蛋白酪氨酸激酶NOK／STYK1胞内区的表达与纯化

目的：酪氨酸蛋白激酶NOK／STYKl具有很强的促肿瘤形成和转移能力,被认为是很有前途的肿瘤治疗靶点。由于NOK含有一个跨膜区,且富含疏水性氨基酸,其表达和纯化非常困难,直接影响了对其功能及相关分子机理的深入研究。本研究目的是获得可溶的且纯度较高的NOK胞内区融合蛋白ANOK（AA：49—422）,为后续抗体的制备和功能研究奠定重要基础。方法：含有△NOK基因的原核表达载体,转入E-coliBL21中,IPTG诱导蛋白表达,通过亲和层析获得可溶的△NOK融合蛋白。融合蛋白经凝血酶酶切后,凝胶过滤层析分离标签蛋白获得z~NOK蛋白。同时,我们还通过Bac-to-Bac系统获得含有ANOK基因的杆状病毒,感染sO细胞,尝试在真核细胞中表达目的蛋白。结果：通过在sf9昆虫细胞和大肠杆菌表达系统中盐浓度等各种条件的摸索,首次获得了可溶的且纯度较高的NOK胞内区融合蛋白（ANOK—GST）和一定量去除标签的ANOK蛋白。本研究中与大肠杆菌相比,昆虫细胞并不适合△NOK的纯化。结论：我们建立了一套优化的NOK蛋白表达和纯化体系,从而为后续抗体制备和各种体内外生化实验等功能研究奠定基础,为研究NOK在肿瘤中的作用和药物筛选创造条件。同时丰富了整个RTKs家族作用机制的探索,进一步促进了以RTKs为靶点的治疗手段在临床上的应用。     

粳稻地方品种孕穗期耐冷性鉴定及耐冷性状间相关分析

利用原产于中国18省的329份粳稻地方品种为试验材料,在自然低温和冷水胁迫下进行了孕穗期耐冷性鉴定和主要耐冷性状间相关分析。结果表明,自然低温和冷水胁迫下各粳稻地方品种间存在明显的耐冷性差异,共鉴定筛选出黑壳粘、红芒大足、红须贵州禾、冷水谷、须糯等31份孕穗期耐冷性强的粳稻地方品种。其中原产于贵州省的黑壳粘在自然低温和冷水胁迫下均表现出较强的孕穗期耐冷性。自然低温与冷水胁迫下孕穗期耐冷性鉴定结果呈极显著正相关。自然低温下结实率与穗颈长、穗长和秆长呈显著或极显著正相关,而与抽穗天数呈极显著负相关。在冷水胁迫下结实率与株高呈极显著正相关,而与抽穗天数呈极显著负相关;结实率的冷水反应指数(CRI)与株高CRI呈显著正相关,而与有效穗数CRI呈显著负相关。     

220例成人麻疹临床特征分析

本文旨在回顾性分析2003年1月～2008年12月上海交通大学附属第六人民医院收治的220例成人麻疹患者临床资料,探讨成人麻疹患者临床特征。220例患者(男124例,女96例),平均年龄(34.6±4.2)岁,外来人员占70.91%,发病集中于4、5月,血清麻疹IgM抗体阳性率为93.18%,183例(83.18%)热峰高于39℃,86例(39.09%)并发麻疹病毒性肝炎,31例(14.09%)并发腹泻。麻疹发病年龄后移,具有较重的病毒血症以及肝脏损害等临床特征。     

64层螺旋CT脑血管造影在颅内动脉瘤诊断中的应用

目的:探讨64层螺旋CT血管造影(CTA)对颅内动脉瘤的诊断价值。方法:回顾性分析54例临床怀疑为颅内动脉瘤,并同时行64层CTA和DSA检查的病例,其中47例疑诊动脉瘤患者行动脉瘤夹闭手术,将MSCTA,DSA与手术结果对照。结果:54患者中经MSCTA检出57个动脉瘤,DSA检出55个动脉瘤,另7例MSCTA和DSA均未检出动脉瘤,余47例接受手术并检出58个动脉瘤。64层CTA发现动脉瘤的敏感性为96.6%,特异性为87.5%,准确性为96.5%,阳性预测值为98.2,阴性预测值为77.7。MIP和VR技术对动脉瘤的形态、分支血管、血栓和钙化方面的显示优于DSA。结论:64层CTA诊断颅内动脉瘤具有较好的异性、敏感性及三维显示能力,具有较高的临床应用价值。。     

