丛毛单胞菌CNB-1合成PHA及相关基因的研究

分析了丛毛单胞菌(Comamonas sp.)CNB-1菌株在不同条件下合成聚羟基烷酸(polyhydroxyalkanoic acids,PHAs)的组分和含量,同时克隆了与PHA合成相关的基因。结果表明,该菌可以多种短链有机酸及醇类为碳源合成PHA多聚物或共聚物,以戊酸和1,4-丁二醇为底物时,可达菌体干重的57%;同时发现小分子醇类的存在能显著促进PHA的合成,推测与醇类氧化过程中提供了更多的还原力有关。为了克隆相关基因,利用已知phaC的保守区简并引物筛选基因组文库,将得到的阳性克隆质粒测序,发现phaC、phaA、phaB组成一个基因簇phaC-A-B。将phaC、phaA、phaB连接到pET载体在E.coli中共表达,重组E.coli菌株能合成PHA;将这3个基因单独连接到pET载体,在E.coli中表达后检测到相应酶活,分别约为原始菌株的4.1、71和2882倍。     

血管瘤组织中p63和Fos蛋白的定量表达

目的　探讨 p6 3基因和c fos基因的蛋白与血管瘤发生发展的关系。方法　采用免疫组织化学S P法对 4 0例血管瘤和 2 0例正常皮肤组织检测 p6 3基因和c fos基因的蛋白表达 ;对所获得的检测结果进行图像分析处理。结果　在正常皮肤组、增生期与消退期血管瘤中 ,p6 3和Fos蛋白的平均光密度分别为 :0 92 3± 0 191,0 0 79± 0 0 2 4 ;8 2 71±1 95 3,0 12 4± 0 0 15 ;0 92 0± 0 187,0 0 88± 0 0 17。增生期组与消退期组、正常皮肤组分别相比 ,p6 3和Fos阳性表达的差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ,消退期组与正常皮肤组之间 ,p6 3阳性表达的差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　p6 3基因在血管瘤中并未作为肿瘤抑制基因起作用 ,相反是作为癌基因而促进内皮细胞的增殖 ,可能与血管形成关系密切。c fos在血管瘤的增生中起着重要作用 ,可能与c fos可通过识别bFGF启动子区的特异位点TRE而启动bFGF基因的转录有关。     

L-精氨酸对任意型皮瓣成活的影响

目的　探讨L 精氨酸对任意型皮瓣的成活的影响。方法　以Wistar大鼠为实验对象 ,在其背部设计 7cm×2cm任意型皮瓣 ,于术后给予腹腔注射L 精氨酸 30 0mg/kg ,对照组给予 0 9%生理盐水。术后 7d ,通过图像分析技术观察皮瓣成活率 ;通过生物化学技术、组织学和免疫组织化学技术对不同时间皮瓣组织中一氧化氮含量、组织形态学变化、白细胞计数以及ICAM 1的表达进行观测。结果　外源性L 精氨酸可提高皮瓣组织一氧化氮含量 ,L 精氨酸组ICAM 1表达呈弱阳性、术后 12h皮瓣组织真皮中性粒细胞计数减少 ,L 精氨酸组皮瓣成活率明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论　外源性L 精氨酸可提高皮瓣组织NO含量 ,ICAM 1表达下调 ,中性粒细胞浸润减少 ,提高任意皮瓣成活率。     

转座子挽救法对苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关基因的定位

用含Tn5转座子的质粒pRL1063a诱变苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM,得到盐敏感突变株042BML-2。采用转座子挽救法对Tn5插入位点两边的序列进行克隆与测序,获得了1179bp的转座子插入位点侧翼DNA序列。在GenBank中进行序列同源性和基因定位分析,结果表明：转座子插入在一个功能未知的基因内部,此基因长6270bp。研究证明：该基因与042BM的耐盐性有关,并定名为rtsC。氨基酸疏水性分析表明,在RtsC蛋白的N端有两个跨膜区,该蛋白与细菌趋化性相关蛋白的功能域有同源性。并对RtsC蛋白在苜蓿中华根瘤菌042BM耐盐性中的作用进行了讨论。     

书讯

《神农架自然保护区科学考察集》朱兆泉等 ,31 2页 ,1 999年 ,林业出版社 ,估价 60元。本书系统介绍了神农架自然保护区自然环境 ,动、植物资源 ,景观资源及其经营管理及自然保护区评价 ;中英文描写神农架自然保护区概况。《生物学中的化学》Ｊ.Ｆｉｓｈｅｒ等编著。 2 4 6页 ,     

费氏中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的亚克隆和测序

将费氏中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｆｒｅｄｉｉ）ＫＴ１９与耐盐有关的２３ｋｂ ＤＮＡ片段用ＢａｍＨⅠ酶切成大小不同的长度,分别与质粒ｐＭＬ１２２连接,然后转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｓ１７－１,筛选出３个转化子。以这些转化子为供体,ＲＴ１９的盐敏感突变株ＲＣ３－３为受体,分别进行二亲本杂交,筛选到接合子ＢＲ２,得到４．４ｋｂ与耐盐有关的ＤＮＡ片段。根据其物理图谱,酶     

苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的克隆

以耐盐的苜蓿中华根瘤菌(\%Sinorhizobium meliloti) \%042B为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶\%Eco\%RⅠ的部分酶解,利用电洗脱方法回收15～25kb大小的DNA片段。以碱法制备载体质粒pLAFRⅠ,用\%Eco\%RⅠ将其切成线状,然后用T\-4DNA连接酶将回收片段与线状载体连接,利用包装蛋白进行包装后,感染大肠杆菌(Escherichia coli)S17\|1,构建了042B的基因文库。以固体亚硝基胍作为诱变剂处理出发菌株,在05mol/LNaCl的条件下,从2000个菌落中筛选得到12株042B的盐敏感突变株,以其中稳定的盐敏突变株GZ17为受体菌,利用两亲本杂交将含有042B的DNA片段的pLAFRⅠ重组质粒转移到GZ17中,在含有四环素和05mol/LNaCl的基本培养基上筛选出能够耐盐的阳性克隆,获得了与耐盐有关的7kb长的DNA片段。对该片段进行亚克隆,最终获得了4kb与耐盐有关的片段。     

慢生根瘤菌16S—23S rDNA IGS的RFLP分析

本文对慢生根瘤菌属（Bracyrhizobium）3个已知种及从10种豆科植物中分离的32株慢生根瘤菌进行了16S—23SrDNAIGS的RFLP分析。IGS的PCR产物电泳只出现一条rDNA片段,但表现在长度上菌株间有一定差异,大小在930～1050bp之间,可大致划分为IGSa、IGSb和IGSc3种。用4种四碱基识别序列的限制性内切酶AluI、HaeIII、HinfI和MspI酶解IGSrDNA,综合得到26种IGS－RFLP类型．每一种酶可产生6—12种不同的酶切图谱．结果表明这一方法能很好区分、鉴别慢生根瘤菌,也支持该技术是一种快速、简单、准确及重复性好的微生物鉴定手段．