苜蓿根瘤菌17560细胞膜膜脂组成分析及DGTS合成基因克隆与表达

【目的】分析一株分离自黑龙江省的苜蓿根瘤菌在低磷胁迫及正常磷含量条件下细胞膜脂的组成,并从该菌中克隆和鉴定细胞膜无磷脂二酰基甘油三甲基高丝氨酸(DGTS)合成基因。【方法】分别在不同磷含量的Sherwood基本培养基中进行根瘤菌培养,采用Bligh-Dyer方法提取细胞膜脂,以文献报道Sinorhizobium meliloti(苜蓿中华根瘤菌)菌株1021的脂类图谱和磷脂PE、PG、PC标准品作为参照,利用薄层层析方法分析不同磷含量条件下培养菌株的细胞膜脂组成。根据GenBank中已发表的DGTS合成基因btaA和btaB序列设计引物,以产DGTS菌株基因组DNA为模板,扩增btaA和btaB同源基因,并在E.coil BL21(DE3)表达。同时检测表达菌株是否合成细胞膜无磷脂DGTS以验证基因功能。对菌株17560进行16S rRNA基因序列分析。【结果】分离自黑龙江省的苜蓿根瘤菌17560与Sinorhizobium meliloti的16S rRNA基因序列相似性高达99.8%,但其细胞膜脂组成明显不同于参比菌株Sinorhizobium meliloti 1021的膜脂组成。在低磷胁迫条件下,该菌株的细胞膜脂主要由OL和DGTS等无磷脂组成,但OL的组成明显不同,该菌株含有3种不同类型的鸟氨酸脂(OLs),而参比菌株Sinorhizobium meliloti 1021只含有一种类型的鸟氨酸脂(OL)。在正常磷含量条件下,该菌株的细胞膜脂主要由PE和一种未知的含氨基磷脂组成,PG与PC的含量均较少,而参比菌株Sinorhizobium meliloti 1021的细胞膜脂主要由PE、PG与PC组成。通过PCR扩增从产DGTS菌株17560中获得1 913 bpDNA片段,经序列分析发现其中有两个ORF与菌株Sinorhizobium meliloti 1021的btaA和btaB基因序列相似性均为99%。将该DNA片段克隆于pET-30a(+)得到重组质粒pLH01,转化宿主菌获得表达菌株E.coli BL21(DE3).pLH01,经IPTG诱导后产生相对分子量约为45 kD和25 kD的蛋白。薄层层析验证重组菌细胞膜脂组成,结果表明,表达菌株E.coliBL21(DE3).pLH01可以在IPTG诱导后合成无磷脂DGTS,而转入空载体pET-30a(+)的阴性对照菌株E.coli BL21(DE3).pET-30a(+)则不能合成。【结论】系统发育地位相同的苜蓿根瘤菌株的细胞膜脂组成明显不同;苜蓿根瘤菌的细胞膜组成随培养基中的磷含量不同而变化,低磷胁迫条件下其细胞膜脂主要由OL和DGTS等无磷脂组成;在Sinorhizobium膜脂中首次发现一种未知的氨基磷脂及3种不同类型的鸟氨酸脂(OLs);从菌株17560中克隆获得2个DGTS合成基因btaA和btaB,在大肠杆菌中成功表达,并证实了所表达基因的功能。     

滇池金线鲃(Sinocyclocheilus grahami)与抚仙金线鲃(S.tingi)肌肉营养成分初步分析

该文对滇池金线鲃(Sinocyclocheilus grahami)和抚仙金线鲃(S.tingi)肌肉营养成分的分析表明:两者肌肉(鲜样)中的蛋白质含量分别为21.7%和20.6%,粗脂肪含量分别为3.43%和2.66%,氨基酸总量分别为19.23%和17.67%。其中,必需氨基酸含量分别为其各自氨基酸总量的44.08%及43.69%,必需氨基酸指数则分别为70.00%和65.99%。两者的氨基酸构成比例基本符合FAO/WHO标准,且第一限制性氨基酸均为蛋氨酸+胱氨酸。对于矿物质含量而言,滇池金线鲃K、Na含量均高于抚仙金线鲃,Zn含量低于抚仙金线鲃,而其他矿物质含量则无显著差异。该结果表明,滇池金线鲃和抚仙金线鲃肌肉均为优质食品,且前者的营养品质更优。     

