青蒿琥酯联合头孢菌素类药物对多重耐药肺炎克雷伯菌抗菌活性的分析

为探讨青蒿琥酯(artesunate,ASN)单独或联合头孢菌素类药物对多重耐药(multidrug-resistant,MDR)肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的抗菌活性.本研究收集2018年长沙市中心医院临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌菌株32株.分为单独用药组:青蒿琥酯(ASN)组、头孢曲松钠(CRO)/头孢他啶(CAZ)组和联合应用组.采用细菌动态生长曲线法观察青蒿琥酯联合头孢菌素类药物对多重耐药肺炎克雷伯菌的生长影响;采用微量肉汤稀释法检测青蒿琥酯单独或联合头孢菌素类药物对多重耐药肺炎克雷伯菌的抗菌作用;采用RT-PCR技术检测外排泵基因AcrB mRNA以及其调控基因MarA和AcrR mRNA的表达水平.结果 显示,终浓度为2048μg/mL ASN联合头孢曲松钠、头孢他啶明显地抑制了多重耐药肺炎克雷伯菌的生长,曲线走向平缓;终浓度为1024μg/mL ASN联合头孢曲松钠、头孢他啶对多重耐药肺炎克雷伯菌的MIC50与单独用药组比较显著减低,均有统计学意义(K=68.07,P＜0.05;K=62.34,P＜O.05).1024 μg/mL ASN联合头孢曲松钠、头孢他啶均以相加作用为主;2048μg/mL青蒿琥酯和头孢曲松钠、头孢他啶联用时,可以抑制外排泵基因AcrB的表达,2048 μg/mL青蒿琥酯联合512 μg/mL头孢曲松钠明显抑制正向调控子MarA的表达,而对于负性调控子AcrR的表达没有明显影响.青蒿琥酯能显著改善多重耐药肺炎克雷伯菌对头孢曲松钠以及头孢他啶的敏感性,其机制可能与下调外排泵基因AcrB的表达有关.     

抗HLJ1单克隆抗体的制备及抗原检测方法的建立

为制备抗人肝脏DnaJ-like蛋白(Human liver DnaJ-like protein, HLJ1)的单克隆抗体, 并建立免疫组化和双抗体夹心ELISA检测HLJ1的方法。采用淋巴细胞杂交瘤技术, 获得两株能稳定分泌抗HLJ1单克隆抗体的杂交瘤细胞株A4C7和 C4C8。经鉴定, 两株单抗的亚类均为IgG1, 并且效价高、特异性好。以单抗A4C7和C4C8作为一抗, 对人胎肝组织石蜡切片进行免疫组化染色, 结果表明, 两株单抗均为阳性染色, 且HLJ1主要定位于胎肝细胞的胞浆。选取A4C7进行HRP酶标记, 并以HRP- A4C7作为酶标抗体, 以C4C8作为包被抗体, 建立双抗体夹心ELISA方法, 并进行棋盘滴定确定抗体的最佳工作浓度。该检测方法的线性范围是15~750 ng/mL, 灵敏度下限达15 ng/mL, 特异性良好。所建立的免疫组化和双抗体夹心ELISA 法可用于快速、灵敏地检测组织及血清中的HLJ1蛋白, 为HLJ1的肿瘤相关性研究提供了有力的工具。     

泡桐花油的GC-MS分析及抑菌作用研究

本文采用索氏提取法提取泡桐花脂溶性成分,并用GC-MS联用技术对其成分进行分离鉴定.共分离出45个组分,各组分提取质谱图,经用人工解析及NIST05标准谱库检索定性,峰面积归一化法定量分析,计算出各成分的相对百分含量.其中含量较高的化学成分有3,7,11,15-四甲基十六-1,6,10,14-四烯-3-醇(14.74%)、二十三(碳)烷(5.79%)、9,19-环羊毛甾-24-烯-3-醇(5.41%)、十六(烷)酸(5.09%)、十六烷基环氧乙烷(4.93%)等.对泡桐花索氏提取后的部分进一步水提,并分别测定其脂溶性成分和水溶性成分对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的体外抑菌作用.得知其脂溶性成分对金黄色葡萄球菌抑制作用较强,而水溶性成分则对大肠杆菌抑制作用较强.本次实验,可为泡桐花资源的进一步开发利用提供一定的理论依据.     

不同直径山羊卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力

目的研究山羊卵巢表面不同直径卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力,优化山羊早期胚胎体外生产系统。方法收集繁殖期和非繁殖期山羊卵巢,采集表面直径小于1.5 mm、1.5-2.5 mm、2.5-3.5 mm和大于3.5 mm4种卵泡卵母细胞,以Hoechst33342染色检查核发育阶段;同时,利用体外培养方法观察不同直径卵泡卵母细胞的成熟、受精和早期胚胎发育能力。结果直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞主要处于GVI期;1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞以GVⅠ、GVⅡ和GVⅢ期为主;2.5-3.5 mm卵泡卵母细胞在GVⅡ到GVⅣ期间平均分布;大于3.5mm卵泡卵母细胞主要为GVⅢ到GVBD期。体外培养实验发现,直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞仅有个别能完成成熟和卵裂;大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,能完成成熟和受精,但1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞的受精卵通常阻滞于4-8细胞期;当卵泡直径大于2.5 mm时,卵母细胞才能较好地支持胚胎继续发育,其桑/囊胚的比例达到30%以上。卵泡卵母细胞的发育特征和体外发育能力与动物所处的繁殖季节无关。结论山羊卵巢上直径大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,大于2.5 mm卵泡卵母细胞能支持早期胚胎继续发育。     

一个控制拟南芥小孢子发育基因的定位

通过EMS诱变、背景纯化与遗传分析,从拟南芥突变群体中分离到一株单隐性核位点控制的雄性部分不育突变体pms15-16-2-3.细胞学观察表明,突变体在花药发育的过程中,中层细胞延迟降解,绒毡层细胞形态分化异常,出现异常的四分体,导致最终只能形成少量的花粉.利用图位克隆的方法对该基因进行了定位,结果表明PMSl5-16-2.3基因位于拟南芥第3条染色体BAC克隆T24C20 上的28 kb区间内.目前该区间内尚未见到控制小孢子发育基因的报道,因此该基因是一个控制小孢子发育的新基因.本研究结果对同的基因的克隆及其在化粉发育中的功能研究奠定了基础.     

