一个未知的子宫雌激素反应蛋白ULF-250的鉴定研究

摘要 鉴定一个未知的子宫雌激素反应蛋白（ULF-250）。去卵巢大鼠补充给予雌二醇造成子宫产生大量宫腔液（ULF）,受雌激素调节的蛋白分泌其中。收集ULF分别进行SDS-PAGE和双向电泳（2-DE）分离;通过Western 和2D-Western确认抗ULF-250抗体识别的蛋白成分并与凝胶上的条带或斑点相对应;对目标蛋白分别用MALDI-TOF-MS和HPLC-ESI-MS/MS两种方法进行质谱分析并获得肽段序列数据;与蛋白数据库比对及文献检索鉴定未知蛋白。2D-Western显示抗ULF-250抗体特异识别的蛋白成分。从2D胶上切下对应的蛋白斑点进行MALDI-TOF-MS。 结果提示：ULF-250是ebnerin/DMBT1。另外,经SDS-PAGE分离的250 kD蛋白条带进行液-质联用分析。结果同样提示：ULF-250是ebnerin/DMBT1。与文献报道比较,ULF-250与ebnerin/DMBT1在子宫的组织定位和调节是相同的。因此,我们认为ULF-250是子宫表达的ebnerin/DMBT1。通过2-DE结合质谱分析以及查阅文献确认未知的雌激素反应蛋白ULF-250是ebnerin/DMBT1。此外,我们的研究提示,该蛋白不仅在子宫上皮细胞表达而且分泌到子宫腔液中,其功能值得进一步研究。     

基于双正交小波变换的宫缩信号消噪

小波分析的信号消噪方法是现代信号处理中的重要组成部分,小波基的不同选取将直接影响消噪的效果.本文在全局阈值的标准下,基于不同噪声水平,讨论了小波基的正交性和线性相位性对消噪结果的影响,提出了选取小波基的一般方法,最后利用双正交小波基在软阈值标准下实现了对宫缩信号的消噪处理,并取得了较好的效果.     

岩生肥皂草的组织培养与快速繁殖

1植物名称 岩生肥皂草（Saponaria ocymoides L．）。2材料类别茎尖和节间茎段。3培养条件 以MS为基本培养基,另加3％蔗糖和0．7％琼脂粉,pH5．85。分化、增殖培养基为：（1）MS＋6-BA0．5mg．L-1（单位下同）＋NAA0．1;（2）MS＋6-BA1．0＋NAA0．1;（3）MS＋6-BA0．5＋NAA0-2：（4）MS＋6-BA1．0＋NAA0．2。生根培养基为：（5）MS＋IBA0．2;（6）MS＋IBA0．4。培养温度（25＋2）℃;     

苏南丘陵不同林龄杉木林土壤活性有机碳变化特征

对江苏苏南地区不同林龄阶段杉木人工林土壤总有机碳、水溶性有机碳、易氧化碳及其与土壤基本理化性质的关系进行了研究,结果表明:随着林龄增加,土壤总有机碳含量呈现先降低后增加的变化,过熟林阶段最高、中龄林阶段最低,水溶性有机碳与易氧化碳含量总体表现出与总有机碳较为一致的变化特征,二者占总有机碳的比例没有稳定变化.2种活性有机碳之间、活性有机碳与总有机碳、全氮、碳氮比呈显著相关,与全硫、土壤水分、pH、容重相关关系不显著,但在不同林龄阶段的表现有所不同.杉木林土壤有机碳在不同林龄阶段可能对森林碳循环起着不同的作用.     

