黄色短杆菌ATCC 14067产L-谷氨酰胺的发酵条件

L-谷氨酰胺是L-谷氨酸的r-羧基酰胺化,其分子式为H_2N·OC·CH_2·CH_2·CH(NH_2)·COOH,作为药物,它可以用来治疗神经衰弱,胃和十二指肠溃疡等疾病,疗效明显。我们用谷氨酸产生菌黄色短杆菌ATCC 14067,通过改变发酵条件,使谷氨酸发酵转向谷氨酰胺发酵。发酵65小时,在每毫升发酵液中积累了30mg的谷氨酰胺。     

生物样品制备的冷冻技术

在分子水平上探讨生物组成,用电子显微镜(EM)与生物化学和X线衍射等方法有着根本的差异。采用电子显微镜可以探讨活细胞及活组织是以怎样的形式存在并起作用的。如何便样品保存得近于活体状态,并能放     

談談教学工作的精雕細刻

教学工作是一个非常细致复杂的工作,要搞好这一工作的关键,首先在于教师思想上做到政治掛帅。目前学校教师,在學校党委的领导下,学习了党的八屆八中全会的文件,并根据文件精神初步批判了右傾思想和畏难松劲的情緒,教师政治觉悟提高了,因而进一步鼓起了革命干劲,个个意气奋发,工作热情高涨,先后在各校掀起一个以进一步貫彻党的教育工作方針,     

丛毛单胞菌CNB-1合成PHA及相关基因的研究

分析了丛毛单胞菌(Comamonas sp.)CNB-1菌株在不同条件下合成聚羟基烷酸(polyhydroxyalkanoic acids,PHAs)的组分和含量,同时克隆了与PHA合成相关的基因。结果表明,该菌可以多种短链有机酸及醇类为碳源合成PHA多聚物或共聚物,以戊酸和1,4-丁二醇为底物时,可达菌体干重的57%;同时发现小分子醇类的存在能显著促进PHA的合成,推测与醇类氧化过程中提供了更多的还原力有关。为了克隆相关基因,利用已知phaC的保守区简并引物筛选基因组文库,将得到的阳性克隆质粒测序,发现phaC、phaA、phaB组成一个基因簇phaC-A-B。将phaC、phaA、phaB连接到pET载体在E.coli中共表达,重组E.coli菌株能合成PHA;将这3个基因单独连接到pET载体,在E.coli中表达后检测到相应酶活,分别约为原始菌株的4.1、71和2882倍。     

慕课、微课在地方应用型高校“发酵工程”课程教学中的

慕课、微课是信息时代发展的产物,是将来高等教育的发展方向。探索将慕课、微课引入到地方应用型高校的“发酵工程”教学改革与探索,以期将其作为“发酵工程”课堂教学的补充与延伸,形成一种兼顾课堂教学和个性化教学的新模式,最大限度地促进学生的个性化学习。一年多的教学改革探索表明慕课、微课的课程教学改革得到了学生和同行教师的认可,确实有利于提升学生的各项学习成绩,尤其是实践成绩的提升达到了显著水平(P<0.05),符合培养应用型人才的教学目的,值得地方高校借鉴。     

费氏中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的亚克隆和测序

将费氏中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｆｒｅｄｉｉ）ＫＴ１９与耐盐有关的２３ｋｂ ＤＮＡ片段用ＢａｍＨⅠ酶切成大小不同的长度,分别与质粒ｐＭＬ１２２连接,然后转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｓ１７－１,筛选出３个转化子。以这些转化子为供体,ＲＴ１９的盐敏感突变株ＲＣ３－３为受体,分别进行二亲本杂交,筛选到接合子ＢＲ２,得到４．４ｋｂ与耐盐有关的ＤＮＡ片段。根据其物理图谱,酶     

苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的克隆

以耐盐的苜蓿中华根瘤菌(\%Sinorhizobium meliloti) \%042B为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶\%Eco\%RⅠ的部分酶解,利用电洗脱方法回收15～25kb大小的DNA片段。以碱法制备载体质粒pLAFRⅠ,用\%Eco\%RⅠ将其切成线状,然后用T\-4DNA连接酶将回收片段与线状载体连接,利用包装蛋白进行包装后,感染大肠杆菌(Escherichia coli)S17\|1,构建了042B的基因文库。以固体亚硝基胍作为诱变剂处理出发菌株,在05mol/LNaCl的条件下,从2000个菌落中筛选得到12株042B的盐敏感突变株,以其中稳定的盐敏突变株GZ17为受体菌,利用两亲本杂交将含有042B的DNA片段的pLAFRⅠ重组质粒转移到GZ17中,在含有四环素和05mol/LNaCl的基本培养基上筛选出能够耐盐的阳性克隆,获得了与耐盐有关的7kb长的DNA片段。对该片段进行亚克隆,最终获得了4kb与耐盐有关的片段。     

慢生根瘤菌16S—23S rDNA IGS的RFLP分析

本文对慢生根瘤菌属（Bracyrhizobium）3个已知种及从10种豆科植物中分离的32株慢生根瘤菌进行了16S—23SrDNAIGS的RFLP分析。IGS的PCR产物电泳只出现一条rDNA片段,但表现在长度上菌株间有一定差异,大小在930～1050bp之间,可大致划分为IGSa、IGSb和IGSc3种。用4种四碱基识别序列的限制性内切酶AluI、HaeIII、HinfI和MspI酶解IGSrDNA,综合得到26种IGS－RFLP类型．每一种酶可产生6—12种不同的酶切图谱．结果表明这一方法能很好区分、鉴别慢生根瘤菌,也支持该技术是一种快速、简单、准确及重复性好的微生物鉴定手段．     

重组自噬标志分子LC3的抗血清制备

自噬（autophagy）是胞内蛋白等大分子或细胞器直接或间接与溶酶体结合,从而得以降解的过程.微管相关蛋白1轻链3-β（microtubule associated protein 1 light chain 3 β, MAP1LC3-Ⅱ,简称LC3）,是在高等真核细胞中发现的第一种自噬体膜蛋白,可以作为自噬的标志性分子用于检测自噬活动.为深入研究自噬的发生过程及其与健康和疾病的关系,通过构建pET28a(+)-LC3原核表达系统,应用多聚组氨酸结合树脂分离和纯化了重组LC3蛋白,以该蛋白为免疫原制备了抗LC3的抗血清,并利用HeLa细胞自噬模型采用Western印迹方法对该抗血清的特性进行了鉴定.结果显示,兔抗LC3抗血清同时可以识别LC3的2个亚型LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ,且可清晰检测到自噬发生时LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,表明该血清可以用于自噬的检测.