人胎盘雌二醇 17β-脱氢酶的染料凝胶亲和层析

利用染料凝胶亲和层析及DEAE-Sepharose离子交换层析改进了雌二醇17β-脱氢酶的提纯方法,提纯的酶的质量有所改进,制备步骤简便,且凝胶层析柱可以反复使用。     

心房钠尿肽(ANP)对大鼠卵巢细胞生成雌激素与孕激素的影响

应用大鼠卵巢黄体细胞、颗粒细胞培养以及放射免疫分析法,观察了α型心房钠尿肽(α-ANP)对性甾体激素孕酮(P)和雌二醇(E_2)分泌的影响,结果发现,0.1—10ng/ml 浓度的α-ANP 促进离体培养的大鼠黄体细胞分泌孕酮,并呈量效关系。α-ANP 也促进大鼠卵泡颗粒细胞分泌孕酮,但对分泌雌二醇没有影响。说明α-ANP 也影响卵巢分泌功能。     

褪黑素抑制雌二醇诱致的垂体PRL瘤生长与血浆PRL和过氧化脂质含量的关系

雄性大鼠皮下埋置17-β雌二醇(17-β-estradiol,E2)药泵诱发垂体催乳素PRL)瘤,并每日皮下注射褪黑素(melatonin,MLT)观察MLT对E2诱发PRL瘤生长的影响.另外,采用放免法和紫外分光光度法测定大鼠血浆PRL和过氧化脂质(peroxidativelipid,PL)浓度,观察PRL瘤重量与大鼠血浆浓度间的相关关系.实验结果显示,在对照组、0.05、0.25、0.50、1.00和2.00mgMLT组,PRL瘤重量分别为115.0±71.0、85.2±41.0、58.9±24.1、72.7±23.6、79.3±56.1、74.5±46.8mg;血浆PRL浓度分别为493.46±33.3、373.78±26.5、125.13±13.3、201.79±11.2、418.88±41.3、281.94±36.4ng/ml;血浆PL水平分别为1.21±0.23、0.89±0.32、0.92±0.27、0.64±0.24、0.41±0.14、0.43±0.21△D233/ml.相关性分析表明,PRL瘤重量与血浆PRL浓度间的相关系数为0.8738(P＜0.05),与血浆PL水平间的相关系数为0.5550(P＞0.05),血浆PRL浓度与血浆PL水平间的相关系数为0.2141(P＞0.05).该结果提示,(1)0.25(P＜0.01)、0.50(P＜0.05)mgMLT能有效抑制E2诱致的PRL瘤生长和PRL分泌,所有剂量的MLT均能抑制血浆PL的形成;(2)PRL瘤重量与血浆PRL浓度间呈正相关关系,PRL瘤重量与血浆PL水平间、以及血浆PRL浓度与血浆PL水平间均无相关关系.因此,我们认为,MLT抑制E2诱致的PRL瘤生长可能与MLT抑制PRL表达性分泌有关,但与MLT抗氧化作用无关.     

恶臭假单胞菌SJTE-1中氧化17β-雌二醇的17β-羟甾类脱氢酶2及其转录调控因子AraC的鉴定

[目的]假单胞菌SJTE-1可高效转化17β-雌二醇,但其代谢机制尚不清楚。本文鉴定和表征了该菌株中参与雌二醇降解与调控过程的17β-羟甾类脱氢酶2(17β-HSD2)和转录调控因子AraC。[方法]我们通过荧光定量PCR分析了17β-hsd2和araC的转录水平;我们在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中异源表达了17β-HSD2和AraC基因,并利用金属离子亲和层析法纯化获得了重组蛋白;我们体外表征了17β-HSD2的酶学性质,利用高效液相色谱鉴定了其产物;通过电泳迁移转移法和DNase酶I足迹试验,我们鉴定了重组蛋白AraC的结合能力与结合位点。[结果]17β-HSD2和AraC可被17β-雌二醇诱导表达;蛋白序列比对结果表明17β-HSD2含有短链脱氢酶/还原酶(SDR)和β-羟甾类脱氢酶的保守结构与残基。该酶以NAD+为辅助因子,在C17位点氧化17β-雌二醇,其Km值为0.082 mmol/L,Vmax值为56.26±0.02μmol/(min·mg);5 min内可转化97.4%以上的雌二醇。转录调控因子AraC可直接结合17β-hsd2基因启动子区的特异位点;雌二醇与雌酮可解除这一结合,启动17β-hsd2基因转录;过表达AraC蛋白可抑制17β-hsd2的转录。[结论]假单胞菌SJTE-1的17β-羟甾类脱氢酶2可高效催化17β-雌二醇转化,并受到转录因子AraC的直接调控。本工作可推进细菌的雌激素降解酶学机制与调控网络研究。     

圈养马麝刻板行为表达与粪样类固醇激素的关系

2017年7月1日-8月31日及2018年6月1日-7月31日,在甘肃兴隆山保护区马麝繁育中心,采用焦点取样法和连续记录法进行了圈养马麝的刻板行为取样,采集同期粪样,并用放射免疫分析法（RIA）检测粪样中肾上腺皮质醇、睾酮及雌二醇激素的水平,分析了圈养马麝刻板行为表达与上述3种激素水平的关系。结果显示,展现刻板行为的圈养马麝的皮质醇水平（111.099 ± 16.231）ng/g略高于无刻板行为表达的马麝（95.640± 9.738） ng/g,差异未达显著（P> 0.05）;展现刻板行为雄麝的睾酮水平（135.900± 21.582）ng/g略高于无刻板行为的雄麝（108.182 ± 9.689） ng/g,差异也不显著（P> 0.05）;展现刻板行为雌麝的雌二醇水平（0.445 ± 0.116）ng/g显著低于无刻板行为雌麝（10.843 ± 1.142）ng/g（P< 0.05）。研究结果表明,圈养雄性马麝的刻板行为表达与其类固醇激素水平不相关;而雌麝的刻板行为表达与雌二醇分泌显著负相关,这与其繁殖及健康状况有关。在麝类驯养实践中,可将粪样类固醇激素水平（尤其是雌二醇）作为其受胁迫水平及行为健康的监测指标。     