Cx43基因敲除鼠胚心脏近端流出道组织中Galpha13信号通路基因的差异表达

目的研究Cx43基因剔除(Cx43KO)小鼠胚胎心脏近端流出道组织中基因表达谱的改变,筛选可能导致Cx43KO小鼠流出道梗阻的相关基因。方法以胎龄(embryonic day,ED)14.5天的Cx43KO和野生型(Cx43WT)鼠胚心脏近端流出道部分为研究对象,分别提取总RNA,逆转录成cDNA;并在体外转录为cRNA,同时进行生物素标记及片段化;再与Affymetrix-4302.0基因芯片进行杂交。杂交信号经扫描后,应用相关生物信息软件分析基因表达情况。结果与Cx43WT组相比,Cx43KO组中表达上调2倍以上的基因共有287个,表达下调2倍以上的基因有199个。其中表达差异的基因参与转录调控、细胞周期等主要生理过程。进一步筛查表达差异1.5倍以上的基因发现,Galpha13信号通路上的多个基因在Cx43KO组有明显变化。结论利用基因芯片技术初步筛选出与Cx43KO鼠胚心脏近端流出道发育有关的多个基因,其中Galpha13信号通路上的相关基因可能与Cx43KO小鼠流出道梗阻的发生有关。     

RNAi抑制肝星状细胞TIMP-1基因表达及对细胞生物学行为的影响

研究了siRNA对大鼠肝星状细胞（CFsC）TIMP-1基因表达及对细胞生物学行为的影响．用RT—PCR方法获得带有T7启动子的TIMP-1全基因序列,体外转录法获得TIMP-1dsRNA,Dicer酶切后得到siRNA,用质脂体将siRNA转染至CFSC．RT—PCR检测TIMP-1mRNA的表达,MTT方法检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞凋亡．结果成功获得TIMP-IsiRNA,将TIMP-1siRNA转染至CFSC12、24、48h后,与对照相比,TIMP-1mRNA的表达逐渐下降．经OuanityOne（BIO—RAD,USA）分析后,其抑制率分别为49.18％、58．72％和64．73％;siRNA转染CFSC细胞后,CFSC生长受到抑制,细胞凋亡不明显．实验结果表明体外转录法得到的siRNA能有效地降低大鼠CFSC中TIMP-1的表达．明显抑制CFSC的增殖,但不直接引起CFSC的凋亡。     

从甘油富集菌宏基因组中克隆甘油脱水酶基因*

采用一种简便快速的方法从经甘油富集培养的土样中提取出质量较好宏基因组DNA。然后以此DNA为模板,以扩增肺炎克雷伯氏菌、弗氏柠檬酸菌和丁酸梭菌甘油脱水酶基因的引物进行PCR,分别扩增出目的条带,并将其克隆至T载体中。进行测序分析显示,PCR扩增出来的片段与其引物相应的甘油脱水酶序列同源性分别达到99%,90%和99%。这表明克隆出来的这3个基因为相应的甘油脱水酶基因。     

小鼠心脏神经嵴细胞的体外培养及其生物学特性

目的体外培养和鉴定心脏神经嵴细胞,探讨其生物学特性。方法取8·5d小鼠胚胎枕中部至第3体节神经管,组织块法无血清条件培养获心脏神经嵴细胞,采用转录激活因子2α(AP-2α)作为其生物学标记物,观察其迁移、分化等生物学特性。结果从胎鼠神经管中分离培养的细胞AP-2α表达阳性,具有迁移特性,传代后以含血清培养基培养后能自然分化成神经元和神经胶质细胞。结论体外培养可成功获得心脏神经嵴细胞,且具有迁移特性和多向潜能分化能力。     

高活性乳酸菌发酵剂培养条件优化及活性测定

采用自行分离选育的乳酸菌进行混合培养,对浓缩培养条件进行正交试验,以德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌的菌数及其比值作为考察指标。结果为以改良MRS为基础培养基,以6%番茄汁、0.3%玉米浆作为生长因素,42℃培养,过程采用流加氨水作中和试剂,使培养基酸度控制在pH 6.0,浓缩培养液中菌数可达9.15×109个/mL,球菌与杆菌比例为1.2∶1;最佳菌体收集时间为7.5 h;-30℃下冷冻干燥得到的乳酸菌发酵剂含活菌数达到8.2×1010个/g,球菌与杆菌比例为1.5∶1,发酵剂活性达0.435;0~4℃冷藏6个月,乳酸菌活性没有损失。产品可直接加入到灭菌奶中发酵,具有大众化特点,广泛用于各类乳品厂、饭店、食堂及家庭。