Changes in DNA base sequences in the mutant of <Emphasis Type="Italic">Arabidopsis thaliana</Emphasis> induced by low-energy N<Superscript>+</Superscript> implantation

To reveal the mutation effect of low-energy ion implantation on Ambidopsis thaliana in vivo, T80II, a stable dwarf mutant, derived from the seeds irradiated by 30 keV N⁺ with the dose of 80 X 10¹⁵ ions/cm² was used for Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) and base sequence analysis. The results indicated that among total 397 RAPD bands observed, 52 bands in T80II were different from those of wild type showing a variation frequency 13.1%. In comparison with the sequences of A. thaliana in GenBank, the RAPD fragments in T80II were changed greatly in base sequences with an average rate of one base change per 16.8 bases. The types of base changes included base transition, transversion, deletion and insertion. Among the 275 base changes detected, single base substitutions (97.09%) occurred more frequently than base deletions and insertions (2.91%). And the frequency of base transitions (66.55%) was higher than that of base transversions (30.55%). Adenine, thymine, guanine or cytosine could be replaced by any of other three bases in cloned DNA fragments in T80II. It seems that thymine was more sensitive to the irradiation than other bases. The flanking sequences of the base changes in RAPD fragments in T80II were analyzed and the mutational “hotspot” induced by low-energy ion implantation was discussed.     

不同氮素结合形式对结球生菜植株再生的影响

结球生菜(Lactuca sativa var.capitata)是一种世界性蔬菜,其食味与营养均佳,深受人们的喜爱。但它的留种播期与蔬用播期不一致,加之在南方栽培种株易烂根死亡,给其繁殖与生产带来了一定困难。为了寻找解决这些问题的新途径,作者曾进行了它的组织培养与器官发生的研究。现在此基础上进一步专门研究了在组织培养条件下不同氮素结合形式对该     

黄花菜球状体经秋水仙素处理后再生苗加倍效果及快速增殖的研究

黄花菜(Hemirocallis citrina)是我国特产蔬菜,湖南省是主产区,目前种植的优良品种花蕾达不到部颁重量标准,我们试图用细胞工程技术诱发黄花菜多倍体,提高花蕾重量,改良品质。用秋水仙素处理黄花菜球状体,再生苗获得了较好的加倍效果。有芽状突起的球状体经0.05%的秋水仙素溶液处理,加倍效果在50%以上;没有芽状突起的球状体加倍效果仅为14.2%左右,而且球状体在培养中愈伤组织化。     

影响水稻幼穗培养体细胞胚胎发生因素的研究

用水稻幼穗为外植体进行组织培养,研究了影响其体细胞胚胎发生的有关因素,建立了高频率体细胞胚胎发生的培养程序。结果表明不同基因型之间体细胞胚胎发生率的差异达到61．2％;生长素2,4－D对诱导水稻体细胞胚起重要的调控作用,细胞分裂素BA有一定的协同促进作用。干燥处理可提高愈伤组织体细胞胚胎发生率,愈伤组织含水量在60％～80％范围的培养效果较好;外源DNA溶液浸泡发育早期的心状体细胞胚．其进一步发育时异常胚的频率显著增加．成苗率降低。     

乌桕SsSAD基因的原核表达与纯化研究

乌桕是一种重要的木本油料树种。SAD(stearoyl-acyl ACP desaturase)是油料植物中将饱和脂肪酸转变成不饱和脂肪酸的一种关键脱氢酶。为了进一步揭示乌桕SsSAD的功能,该研究在大肠杆菌中表达了该蛋白。结果表明:(1)通过RT-PCR的方法从乌桕种子中克隆出了SsSAD基因编码区全长序列,并将其克隆到低温诱导的原核表达载体pCold TF上,构建原核重组表达载体pCold TF/SsSAD,转化大肠杆菌BL 21star(DE3)并获得原核表达工程菌株。(2)通过IPTG法低温诱导表达融合蛋白。该重组质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,融合蛋白分子质量约为101kD,且在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化和Western blotting检测证实获得了重组蛋白,上述结果为进一步研究乌桕SsSAD的结构和功能奠定了基础。     

