外源PDI基因导入CHO细胞及其对HBsAg分泌的影响

在前期的研究工作中发现,当培养基中添加1.5%DMSO(二甲基亚砜)会使CHO细胞的HBsAg(乙肝表面抗原)产量提高80%以上。与此同时,DMSO引起了HBsAg在细胞胞内的大量积累,其含量提高了8倍。同时,DMSO引起了CHO细胞中PDI(二硫键异构酶)含量降低。由此怀疑是由于PDI不足造成了HBsAg的胞内积累。根据NCBI上查阅到的中华仓鼠小肠中PDI基因序列,通过RT-PCR的方法,从CHO细胞中获得了PDI序列,并构建重组质粒pGFP-PDI。通过阳离子脂质体转染技术,导入外源PDI,使各单克隆CHO细胞的PDI酶活提高30%～90%。但分析这些克隆在1.5%DMSO下HBsAg的胞内积累情况,发现没有改善,从而排除了PDI不足而引起外源蛋白积累的可能。     

冬小麦高产高效群体的年际间稳产性能

以冬小麦品种‘泰农18’为试验材料,设置传统农民管理习惯的农户模式(T₁)、不计肥水和人工等投入以获得高产的高产模式(T₂)和优化种植密度、播期、肥水管理运筹的高产高效模式(T₃)3种种植模式,于2012年10月—2016年7月连续4个小麦生育季,研究了不同种植模式小麦主茎与分蘖成穗特性、不同年份的光合有效辐射截获、利用、光合产物分配等光能利用特性和产量差异,结合年际间的光、温、水等生态因子分布差异,分析了高产高效群体的稳产性能.结果表明: 冬小麦不同生育时期内的光、温、降雨等生态因子的总量和各生育时期分布存在较大变异.T₁、T₂、T₃模式主茎穗的比例分别为38.9%、58.7%、66.9%,表明T₁、T₂、T₃模式在群体结构构建上分别是以分蘖穗为主、主茎穗和分蘖穗并重、主茎穗为主.T₂模式的生物量和产量最高,T₁最低,T₃模式自孕穗期之后,尤其是在开花14 d后仍能维持较高的叶面积指数、光能截获率和截获量、群体光合速率,并具有较高的干物质分配能力,使其在干物质积累相对偏低的情况下仍可获得高产.T₃模式花后的叶面积指数、光能截获率和截获量以及光合速率等的年际间极差、标准差、变异系数均小于T₁和T₂模式,由此也保证了T₃模式生物产量的稳定.相关分析表明,以主茎成穗为主的T₃种植模式能够有效应对年际间气候变化并实现稳产,关键是具有年际间稳定的生物产量.     

稻鸭共作生态系统稻田土壤固定态铵含量及有效性

通过田间试验研究了稻鸭共作生态系统土壤固定态铵的动态及有效性和温度、土壤pH、土壤交换性铵及土壤质地对土壤固定态铵的影响.研究结果表明:(1)在水稻生育期间,土壤固定态铵含量处于不断变化之中,施肥促进土壤对铵的固定,水稻的吸收促进土壤固定态铵的释放;其中在固定态铵释放过程之中,新固定的肥料铵几乎完全释放,而原有固定态铵没有释放.(2)较之常规稻作,稻鸭共作显著地提高了土壤固定态铵含量,其平均含量高出常规稻作的7%.(3)土壤交换性NH 4含量和pH与土壤固定态铵含量呈显著正相关(p<0.01);土壤温度(5cm土层)与土壤固定态铵含量间不相关;土壤固定态铵含量与>0.2mm的砂粒含量和<0.002mm的粘粒含量呈显著或极显著相关,而与0.02～0.2mm和0.002～0.02mm粘粒含量不相关.     

快速冷耐受比冷驯化更能提高越冬松针瘿蚊 (Thecodiplosis japonensis)幼虫的耐寒力(英文)

松针瘿蚊以三龄老熟幼虫在浅层土表越冬。本文比较两种温度处理过程 ,快速冷耐受 (rapidcoldhardening)和冷驯化 (coldacclimation)对松针瘿蚊获得耐寒性的能力。发现 3龄越冬幼虫具有一种特殊的生物学现象 -快速冷耐受。当越冬幼虫直接从 2 7℃转入 - 1 5℃ 3小时 ,其存活率仅为 1 7 9% ,然而在 - 1 5℃暴露之前 ,经 4℃ ,2h短暂处理 ,其存活率升高至 40 0 % ,而短时间 (1 5分钟 ) 2 7℃能抑制快速冷耐受的表达。快速冷耐受比冷驯化更能提高越冬松针瘿蚊幼虫的耐寒力。文中还讨论了快速冷耐受和冷驯化提高松针瘿蚊耐寒能力的不同机制     

一种新的B链C端去四肽胰岛素的研制方法

报道了将单体胰岛素前体(MIP)经胰蛋白酶和羧肽酶B两步连续酶切获得B链C端去四肽胰岛素(DTI)的方法。MIP由甲醇酵母表达,最高发酵表达量达到150mg/L。发酵液中MIP通过疏水层析,分子筛初步纯化后直接进行酶切,在胰蛋白酶酶切3h后加入抑制剂paminobenzamidine处理15min,然后直接加入羧肽酶B酶切6h,再通过反相柱纯化即可得到纯品DTI,从分子筛到最后DTI,总纯化得率达到77%。按中国药典小白鼠惊厥法测定得DTI的生物活力为22IU/mg,是胰岛素的80%,在Superdex G-75分子筛上测定DTI的解离聚合曲线,证明其是单体。     

