辽宁省古生物化石鉴定委员会简介

辽宁省古生物化石鉴定委员会成立于2001年1月12日,是全国第一个省级古生物化石的专门鉴定组织,聚集了辽宁省内、国内古生物学界的精英,有的在世界古生物学界也颇具影响。其中包括中国科学院、中嘲地质科学院、北京大学、吉林大学、中国地质大学、东北大学及沈阳地质矿产研究所等各门类古生物专家35人。     

海洋细菌Bacillus sp．HN07的分离鉴定及所产碱性纤维素酶性质研究

从渤海海域（121°30′00″E,40°25′00″N）海泥中筛选到一株产碱性纤维素酶的海洋细菌。通过形态观察、生理生化特性及16SrDNA序列分析,鉴定该菌株属于芽孢杆菌属（Bacillus）,命名为Bacillussp．HN07。研究表明：HN07最适生长温度30℃,适宜在pH7．0～8．0、含2．0％～3．0％NaCl的培养条件下生长和产酶,并且具有较好的遗传稳定性。酶学性质初步研究显示,HN07所产碱性纤维素酶最适反应温度为45℃,最适pH为8．0,在碱性条件下具有较好的稳定性,具有潜在的工业应用价值。     

微生物鉴定系统在肠道病原菌检测中的应用

目的建立简便、快速、系统的病原菌生化检测方法。方法通过应用ATB微生物鉴定系统对112株可疑肠道病原菌菌株进行检测分析,并与国家标准法结合鉴定。结果ATB微生物鉴定系统在112株可疑肠道病原菌菌株中检测出肠道病原菌66株,鉴定结果与国家标准法结果一致,而对常规检测不能确定的37菌株也能给出明确的鉴定结果。结论该系统操作简便、快速,缩短了鉴定周期,提高了鉴定效率,检测范围广,可以作为肠道致病菌检测常规方法的辅助工具,有利于病原菌的快速检出。     

白木香内生真菌的分离鉴定及其抑菌活性

从白木香Aquilaria sinensis（Lour．）Gilg木质部的树脂形成部位和健康部位中共分离获得42株内生真菌,经初步鉴定,产孢的33株分属于3目4科7属,其余未产孢的9株暂归为无孢菌群。采用杯碟法和MTT法分别测定了各菌株的发酵上清液对3种病原菌的体外抑菌活性和2种肿瘤细胞的体外细胞毒活性。结果表明,白木香木质部健康部位内生真菌以枝顶孢霉属为优势属,而树脂形成部位的内生真菌种类比健康部位要多,且以青霉属为优势属。其中26株至少能抑制一种指示菌,占总数的61．9％;7株对指示瘤株具有细胞毒活性,占总数的16．7％。抑菌活性菌株主要分布在枝顶孢霉属和青霉属。枝顶孢霉属菌株抑菌活性较强,其抗菌活性成分值得进一步研究。     

凹甲陆龟沙门氏菌的分离鉴定及毒力因子基因的PCR检测

从成都动物园因腹泻死亡的凹甲陆龟体内分离到一株病源菌,经选择性分离培养、生化试验、血清型鉴定等,确定该病源菌为D群肠炎沙门氏菌,其抗原结构式为1,9,12∶ g,m∶ -.该菌株对小鼠有较强的致病性,能引起人工感染小鼠大量死亡,且从其体内分离到相同特性的菌株;药物敏感性试验证实该分离菌对头孢曲松、氧氟沙星、卡拉霉素、多粘菌素、复方新诺明、呋喃唑酮等敏感,对链霉素、四环素、氯霉素等耐药;同时根据GenBank中已报道的沙门氏菌毒力因子ivnA和ivnE的基因序列,设计两对特异性引物对该菌进行PCR检测,结果在该菌中成功扩增并检测出ivnA和ivnE基因.本试验尝试了沙门氏菌的PCR检测方法,为该分子诊断技术的全面推广奠定了良好基础,也为今后该疾病的预防、诊断和治疗提供了科学的实验数据.     