补肾壮骨颗粒对去卵巢大鼠血清GH和IGF-1及其骨组织中受体表达的影响*

目的:探讨补肾壮骨颗粒对去卵巢大鼠血清生长激素(GH)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及其骨组织中相关受体表达的影响。方法:SD未育雌性大鼠48只(体重273.0±21.3g),分为4组,补肾壮骨颗粒组(BSZG组)给药量为2.5 g/(kg·d),戊酸雌二醇组(E2组)给药量为0.071 mg/(kg·d),假手术组(SHAM组)及去卵巢模型组(OVX组)灌服等量生理盐水。每组各12只,每日干预1次。分别干预3个月、6个月后各取半数,活体采用骨密度仪检测骨密度(BMD)后进行取材,ELISA法检测血清GH和IGF-1,qPCR法检测骨组织GHR及IGF-1R,Image J软件分析垂体GH免疫组化片OD值和阳性细胞计数。结果:①干预3个月后,与SHAM组相比,OVX组腰椎及脊柱BMD均下降(P＜0.05),两药物干预组未见明显差异(P＞0.05);与OVX组相比,BSZG组两部位BMD及E2组脊柱BMD均有所上升(P＜0.05),但两药物干预组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。干预6个月后,与SHAM组相比,OVX组腰椎及脊柱BMD均有下降(P＜0.05),两组药物干预组BMD无明显下降(P＞0.05);与OVX组相比,两药物干预组脊柱及股骨BMD均上升(P＜0.05),但两药物干预组组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。②两阶段干预后,与OVX组相比,BSZG组血清GH及IGF-1、骨组织GHR及IGF-1R的表达水平均上升(均P＜0.05);E2组血清GH和左侧胫骨两受体表达水均上升(P＜0.05),但血清IGF-1水平不变(P＞0.05)甚至下降(P＜0.05)。③两阶段干预后,与SHAM组相比,OVX组光密度值及阳性细胞计数均有下降(P＜0.05);与OVX组相比,两药物干预组光密度值和阳性细胞数均有上升(P＞0.05)。④Pearson相关分析显示:血清GH、IGF-1浓度及其骨组织受体与BMD呈正相关。血清GH浓度与光密度值及阳性细胞数呈正相关。结论:补肾壮骨颗粒可提高去卵巢骨质疏松大鼠血清GH、IGF-1及其骨组织中受体的表达水平,防止骨量的进一步丢失和增加骨密度。     

17β-雌二醇及其受体调节剂对去卵巢大鼠子宫钙黏蛋白和连环蛋白表达的影响

目的：探讨17β-雌二醇（Est）及其受体调节剂对去卵巢大鼠子宫钙黏蛋白和连环蛋白表达的影响。方法：大鼠卵巢切除后隔日皮下注射17β-雌二醇以及17β-雌二醇合并他莫昔芬（Tam）的芝麻油溶液,21d后取子宫组织,用免疫组化法及蛋白免疫印迹法检测不同处理组上皮钙黏蛋白（E-eadherin）、α-连环蛋白（α-catenin）、β-连环蛋白（β-catenin）的表达。结果：①钙黏蛋白和连环蛋白在卵巢切除组中具有较高表达,显著高于假手术组;17β-雌二醇可下调钙黏蛋白和连环蛋白的表达。②他莫昔芬对Est（0．1mg／kg）引起的钙黏蛋白、连环蛋白表达下调表现为拮抗作用,而对Est（1．0mg／kg）则表现为协同作用。结论：17β-雌二醇可下调大鼠子宫钙黏蛋白和连环蛋白的表迭但无剂量效应,该作用可能部分通过雌激素受体起作用。     

鱼腥藻对水中17α-乙炔基雌二醇的催化光降解

利用紫外杀菌灯(λ=254nm,30w)作为光源,采用鱼腥藻悬浮体系,研究了水溶液中17α-乙炔基雌二醇(EE2)光降解反应中影响降解速率的相关因素。实验结果表明,EE2浓度在5—20mg／L范围内,光降解效率与EE2初始浓度成正比,反应是假一级反应。藻的浓度对EE2的降解效率有一定的影响。光降解产物的红外光谱(IR)表明,EE2在紫外光作用下光降解破坏了苯环,开环结果生成了C=0结构产物,同时表明可能发生脱碳反应。     

麋鹿茸与梅花鹿茸、鹿茸雌二醇含量比较

In order to reveal the biochemical basis for the pharmacological use of the antler velvet of Père David's deer (Eluphurus davidianus), we analyzed the estradiol concentrations of velvet tissue samples. We collected velvet tissue from Père David's deer, sika deer (Cervus nippon) and fallow deer (Dama dama). After extracting steroids from velvet tissue with ether, we analyzed the estrdiol concentrations using radioimmunoassay technique. We found that: (1) estradiol concentrations were significantly different in the velvet tissue of these three cervids (P<0.05) and (2) Père David's deer stags had the highest velvet tissue estradiol concentrations, 105.29±27.53 pg/g. [Acta Zoologica Sinica 49(1):124-127,2003].