锌转运蛋白8在酿酒酵母中的重组表达及其抗原性分析北大核心CSCD

锌转运蛋白8(zinc transporter 8,ZnT8)是Ⅰ型糖尿病的重要候选抗原,基于ZnT8所开发的自身抗体检测试剂盒可用于帮助诊断Ⅰ型糖尿病,相关产品已在欧美国家上市。目前,国内正在积极开发Ⅰ型糖尿病检测试剂盒,由于国内尚未建立活性ZnT8的重组生产体系,因此这一关键原料严重依赖进口。本研究主要利用酿酒酵母系统开展了ZnT8的重组表达研究。首先,设计了ZnT8的多种抗原形式,分别为C端单倍体蛋白(C)、C端二倍体(C-C)以及N端和C端串联体蛋白(N-C),并使用酿酒酵母系统对上述蛋白进行了重组表达与纯化。随后,通过桥连法ELISA对纯化蛋白进行了抗原性测试,检测13位Ⅰ型糖尿病病人血清及16位健康志愿者血清后发现:C、N-C、C-C蛋白具有相似的检出率,分别为53.8%(7/13)、61.5%(8/13)及53.8%(7/13);3组的特异性均为100%(16/16);N-C蛋白相对其他2个蛋白而言,其在P3、P4、P8阳性样本上的检测值提高90%以上,表明具有更好的血清抗体识别能力。最后,选取N-C蛋白做进一步的血清样本测试,并将测试结果用ROC曲线进行敏感性及特异性表征,结果表明,与进口金标抗原相比,本方法敏感性无明显差异,特异性有待提高。综上可见,本研究基于酿酒酵母表达生产的ZnT8 N-C串联体蛋白有潜力作为Ⅰ型糖尿病体外诊断试剂开发中的国产替代原料。     

某军校新生人格特征分析及建议

目的:调查某军校大一新生的人格特征及心理健康状况,为开展军校学员心理健康教育提供科学依据。方法:采用卡特尔16种个性因素测验(16PF)对1224名大一学员进行测试。结果:除乐群性和世故性外,在剩余14个因素上,新学员的结果与全国成年人常模均存在显著差异;其中,来自城市的学员与农村学员在乐群性、兴奋性、敢为性、敏感性、怀疑性、幻想性和世故性因子有显著差异;独生子女与非独生子女在兴奋性、怀疑性、实验性和独立性上,表现出显著差异。结论:该校大一学员整体心理健康状况良好,但在恃强性、兴奋性、敢为性、幻想性因子得分偏高,应进行系统教育和调控;同时,也要注重城市学员与农村学员、独生子女与非独生子女之间的心理差距,因材施教,共同提高。     

6种绿化树种的气孔特性与臭氧剂量的响应关系

采用开顶式气室装置研究5种臭氧(O_3)浓度对6种绿化树种,即杨树基因型‘546’(Populus deltoides cv.‘55/56’×P.deltoides cv.‘Imperial’)和‘107’(P.euramericana cv.‘74/76’)、白蜡(Fraxinus chinensis)、法桐(Platanus orientalis)、洋槐(Robinia pseudoacacia)、国槐(Sophora japonica)的气孔密度、开度和大小的影响。结果表明,随着O_3浓度的升高,气孔密度、开度和大小均显著降低,不同树种的各项气孔特征指标之间均存在显著性差异,O_3处理、树种、采样时期以及O_3和树种之间、采样时期和树种之间存在显著交互作用。6种树种的各项气孔指标与O_3剂量(AOT40,小时O_3浓度大于40nmol/mol的累计值)间具有显著的线性负相关关系(P0.05),即随着O_3浓度的升高而显著降低。为深入研究环境变化背景下城市植物的叶组织结构和功能在适应地表O_3污染方面提供理论证据。     

云南省夏大豆种质资源表型鉴定和综合评价模型构建

为全面准确评价夏大豆种质资源,构建大豆种质资源综合评价体系,满足育种家快速、定向选择育种亲本的需求。本研究采用路径分析、探索性因子分析、隶属函数、聚类分析、回归分析等多元分析方法相结合,对451份云南省夏大豆种质资源的11个重要表型性状进行研究。结果表明:451份大豆种质资源表型性状变异丰富,类型多样。性状间存在错综复杂的相关性,且性状间的相互影响清晰地分为两条路径,一条最终影响大豆品质,另一条最终影响单株粒重。通过探索性因子分析,将11个表型性状转化为产量构成因子、品质因子、株高因子、粒重因子、单荚粒数因子等5个公共因子。通过隶属函数计算综合评价值(D值),并对D值进行聚类分析,将451个种质划分成3个类群,每个类群具有不同的优势性状。运用逐步回归的方法建立大豆种质综合评价数学模型:D=0.0102X_3+0.0055X_4-0.0021X_5+0.0014X_7+0.007X_9+0.179X_(11)(R~2=0.9908,F=8006,P0.0001)。该模型可用于大豆种质资源综合评价,为定向选择有重要价值的亲本提供依据。     

气升式生物反应器在杂交瘤细胞培养中的应用

前述研究工作基础上,设计开发了10L规模的动物细胞培养用气升式生物反应器。应用该生物反应器悬浮培养杂交瘤细胞．通过平行试验,考察了该反应器设计的合理性和可靠性。结果显示该反应器不存在限制细胞生长、代谢和产物生成的因素,而且细胞破损技彻底消除,表明该气升式生物反应器给细胞生长、代谢和产物生成提供了理想的培养环境,其设计是成功的。