全文获取类型
收费全文 | 234篇 |
免费 | 18篇 |
国内免费 | 91篇 |
出版年
2024年 | 1篇 |
2023年 | 7篇 |
2022年 | 9篇 |
2021年 | 8篇 |
2020年 | 16篇 |
2019年 | 16篇 |
2018年 | 8篇 |
2017年 | 9篇 |
2016年 | 15篇 |
2015年 | 13篇 |
2014年 | 11篇 |
2013年 | 9篇 |
2012年 | 8篇 |
2011年 | 11篇 |
2010年 | 21篇 |
2009年 | 6篇 |
2008年 | 21篇 |
2007年 | 10篇 |
2006年 | 10篇 |
2005年 | 6篇 |
2004年 | 9篇 |
2003年 | 8篇 |
2002年 | 10篇 |
2001年 | 7篇 |
2000年 | 6篇 |
1999年 | 8篇 |
1998年 | 9篇 |
1997年 | 8篇 |
1996年 | 3篇 |
1995年 | 6篇 |
1994年 | 4篇 |
1993年 | 4篇 |
1992年 | 6篇 |
1991年 | 3篇 |
1990年 | 1篇 |
1989年 | 5篇 |
1987年 | 3篇 |
1985年 | 6篇 |
1984年 | 3篇 |
1983年 | 2篇 |
1982年 | 3篇 |
1981年 | 3篇 |
1980年 | 2篇 |
1979年 | 1篇 |
1966年 | 1篇 |
1965年 | 2篇 |
1963年 | 1篇 |
1962年 | 2篇 |
1960年 | 1篇 |
1950年 | 1篇 |
排序方式: 共有343条查询结果,搜索用时 15 毫秒
131.
HIV-1跨膜蛋白gp41的截短及表达 总被引:2,自引:0,他引:2
将HIV-1跨膜蛋白gp41进行截短,在大肠杆菌中进行表达并纯化。PCR扩增gp41的部分编码基因,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用EcoRI和Sal I切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T3上,导入宿主细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达,表达产物用亲和层析进行纯化并作相应鉴定。截短的HIV-1跨膜蛋白gp41能直接在大肠杆菌内进行表达,利用亲和层析能方便地将目的蛋白进行纯化,为跨膜蛋白的进一步应用打下基础。 相似文献
132.
DNA单分子近场光学成像与荧光探测 总被引:3,自引:0,他引:3
介绍了扫描近场光学(SNOM-Scanning Near-Field Optical Microscope)/原子力显微镜(AFM-Atomic Force Microscope)系统(SNO/AM)的工作原理。在AFM模式和SNOM模式下对DNA分子进行成像和荧光探测,得到了清晰的DNA单分子的形貌像和荧光像。由形貌圆像得到的DNA分子尺寸横向为20nm,高度为2nm,其中包含了探针形貌的影响。实验中采Tapping模式的AFM成像,样品经多次搜索扫描无明显损坏。AFM模式的分辨率优于1nm。SNOM模式下DNA分子形貌像和荧光像清晰,由近场荧光分布可以确定分子取向和浓度。用YOYO-1染料对λDNA分子进行染色和荧光探测。通过对DNA分子多个截面进行测量,分析染料 与DNA结合状态。 相似文献
133.
134.
1985—1986,观察籼、梗及籼、粳Fl杂种终变期核仁染色体数,籼为2个二价核仁染色体,粳为1个二价核仁染色体,籼、粳Fl杂种核仁染色体数与父本水稻的核仁染色体数相同。由此,讨论了“随体丢失”在水稻育种,粳稻起源及遗传学方而的意义。 相似文献
135.
136.
甲醇酵母Pichia pastoris高水平表达有活性的辣根过氧化物酶 总被引:2,自引:0,他引:2
表达有活性的辣根过氧化物酶(HRP)不仅可以深入揭示HRP结构与功能及其生理作用规律,而且为HRP的广泛需要提供新的来源.为了在甲醇酵母P.pastoris中成功表达,将编码HRP-C成熟肽的cDNA构建到pPIC9上,再转化到P.pastoris中,筛选到了分泌表达非糖基化HRP和高糖基化HRP(分子质量超过100 ku)两种主要产物的重组细胞株.优化表达条件,目标产物在摇瓶发酵液中高效表达,可达4~6 g/L.并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化HRP,每毫升发酵液中酶活力约有2 U,经初步的纯化HRP具有最大吸收峰403 nm. 相似文献
137.
甲醇酵母Pichia pastoris高水平表达有活性的辣根过氧化物酶 总被引:1,自引:0,他引:1
表达有活性的辣根过氧化物酶(HRP) 不仅可以深入揭示HRP 结构与功能及其生理作用规律, 而且为HRP的广泛需要提供新的来源. 为了在甲醇酵母P. pastoris 中成功表达, 将编码HRPC成熟肽的cDNA 构建到pPIC9 上, 再转化到P. pastoris 中, 筛选到了分泌表达非糖基化HRP 和高糖基化HRP( 分子质量超过100 ku) 两种主要产物的重组细胞株. 优化表达条件, 目标产物在摇瓶发酵液中高效表达, 可达4~6 g/L. 并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化HRP, 每毫升发酵液中酶活力约有2 U, 经初步的纯化HRP具有最大吸收峰403 nm . 相似文献
138.
辣根过氧化物酶同功酶C基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
无论从应用还是从理论研究角度,辣根过氧化物酶(HRP)是一种非常重要的酶.HRP基因克隆与表达将有利于更深入研究HRP的结构与功能.利用反转录PCR从天然植物辣根中分离和克隆编码辣根过氧化物酶同功酶C(HRP-C)一个cDNA,并测定其序列.结果发现,从基因推导出的氨基酸序列与Welinder报道的辣根过氧化物酶序列有90.6%的同源性.将该基因连接到表达载体pET-24b上,利用抗HRP多克隆抗体进行Westernblot,检测有少量目标产物表达.在诱导表达过程中,没有发现细菌生长受抑制或受明显的毒害 相似文献
139.
140.
前列腺素合成酶的固定化研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文介绍了绵羊精囊前列腺素合成酶的固定化。比较了戊二醛交联泡沫法、戊二醛交联沉淀法与聚丙烯酰胺凝胶包埋法的实验结果。探讨了戊二醛交联泡沫法的固定化最适条件及应用此法制备的固定化前列腺素合成酶的初步使用效果。 相似文献