外源基因对精子的影响及其在山羊早期胚胎中的表达

摘要: 在前期实验中发现, 山羊精子可自发结合外源DNA, 但结合能力在不同动物个体之间差异显著。挑选结合能力明显不同的3只公羊, 进一步探讨了外源DNA对精子的影响及其在早期胚胎中的表达, 结果发现: 外源基因与精子共同孵育后, 精子的活率、顶体反应发生率和受精能力均呈下降态势, 其降幅与精子的结合能力密切相关。利用与DNA共育后的精子进行体外受精, 外源基因可被导入卵母细胞并在早期胚胎中获得表达, 但胚胎阳性率因精子供体不同而差异显著(P<0.05); 其中来源于高、中结合能力供体生产的胚胎, 分别有16.2%(25/154)和5.3%(4/76)可检测到外源基因存在, 但表达仅见于高结合能力供体生产的早期胚胎, 表达率为6.5%(10/154); 低结合能力供体生产的胚胎无外源基因。研究表明, 在以精子载体方法生产转基因动物的实验过程中, 筛选对DNA结合能力较强的精子供体是提高转基因效率的前提, 但需要考虑外源DNA对精子受精能力的影响。     

阴道镜检查宫颈原位癌的临床使用价值

严重威胁妇女健康的肿瘤,居首位的当推宫颈癌。在我国,通过大规模普查普治,通过细胞学检查、阴道镜下活检和子宫颈管刮术等措施后,诊断早期宫颈癌与异形上皮取得了较高的准确率。阴道镜检查在妇科是一种很有使用价值的辅助诊断方法。自1925年Hinselmann首先用阴道镜诊断早期宫颈癌以来,在国外已有近六十年的历史,国内应用阴道镜诊断早期宫颈癌的工作从1957年即已开始。它能准确地发现肉眼看不见的病变部位及其范围,大大提高诊断的准确性,使早期病例得     

微生物硫代谢与抗逆性

硫代谢是微生物重要的生命代谢活动。微生物对外源硫酸盐的转运、同化、代谢调控以及重要含硫化合物的生物合成，不但与微生物生长代谢相关，而且影响微生物在胁迫环境下的抗逆性和鲁棒性。目前，大部分研究都聚焦在微生物硫酸盐同化过程和H₂S产生，对于微生物硫代谢与抗逆性相关的研究较少。本文总结了近年来微生物硫代谢过程中的硫酸盐转运、同化路径以及调控方式；并结合微生物在不同胁迫条件下的氧化应激反应，探讨了含硫化合物如硫化氢、谷胱甘肽和半胱氨酸等提高微生物抗逆性的机制。硫代谢与微生物抗逆性相关机制的解析不仅为理解微生物硫代谢与抗逆性提供理论基础，也为设计与构建抗逆性强的高产稳产工业菌株提供分子靶点。     

甲状腺功能亢进性心脏病患者血清BNP及CRP水平及其与心功能的关系

目的:研究甲亢性心脏病患者血清BNP(B-type natriuretic peptide)与CRP(C-reaction protein)水平及其与心功能的关系。方法:选择2015年10月至2017年3月在我院进行治疗的甲亢性心脏病患者68例作为观察组,同期选择在我院进行常规体检的健康者35例作为对照组。采用免疫放射法检测血清BNP水平,免疫比浊法检测血清CRP水平。比较两组血清BNP、CRP水平的差异及不同心功能甲亢性心脏病患者血清BNP、CRP水平,分析血清BNP、CRP水平与甲亢性心脏病患者心功能的相关性。结果:观察组血清BNP、CRP水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);观察组心功能Ⅱ级患者血清BNP、CRP水平明显高于心功能Ⅰ级患者(P0.05);心功能Ⅲ级患者血清BNP、CRP水平明显高于心功能Ⅱ级患者(P0.05);心功能Ⅳ级患者血清BNP、CRP水平明显高于心功能Ⅲ级患者(P0.05);观察组治疗后血清BNP、CRP水平较治疗前显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。甲状性功能亢进性心脏病患者血清BNP、CRP水平均与其心功能等级呈显著正相关(r=0.742,P=0.037;r=0.857,P=0.011)。结论:甲亢性心脏病患者血清BNP与CRP水平均显著升高,可能用于甲亢并发甲亢性心脏病的早期诊断及心功能评估的重要参考指标。     

胆红素提取工艺中的皂化水解条件

为提高胆红素生产效益,采取正交实验法,优化皂化水解pH、温度和时间。结果表明:在pH12.0、105℃、20 min时,胆红素粗制品收率平均为0.866 7 g/L,但纯度仅为24.01%,折合纯品收率为0.208 1 g/L。胆红素的纯度在pH11.0、100℃、10~30 min时,平均纯度为67.91%,但粗制品收率仅为0.402 2 g/L,折合纯品收率为0.273 1g/L。胆红素的折合纯品收率,在pH10~12、100℃、20 min时,平均可达0.366 8 g/L,粗制品收率为0.568 9 g/L、纯度64.12%,此时胆红素的生产效益比传统方法提高了43.9%。