蛋白酪氨酸激酶NOK／STYK1胞内区的表达与纯化

目的：酪氨酸蛋白激酶NOK／STYKl具有很强的促肿瘤形成和转移能力，被认为是很有前途的肿瘤治疗靶点。由于NOK含有一个跨膜区，且富含疏水性氨基酸，其表达和纯化非常困难，直接影响了对其功能及相关分子机理的深入研究。本研究目的是获得可溶的且纯度较高的NOK胞内区融合蛋白ANOK（AA：49—422），为后续抗体的制备和功能研究奠定重要基础。方法：含有△NOK基因的原核表达载体，转入E-coliBL21中，IPTG诱导蛋白表达，通过亲和层析获得可溶的△NOK融合蛋白。融合蛋白经凝血酶酶切后，凝胶过滤层析分离标签蛋白获得z~NOK蛋白。同时，我们还通过Bac-to-Bac系统获得含有ANOK基因的杆状病毒，感染sO细胞，尝试在真核细胞中表达目的蛋白。结果：通过在sf9昆虫细胞和大肠杆菌表达系统中盐浓度等各种条件的摸索，首次获得了可溶的且纯度较高的NOK胞内区融合蛋白（ANOK—GST）和一定量去除标签的ANOK蛋白。本研究中与大肠杆菌相比，昆虫细胞并不适合△NOK的纯化。结论：我们建立了一套优化的NOK蛋白表达和纯化体系，从而为后续抗体制备和各种体内外生化实验等功能研究奠定基础，为研究NOK在肿瘤中的作用和药物筛选创造条件。同时丰富了整个RTKs家族作用机制的探索，进一步促进了以RTKs为靶点的治疗手段在临床上的应用。