重组卡介苗HSP65抑制小鼠移植黑色素瘤的初步药效学研究

观察卡介苗来源的热休克蛋白HSP65对小鼠移植黑色素瘤的抑制作用并初步探讨可能的作用机制。通过基因工程手段获得纯化的重组HSP65蛋白,与弗氏佐剂联合给药C57BL/6J小鼠。分别设计了两组免疫方案,一组于肿瘤细胞接种前免疫3次,另一组于肿瘤细胞接种前免疫7次。结果在免疫3次的情况下,虽然也能激发较高的特异性抗HSP65抗体,但抑瘤效果不明显(抑瘤率14.2%);增加免疫次数到7次后,抑瘤率高达73.2%,效果显著。经肿瘤组织病理切片发现,增加免疫次数导致肿瘤组织中灶性坏死增加,淋巴细胞浸润增加,且肿瘤细胞病理性核分裂相减少,提示了该疫苗作用的可能机制。     

白菜型油菜(B. Chinensis)与海甘蓝(Crambe abyssinica)属间杂种的细胞学观察

白菜型油菜与海甘蓝属间杂种F₁代染色体数目早期为2n=55。经多代组培无性繁殖后,杂种染色体大量减少,数目变化于25～28条间,平均为26条。杂种PMC减数分裂中,平均配对构型为0.06Ⅲ+11.26Ⅱ+3.80Ⅰ,二价体数目变化于8～13之间,以10Ⅱ、11Ⅱ、12Ⅱ的细胞出现频率较高,分别为26.60%,23.91%和30.98%,单价体数目变化于0～8个之间。杂种染色体数目减少,二价体个数较高,这说明海甘蓝染色体在大量丢失的同时,白菜型油菜的染色体组发生了自然加倍。在后期Ⅱ观察到三分体、染色体落后、染色体桥等异常现象。      

CTLA4对慢性乙型肝炎患者淋巴细胞增殖的影响

目的:探讨CTLA4对乙型肝炎的免疫调节作用.方法:根据已公布的CTLA4核酸序列,设计并合成CTLA4 siRNA,转染乙肝患者外周血淋巴细胞并观察淋巴细胞增殖反应指数的变化.结果:用CTLA4特异siRNA转染后,慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞增殖反应指数增加,与阴性对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:抑制CTLA4有助于慢性乙型肝炎患者细胞免疫的增强.     

微生物发酵-膜分离法制备褐藻胶寡糖及其产物分析

比较褐藻胶裂解酶产生菌Alteromonassp .在摇瓶和发酵罐培养过程中生物量、褐藻胶寡糖含量以及褐藻胶裂解酶活性的变化 ,根据其变化确立了通过微生物发酵 膜分离技术结合制备褐藻胶寡糖的条件 ,并对寡糖进行凝胶过滤色谱和薄层色谱分析。用组成为每升含酵母粉 5g、蛋白胨 10g、FeSO4 0 1g、褐藻酸钠 12g、NaCl 1 5g ,pH为7 5的培养基 ,在 2 8℃培养褐藻胶裂解酶产生菌 ,结果表明 ,发酵罐培养 30h ,发酵液寡糖含量达到最大。发酵液通过超滤 纳滤两级膜分离 ,得到褐藻胶寡糖 ,寡糖的回收率和脱盐率分别为 94 0 %和 93 3%。通过凝胶柱分离和TLC分析 ,得到 5个褐藻胶寡糖组分。     

角蛋白酶研究进展

角蛋白化学结构稳定,不易被一般的蛋白酶降解;但作为角蛋白酶的专一性底物,角蛋白可被角蛋白酶降解.本就角蛋白酶的生产菌、降解角蛋白的生化机制、角蛋白酶的生化及分子生物学特性等方面的最新研究进展作一综述.     

耐消化道逆环境双歧杆菌菌株A04体外促进生长因子的研究

研究了4种低聚糖、8种中药及4种食品原料体外对双歧杆菌菌株A04的增殖作用。结果表明,大豆低聚糖的增殖效果最明显（P〈0．01）,其次是低聚异麦芽糖和低聚果糖,水苏糖则几乎没有增殖效果,而且当改良MRS中低聚糖的浓度达到10％时,对其反而具有一定的抑制作用;8种中药在浓度为2％的时均有增殖效果,以Z3、Z1和Z2效果最显著（P〈0．01）,但其浓度不同对双歧杆菌菌株A04的增殖影响截然不同;本试验采用的4种食品原料对双歧杆菌均有促生长作用,较好的增殖作用的组合分别为：M-5％,CJ-2％,TE-2％和LE-5％。