双效表达载体的构建及其U6启动子的功能效率鉴定

利用pBudcE4.1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体,为双效疫苗的研制提供新的研究思路.以含U6启动子的载体为模板,PCR扩增得到U6启动子,用其置换载体pBudcE4.1内的CMV启动子的核心部分构建shRNA与蛋白共表达载体.用干扰绿色荧光蛋白表达的方法鉴定重组载体中的U6启动子能否启动shRNA的表达.经PCR扩增、双酶切鉴定及DNA测序证明成功构建了载体pBudcE4.1-U6.用干扰载体pBudcE4.1-U6-eGFPshRNA与含eGFP的载体共转染293T细胞后,荧光显微镜观察显示eGFP的表达量下降;流式细胞仪检测细胞的转染效率降低.研究结果证明U6启动子正常发挥作用. 成功构建RNAi与蛋白共表达载体,为利用该载体研制动物双效疫苗奠定了基础.     

铅螯合物人工抗原的制备与鉴定

以双功能螯合剂异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)螯合铅离子,制备得半抗原Pb-ITCBE,然后再分别与载体蛋白KLH或BSA偶联制备得免疫原Pb-ITCBE-KLH与包被抗原Pb-ITCBE-BSA,ITCBE-BSA.用二喹啉甲酸法测3种抗原的浓度,分析半抗原、抗原与载体蛋白的紫外吸收光谱,利用SDS-PAGE对3种抗原的分子量进行鉴定,用三硝基苯磺酸法检测3种抗原中的赖氨酸残基的ε-NH2被半抗原替换的程度,用石墨炉原子分光吸收法检测抗原中铅的含量.研究结果表明,免疫原与包被抗原制备成功,Pb-ITCBE-KLH、Pb-ITCBE-BSA、ITCBE-BSA的浓度依次为6.47± 0.08 mg/ml,6.68± 0.06 mg/ml,5.57± 0.05 mg/ml;抗原与载体蛋白的紫外吸收光谱的特征各不相同;SDS-PAGE的结果显示3种抗原的分子量均不同于各自的载体蛋白;抗原中载体蛋白ε-氨基的替换程度依次为1.86± 0.74 %、55.53± 1.13%、54.19± 1.34%;铅的含量依次为15.64± 0.11 μg/ml,17.33± 0.15 μg/ml,0 μg/ml.     

一株蓝麻黄内生放线菌的分离、鉴定和活性研究

目的:分离对农作物致病菌具有拮抗作用的株内生放线菌,并对其进行系统鉴定.方法:经表面消毒采用研磨法从蓝麻黄中分离内生放线菌;再通过琼脂扩散法筛选具有抗农作物致病菌活性的内生放线菌;利用菌株形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析对拮抗菌进行鉴定;并对代谢产物做了生物碱的检测.结果:从蓝麻黄中分离到菌7株内生放线菌而其中的XJEG-GA-16具有较好拮抗作用,该菌对7种植物病原菌具有较好的拮抗作用,尤其是对玉米大斑病菌的拮抗作用显著抑菌圈大于20mm.经形态学观察,培养特征、生理生化特和分子分类学分析鉴定与Streptomyces albus subsp.albus在同一个分支上,同源性为99%.该菌株代谢产物中含有生物碱.结论:蓝麻黄内生放线菌XJEG-GA-16对农作物致病菌有明显的拮抗作用,最终鉴定为链霉菌Streptomyces albus subsp.Albus.     

耐高温、耐酸产酒精酵母的筛选与鉴定

以白酒厂窖泥和生产用酒曲为材料,富集、分离得到32株酵母菌,从中筛选到1株产乙醇能力强,耐高温、耐强酸、起酵速度快的菌株Y30。该菌株能在45℃正常发酵,且致死温度达到59℃,比文献中报道高5℃;能在pH2．5的条件下正常发酵;能耐14％的酒精度;起酵速度快,接种4h后即开始发酵。对菌株进行形态分析、生理生化实验、Biolog鉴定和分子鉴定,确定该菌株为Saccharomyces cerevisia。该菌株的成功选育为后续高效生产乙醇提高了很好的菌种来源。