天然胶乳脂质的磷脂组成与分布

本文采用单向硅胶薄层色谱对“红星1号”（抗风品系）和“9－110”（抗寒品系）两种无性系天然橡胶胶乳脂质的磷脂组成进行定性分析,分离出8种磷脂组分,已检出6种,发现两种是从来没检出过的磷脂组分,此外用薄层色谱扫描和“吸光度比例系数校正法”对两种品系天然胶乳总脂,橡胶相和底层脂质中各种磷脂组分的分布进行了快速定量分析。     

一种快速、高效的橡胶树胶乳总RNA 提取方法

胶乳是橡胶树(Hevea brasiliensis)乳管中特殊的细胞质, 主要由橡胶粒子、黄色体、F-W粒子和普通细胞质成分构成, 其中橡胶粒子占20%-40%, 蛋白含量高达1%-2%。由于高比例橡胶粒子和蛋白质的干扰, 目前使用的胶乳RNA提取方 法都具有步骤繁琐、胶乳需求量大、操作技巧性强不易掌握等缺点。为快速、高效地获取高质量的胶乳RNA, 我们在现有方法的基础上摸索出一套步骤简单、容易操作、快速、高效提取橡胶树胶乳总RNA的简易方法, 获得了较好的实验效果。紫外分光光度计、RT-PCR和RACE分析结果表明, 使用该方法提取的胶乳RNA质量完全能够满足相应的分子操作, 但所需时间仅为目前常用方法的50%, RNA获得率提高了2-3倍, 操作难度大大降低。     

不同割制对橡胶树胶乳矿质养分流失的影响

为了研究不同割胶制度对胶乳矿质养分流失的影响,以成龄橡胶无性系PR107为研究材料,在1a的不同月份研究了5种割胶制度下干胶中矿质养分N、P、K、Ca、Mg的流失情况,分析了外界因素(如割胶频率、乙烯利刺激强度、月平均温、月降雨量等)对橡胶树胶乳养分流失量的影响情况,并建立了胶乳养分流失量与外界因素的直线回归方程,结果表明:(1)不论是传统割胶还是乙烯利刺激割胶,PR107胶乳中矿质养分的流失量大小顺序为:N>K>P>Mg>Ca;(2)与传统割胶相比,4种乙烯利刺激割制对PR107胶乳中矿质养分的流失量具有极显著的影响(P<0.01),加速了橡胶树养分的流失,其中N素增加了1.01～1.26倍,P素增加了1.19～1.53,K 素增加了1.26～1.58倍,Ca素增加了0.69～1.14倍,Mg素增加了1.02～1.51倍.在一定范围内,随着刺激强度或割胶频率的增加,每刀流失的养分数量呈下降趋势,但胶乳养分流失的总量却增加.(3)胶乳养分流失量与外界因素的直线回归方程达显著水平,在一定程度上可用于预测胶乳养分的流失量.     

乙烯利诱导胶乳基因HbEtIe的克隆与表达分析

在成功构建巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)胶乳差异表达cDNA消减文库的基础上,利用RACE技术成功克隆了一个新的乙烯利诱导表达胶乳基因HbEtIe。分析表明,该基因含有1个158 bp的内含子和2个长度分别为92 bp和178 bp的外显子;cDNA全长551 bp,包含1个270 bp的完整阅读框,174 bp的3′-UTR和107 bp的5′-UTR,推导氨基酸序列中含有一个未知功能结构域DUF581。HbEtIe基因在乙烯利刺激条件下的胶乳中特异性表达并受到乙烯利的调控,其表达量随处理时间的延长而增强。HbEtIe基因与拟南芥衰老相关基因SAG102具有较高的同源性暗示,HbEtIe可能参与了乙烯利诱导巴西橡胶树乳管衰老的分子调控。     

巴西橡胶树的脂酰辅酶A还原酶cDNA克隆及其序列分析

从巴西橡胶树差减cDNA文库中筛选到一个与脂酰辅酶A还原酶同源性较高的基因片段,根据该基因片段序列信息,设计特异引物,采用RACE进行差异片段的5’和3’端的扩增,获得长度为1365bp的cDNA克隆R28（GenBank登陆号：AY461413）。序列分析表明,该基因包含1149bp的开放阅读框,5＇-UTR为96bp,3＇-UTR为128bp,编码382个氨基酸,推测其蛋白质的分子量为43．5kDa,等电点为8．97,有一个跨膜螺旋N（187至215位氨基酸）和1个由17个氨基酸组成的信号肽（1至17位氨基酸）。R28含有脂酰辅酶A还原酶的保守（NADP结合蛋白保守区）,推测该基因是一个脂酰辅酶A还原酶基因。     

