表株76-118和汉城型(SEO)代表株R22基因资料,设计了两组引物,用电脑软件分析证明设计符合引物标准.以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段,并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达.非融合表达产量虽不及融合表达高,但生物活性好.以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被抗原,其工作浓度均达1:10 000.用另一组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测我国不同地区由8种主要宿主分离的37个HFRSV毒株,2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本,并与cELISA法比较,二者阳性检出率分别为100%和84.6%,符合率为84.6%,但前者比后者敏感性高15.4%.对其中20个毒株的PCR扩增产物先后用RsaⅠ和HindⅢ作二级酶切,建立了逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)分型法.被定为HTN型的9株,SEO型的8株,余3株未能定型.此20个毒株曾用血清学方法分型,仅11株分型成功,与RT-PCR-RFLP法结果符合.分型成功率RT-PCR-RFLP法比血清法高30%. 相似文献
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本试验建立了用Tween 80和乙醚处理HFRSV感染鼠脑、肺制备特异性抗原的方法,该抗原具有安全、稳定、特异性好、制备简单的特点,可能是HFRSV抗原的共同组分。 相似文献
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双功能基因工程抗体在不同系统中表达的研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
基因工程双功能抗体是近年来抗体研究的一个热点,利用分子生物学技术,在体外构建基因工程抗体基因片段,与各种类型的表达载体相连,使重组抗体在原核细胞,哺乳类动物细胞,昆虫细胞表达系统中获得表达,其表达量,功能蛋白活性各具特点,显示出在临床肿瘤、病毒病的治疗和诊断方面的应用前景,本文就双功能抗体的构建方式及多种表达系统的研究进展进行综述。 相似文献
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猪链球菌2型mrp基因免疫功能片段的克隆、表达及动物试验 总被引:10,自引:0,他引:10
根据猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)国外分离株的溶菌酶释放蛋白(Muramidasereleased protein, MRP)的基因序列,设计并合成一对引物,利用PCR技术扩增了江苏分离株的开放阅读框298~827bp间529bp的基因片段,并定向克隆至pET32a(+)表达载体中。重组质粒经限制性酶切鉴定和测序,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,可表达分子量约42kD的蛋白。经过镍亲和层析柱层析,获得纯化的重组蛋白。以重组蛋白免疫Balb/c小鼠,以5LD50猪链球菌强毒株攻击后小鼠的相对存活率达625%。证实所表达的MRP片段为重要的保护性抗原。 相似文献