禽白血病A亚群病毒gp85的单因子血清制备及其特异性鉴定

【目的】为了研究出一种能够针对A亚群禽白血病的快速特异性诊断试剂。【方法】将A亚群禽白血病病毒(ALV-A)SDAU09E1株接种于DF1细胞上,以感染细胞DNA为模板,通过PCR方法扩增出1023bp的ALV-A-gp85基因。将其正确阅读框架插入表达载体PET-32a(+)中,实现在BL21(Rosetta)宿主菌中表达。将纯化的融合蛋白常规免疫小鼠,制备得抗血清。【结果】实验成功获得52.8kDa的重组融合蛋白,且具有良好的免疫原性。间接免疫荧光试验(IFA)表明该血清可与ALV-A和ALV-B反应,但不与ALV-J反应。【结论】该实验首次在国内外研制出能用于鉴别性检测经典的A/B亚群ALV的单因子血清,可与ALV-J特异性单抗互补作用于外源性ALV感染的鉴别性诊断。我国鸡群同时受经典的ALV-A/B和新出现的ALV-J困扰,鉴别诊断非常必要,研究这种试剂具有较高的实用价值。     

蛋鸡J亚群白血病病毒的分离鉴定及序列分析

通过接种鸡胚成纤维细胞((CEF)及特异性单抗的间接荧光抗体反应(IFA),从中国商品代蛋鸡群中首次分离到J亚群白血病病毒(ALV-J).对其env基因编码的氨基酸序列及3'-末端(3'-Ter)序列与国内外来源于白羽肉鸡的毒株作了比较分析.结果显示,这两株病毒的gp85基因编码的氨基酸序列与国外5个毒株同源性仅为83.4%～87.3%,与国内来源于白羽肉鸡的8株病毒同源性也仅为86.4%～89.6%.gp37基因编码的氨基酸序列与5个国外毒株同源性为91.8%～97.0%,与8个国内毒株同源性为93.9%～95.9%.另外,国内来源于白羽肉鸡的各毒株的3'-Ter序列在"E"区均有明显缺失,但本次分离的来源于蛋鸡群的毒株在"E"区没有缺失突变.与所列出的13株国内外毒株相比,这两个毒株在3'-Ter的缺失最少,较接近于原型株HPRS-103.显然这两株病毒的来源不同于国内白羽肉鸡.     

鸭群中REV感染的流行病学调查

[目的]了解网状内皮组织增生病病毒(REV)在鸭群中的感染状态.[方法]从山东省不同地区送检的病(死)鸭中,随机采集法氏囊、脾脏和肝脏等220份样品.细胞培养分离病毒,以提取的组织DNA为模板进行特异性斑点杂交、PCR和nest-PCR检测.从不同地区阳性样品中任选一个进行克隆测序、同源性比较和进化树分析.[结果]从35/39份法氏囊、54/84份脾脏和32/97份肝脏DNA样品中检出REV(121/220).其中法氏囊的检出率最高,显著高于肝脏、脾脏(P<0.01),但用细胞培养分离病毒、常规PCR、组织DNA直接点杂交检测时,均未检出REV.YN-1和BZ-1株env基因片段与美国分离的鸭源SNV株同源性高达99.8%,LQ-1株env基因片段与美国鸡源分离株的同源性为100%,均高于近几年中国鸡源分离株.[结论]在检测REV感染时,应加强对法氏囊的检测,但由于REV在感染鸭的组织中含量很低,应采用更为敏感的nest-PCR.同源性和进化树分析表明,我国鸭源REV很可能是在引进未经对REV检疫的种鸭时引入的.     

马立克氏病毒meq基因缺失株SC9-1通过自然重组获得meq能力的分析

为了探究meq基因缺失的马立克氏病毒疫苗株SC9-1与超强毒株Md5是否能够通过自然重组获得meq基因的能力,将SC9-1疫苗毒和Md5超强毒共同感染鸡胚成纤维细胞(CEF),并在CEF上连续传三代,提取单个蚀斑的病毒DNA。同时将Md5超强毒接种免疫过SC9-1疫苗株的SPF鸡,在不同的时间点分离病毒,提取单个蚀斑的病毒DNA。将两种方式获得的病毒DNA进行PCR验证,并将香啤酒重组酶位点(FRT)残留序列克隆测序,比较其同源性。两种方式鉴定的病毒均为SC9-1或是Md5,没有检测到重组病毒,而且FRT残留序列同源性为100%。结果 SC9-1没有从野生毒株Md5获得缺失的meq基因,而且meq基因敲除区具有很好的遗传稳定性。     

网状内皮增生病病毒感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用

我国鸡群中网状内皮增生病病毒(REV)感染已相当普遍,但对其造成的实际危害却不太清楚.本研究结果表明,1日龄SPF鸡感染REV会显著抑制对新城疫病毒(NDV)和禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗的免疫反应.1周龄用相应灭活疫苗免疫后3周、4周和5周,REV感染组对不同病毒疫苗免疫后的HI效价显著低于对照组.高剂量REV感染组的抑制作用大于低剂量感染组,但统计学差异不显著.REV感染可造成中枢免疫器官萎缩,REV感染组的胸腺、法氏囊与体重比显著低于对照组.本研究证明了,REV早期感染会干扰鸡群对NDV、AIV的免疫效果,特别是会严重干扰对AIV疫苗的免疫效果.     

传染性法氏囊病超强毒山东分离株SD0210的致弱研究

本研究将鸡传染性法氏囊病超强毒(vvIBDV)SD0210株经SPF鸡胚培育及鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养,获得了对CEF适应的细胞毒,并对细胞毒进行了致病性、回归动物的稳定性试验及免疫原性方面的试验,结果表明已成功获得了具有高免疫原性且安全无毒力返强的致弱株,并初步揭示了vvIBDV在适应细胞、从超强毒力向弱毒力转化过程中,VP2高变区氨基酸序列的变化情况.SD0210株培养至18代开始适应细胞,出现细胞病变.21代细胞毒已对SPF鸡失去了致病性,在鸡体内连续传代15代毒力不返强,而且具有较高的免疫原性.