转GFP::cDNA基因拟南芥筛选及相关基因的功能分析

本研究以随机GFP::cDNA融合基因转基因拟南芥为材料,筛选到在细胞核或在细胞核和细胞质中均表达GFP信号的转基因株系58个。对这些转基因株系中的cDNA插入片段进行克隆,获得4株插入片段能按原初编码框进行编码的转基因株系。对插入片段为编码富含甘氨酸蛋白AtGRP8 C-末端(富含甘氨酸的结构域)的转基因株系R2的表型分析发现,连续白光、红光或蓝光下其幼苗的下胚轴比野生型的要短,且较低光照强度白光(低于100μmol m-2s-1)、蓝光(低于75μmol m-2s-1)下的差异更加明显,但是黑暗中其幼苗的下胚轴与野生型相比无明显差异,表明AtGRP8蛋白可能通过其C-末端功能域参与调控拟南芥的光形态建成反应。     

拟南芥蓝光受体CRY2的功能及其介导的光形态建成

植物具备一套复杂的由两种蓝光受体和多种信号转导下游组分组成的蓝光感应系统,通过感受光照强度、光的方向和光周期,调节自身对蓝光的应答.蓝光反应的有效波长是蓝光和近紫外光(320～400nm),故蓝光受体也叫蓝光/近紫外光受体.CRY2(Cryptochromes,CRY)是一个核蛋白,在转录水平受蓝光的调节,它的作用是增加拟南芥对蓝光的敏感性.植物蓝光调节的反应主要有向光性、抑制幼茎伸长、叶绿体迁移、刺激气孔张开和调节基因表达等.对植物蓝光反应突变体分子生物学研究进展进行了综述,对蓝光受体及信号转导下游组分在植物发育中的作用及蓝光诱发植物作出反应的分子机制进行了探讨.     

激素对盾叶薯蓣愈伤组织细胞生长和薯蓣皂甙元合成的调控

不同生长素对盾叶薯蓣 (DioscoreazingiberensisC .H .Wright)愈伤组织细胞生长量的影响差异是NAA >IAA >2 ,4 D ,而对薯蓣皂甙元合成的影响是 2 ,4 D >IAA >NAA。在有生长素存在的条件下 ,光照 2 4h ,另加 0 5mg LKT促进愈伤组织细胞的生长 ,而附加 0 5mg LBA促进薯蓣皂甙元的合成 ;相反 ,光照 12h ,另加 0 5mg LBA促进生长 ,附加 0 5mg LKT促进合成。愈伤组织生长越旺 ,薯蓣皂甙元积累越少。低浓度的生长素促进薯蓣皂甙元的合成。     

受光调节的拟南芥锌指蛋白DBB（DoubleB-Box）亚家族基因的转录表达

整合微阵列数据和采用实时荧光定量PCR分析拟南芥锌指蛋白DBB亚家族中8个基因在不同光周期和不同光质条件下转录表达的结果表明,在长日和短目照条件下该家族中6个基因的转录都具有光周期节律性,并且其中4个基因的表达受光诱导,有1个基因的表达受光抑制,1个基因的表达不受光调节。     

水稻赤霉素代谢关键酶基因表达的检测分析

赤霉素(GA)与水稻矮化突变体的产生有密切的关系.根据GenBank数据库中水稻赤霉素代谢关键酶基因的cDNA序列,在保守序列区域设计引物,经过反应条件优化,建立了相对定量RT-PCR双标准曲线检测方法,并对中9B及其体细胞无性系矮化突变体SV9B的相关基因表达情况进行了检测.结果表明,该方法设计的引物特异性强,所构建的标准曲线相关性好,实验具有很高的可信度,可以应用于水稻赤霉素相关突变体的研究.