视黄醇结合蛋白两种测定方法的可比性与不同真空采血管间干扰性评价

目的观察视黄醇结合蛋白（RBP）免疫比浊法（340nm波长）和胶乳增强免疫比浊法（600nm波长）两种检测方法的可比性,以及不同采血管的影响差异。方法用三种采血管,随机抽取40例样本,由同一操作者在同一生化仪上,用两种不同方法学的RBP试剂进行检测。并用SPSS17．0统计软件进行处理,以P〈0．05为有统计学意义。结果普通无抗凝剂采血管用两种方法测定比较,P〉0．05无显著性差异;免疫比浊法用肝素抗凝采血管与普通无抗凝剂管相比,有显著性差异（P〈0．05）;胶乳增强免疫比浊法用分离胶采血管与普通无抗凝剂管相比,有显著性差异（P〈0．05）。结论视黄醇结合蛋白（RBP）两种检测方法的检测结果具有可比性,可应用于临床;免疫比浊法（340nm波长）受肝素抗凝管干扰影响结果;胶乳增强免疫比浊法（600m波长）受分离胶采血管干扰影响结果。     

金黄色葡萄球菌滤液制剂中肠毒素的检测研究

使用反向被动血凝试验(RPHA),对金黄色葡萄球菌滤液制剂中的肠毒素(SET)进行了检测研究.证明已生产和临床应用近10 a的金黄色葡萄球菌滤液制剂中检测到SET存在.其型别系属SET中的C型.按原生产工艺所生产的金黄色葡萄球菌滤液制剂原液中SET的含量在12.5～50 mg/L.生产时欲提高SET含量的条件试验中证实,使用葡萄球菌产毒的胰酪胨综合培养基,以摇瓶方式培养24～36 h,可使SET含量比用生产培养基培养提高16倍.金黄色萄萄球菌滤液制剂中SET的成分是极其稳定的,室温存放2 a未见该成分降低.其半衰期可达4 a.在采用RPHA和RPLA检测SET比较试验中证明:RPLA试剂的敏感性高于RPHA的4倍.但对于检测金黄色葡萄球菌滤液制剂中SET的实际含量几乎是相等的.     

橡胶树三个品系（热研8-79、热研7-33-97和PR107）胶乳生理参数的比较研究

通过测定胶乳生理参数和胶乳产量,首次比较分析了橡胶树(Hevea brasiliensis)3个品系(热研7-33-97、热研8-79和PR107)的产排胶特性.结果表明,3个品系在初产期、未施乙烯利刺激时的胶乳产量和生理参数差异明显,胶乳产量为热研8-79>热研7-33-97>PR107;蔗糖转化酶活性与胶乳产量显著正相关,但其它生理参数与产量的相关性均不明显;割胶前一段时间的降水量是影响割次胶乳产量的重要因素,其中PR107品系受影响最大.这说明橡胶树品系的产排胶具有特异性,需要建立品系适宜性割胶制度.     

PBP2a多克隆抗体制备及其乳胶凝集检测法的建立

目的制备兔抗青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)抗体,建立检测PBP2a的乳胶凝集法。方法以重组PBP2a转肽酶区蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测所制备的抗血清效价和特异性,用纯化的多抗建立乳胶凝集法。结果纯化的重组蛋白免疫家兔能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达1∶25 600,Western blot显示该抗体能有效识别原核表达及MRSA临床分离株中的PBP2a,建立了乳胶凝集法,敏感性及特异性良好。结论成功制备了抗PBP2a抗体血清,初步建立了检测PBP2a的乳胶凝集法,为有效制备高特异的单克隆抗体进而研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础。     

一种快速、高效的橡胶树胶乳总RNA提取方法

胶乳是橡胶树（Hevea brasiliensis）乳管中特殊的细胞质,主要由橡胶粒子、黄色体、F-W粒子和普通细胞质成分构成,其中橡胶粒子占20％-40％,蛋白含量高达1％-2％。由于高比例橡胶粒子和蛋白质的干扰,目前使用的胶乳RNA提取方法都具有步骤繁琐、胶乳需求量大、操作技巧性强不易掌握等缺点。为快速、高效地获取高质量的胶乳RNA,我们在现有方法的基础上摸索出一套步骤简单、容易操作、快速、高效提取橡胶树胶乳总RNA的简易方法,获得了较好的实验效果。紫外分光光度计、RT-PCR和RACE分析结果表明,使用该方法提取的胶乳RNA质量完全能够满足相应的分子操作,但所需时间仅为目前常用方法的50％,RNA获得率提高了2-3倍,操作难度大大降低。