广东长潭水库浮游生物群落结构特征

长潭水库是广东梅州市重要的备用水源地,属于国家一类水源保护区。2010年7月,通过分析长潭水库浮游生物群落组成、生物量及多样性指数等群落结构特征和水体理化指标,揭示长潭水库富营养化水平。结果显示,长潭水库鉴定出55种浮游植物,隶属于6个门,优势种为绿藻门的栅藻（Scenedesmus sp.）、蓝藻门的微囊藻（Microcystis sp.）和伪鱼腥藻（Pseudanabaena sp.）、隐藻门的隐藻（Cryptophyta sp.）以及硅藻门的小环藻（Cyclotella sp.）和针杆藻（Synedra sp.）;藻类密度范围1.71×10⁶~2.44×10⁸ cells/L;浮游动物共检出44种,包括轮虫、枝角类和桡足类,其中轮虫是主要类群。综合营养状态指数评价结果显示,长潭水库部分水体呈轻度富营养化。典范对应分析结果显示,浮游动物、溶解氧、总氮、总磷和化学需氧量是影响长潭水库浮游植物群落结构的关键环境因子。     

黑曲霉产木聚糖酶发酵条件的正交设计试验*

通过正交设计试验,优化了黑曲霉(Aspergillusnigerm12)产胞外木聚糖酶的液体发酵条件,合适的产酶培养基含麦草粉3g,(NH4)2SO40.3g,KH2PO40.1g,MgSO4@7H2O0.05g,NaCl0.03g,Tween800.3g,酵母膏0.1g,微量元素(B、Zn、Mn、Fe、Mo)定容lL;接种量为1.0×107个孢子/50mL培养基,28℃,120r/min,振荡培养5d,木聚糖酶活力达34.47u/mL.     

云南松林与常绿阔叶林中枯落叶分解研究

采用分解袋的方法,研究了云南松、滇青冈和元江栲枯叶在针、阔叶林两种生境下的分解及养分动态变化规律。结果表明,滇青冈和元栲枯叶分解速率高于云南松针叶。在阔叶林下这些枯叶的分解系数（０．５５－０．６１ａ＾－１）要比在云南松林下的（０．５０－０．５３ａ＾－１）高。在分解过程中３种枯叶的Ｎ、Ａｌ、Ｆｅ、Ｚｎ元素含量表现出分解前期富积,后期释放的特征,Ｐ、Ｃａ元素在阔叶林地的分解中也有富积过程。而Ｍｇ、Ｋ元     

蜚蠊尾须单个细毛型感受器对机械刺激的反应

用钨丝微电极插入蜚蠊尾须细毛感受器的园盘作胞外记录.研究了感受器自发脉冲的统计特性.利用电磁驱动装置控制毛杆的偏转,研究了感受器电位和脉冲对正弦波、方波和阶梯波机械刺激的反应特性,并测定了六列细毛的兴奋方向.     

64DP与人染色质的结合反应及细胞核内64DP的检测

现有结果表明64 DP(DNA结合蛋白)可能是一种急性期反应蛋白质。正常人每百毫升血清中含有约50mg的64 DP。目前,关于64 DP的生物学功能国内外尚无研究和报道。这方面的研究对阐明肿瘤及其它病理条件下血清64 DP含量增高的机制和意义有可能提供线索。 已知64 DP在体外具有和DNA结合的特性.它在体内的生理作用是否也和DNA有关呢?本实验首先分离纯化了人肝细胞染色质,用同位素标记的64 DP与染色质进行的结合实验及结合抑制实验表明64 DP能特异地与人染色质结合。进一步用~(125)I标记的兔抗64 DP抗体对人染色质作了固相放射免疫测定,结果定性地显示出染色质内可能含有64 DP。用兔抗64 DP抗体作为第一抗体,利用PAP免疫组织化学染色研究了16例正常肝组织切片,发现大多数切片(80％)中部分肝细胞核内有明显64DP显色颗粒。以上诸实验结果均提示细胞核内有64 DP存在,表明64 DP的生物学功能可能与它的DNA结合特性有关。