化学修饰解除天冬酰胺酶抗原性研究

本文报道了用活化的单甲氧基聚乙二醇PEG_2在底物保护的条件下修饰天冬酰胺酶。结果,修饰酶在抗原抗体结合能力完全消失的同时,酶活力保持30％以上,且修饰酶的抗胰蛋白酶水解能力明显增强,体外半衰期延长17倍,免疫原性显著下降。     

黑曲霉糖化酶的分离纯化及其性质

采用硫酸铵分级DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadez G—150凝胶过滤等方法,从黑曲霉AS 3.4309变异株B-11的发酵液中分离出三种电泳均一的糖化酶(GI、Gill、GII)。其收率分别为0.8％、50％和18．6％。GI、Gill和GII的分子量分别为27000、67000和53000;等电点分别为3.38、3.52和3．59;含糖量分别为8．7％．13．6％和18．3％;最适pH分别为4.4、4．6和4.6;对可溶性淀粉的Km值分别为2．0、0．77和1．18g／L;二级结构中a-螺旋含量分别为18．4％、23．9％和28．9％;最适温度均为70℃。生淀粉可吸附Gill,吸附率达80％。此外还测定了三种同工酶的氨基酸组成及含量。GI、GII和GIII均由一条多肽链组成。     

Tween 80解除乙醇对内切葡聚糖酶(Cx)的抑制作用

通过还原糖量的测定,可知Cx酶在乙醇存在下活力降低。当该体系中加入一定浓度的Tween 80时,Cx酶抗乙醇抑制的能力增强。由紫外光谱及圆二色谱可见,乙醇使Cx酶中α-螺旋含量增加,Tween 80使Cx酶中α-螺旋含量减少,结构变得松散。适量的Tween 80能使Cx酶在乙醇中保持一种具有较高活力的构象。     

淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶在盐酸胍和碳酸胍变性过程中的构象变化

 利用紫外差光谱,荧光光谱和圆二色谱法对比地研究了淀粉液化茅孢杆菌α-淀粉酶在盐酸胍和碳酸胍变性过程的构象变化与活性关系以及在变性早期钙离子对酶构象的稳定作用。     

猪肝DFPase的结构及某些性质的研究

 本文对纯化了的猪肝DFPase~[**]进行了一系列结构和性质的测定。用重复中毒的方法证明了猪肝中低分子量二异丙基氟磷酸酯(DFP)水解酶(DFPase)是属于催化酶。分析了DFPase的氨基酸组成并求出其分子量为17900。该酶的km值为6.7×10~(-4)mol/L。催化水解DFP的最适pH为7.5～7.7,反应最佳温度为70℃。根据催化水解DFP、Soman的活力以及Mn~(2+)对此酶的影响证明该酶属于Mazur type DFPase~[1]。     

天冬氨酸酶在盐酸胍变性时的酶活性与构象变化

 本文应用荧光光谱法和CD光谱法测定了天冬氨酸酶在不同浓度盐酸胍中变性时的构象与活力变化,并测定了天冬氨酸酶在不同浓度盐酸胍中变性时的巯基暴露速度。发现一部分色氨酸残基位于分子疏水核内部,另一部分位于分子表面;至少一部分酪氨酸残基与其相邻近基团形成氢键。该酶的大部分巯基位于分子内部结构比较稳定的区域而不在分子表面。低浓度盐酸胍作用下,构象发生明显变化,而活力维持原水平;盐酸胍达到一定浓度后,活力才发生骤然下降。CD谱表明,α-螺旋构象维持整个分子构象,因而对于维持活性中心构象是重要的。     

疏水载体固定化胆碱酯酶的研究

首次摸索了带有疏水基团琼脂珠固定化鸭血清胆碱酯酶的最佳条件,固定化酶活力回收为７０一７６％。探讨了不同疏水基团对固定化酶偶联率、稳定性及对有机磷化合物灵敏度的影响。α－萘氨基、Ｐ－甲苯氨基和苄氨基载体固定化酶连续操作半哀期分别为２２．３ｈ,２１．７ｈ,１２．８ｈ,对有机磷化合物Ｖｘ和ＧＢ的灵敏度分别提高了２．２～１２．６倍和２．３～４．９倍,这对于在环境保护、食品检验、军事侦检等领域检测微量有机磷化合物具有重要意义。     

化学修饰的和固定化的脂肪酶在有机溶剂中的催化作用研究

本文对聚乙二醇修饰脂肪酶、多孔玻璃载体吸附酶、多孔玻璃载体丙酮沉积酶、硅藻土吸附酶、氧化铝吸附酶和琼脂珠疏水载体吸附酶在有机相中酯合成和酯交换反应的催化作用进行了研究。实验表明,不同形式的酶需要不同的最适加水量。而且,在各自最适条件下,对各种形式酶进行了比较,得出硅藻土和琼脂珠疏水载体是很好的固定化载体,疏水性琼脂珠固定化酶在有机相中的活力比酶粉高46.5％。     

α-淀粉酶在盐酸胍和碳酸胍变性中有关胍基作用的研究

利用紫外差谱、荧光光谱和园二色谱法对比地研究了α-淀粉酶盐酸胍和碳酸胍变性,分析了两种胍变性明显差异的原因。通过等同的胍基浓度下,α-淀粉酶两种胍变性的构象变化与活性关系的实验,表明同等摩尔浓度的两种胍盐变性能力上的明显差异并不主要是由于它们胍基含量上的不同。将盐酸胍从中性pH(6.5)调至碱性pH(10.4),其变性能力大增,紫外差谱与碳酸胍变性相似,出现了290nm的正肩和296nm的正峰,与此同时,酶的荧光强度大大降低,大部分酶活性丧失。由此推论,两种胍变性能力的明显差异的重要原因之一是在碱性介质中胍基的变性能力明显增强,并分析了其增强的原因。     

棕色固氮菌含铁超氧化物歧化酶重组研究

将棕色固氮菌230含铁超氧化物歧化酶对8mol/L脲,10mmol/L EDTA透析制备无活性缺辅基蛋白;将其在8mol/L脲中对10mmol/L硫酸亚铁铵透析得到重组超氧化物歧化酶。重组酶含有与天然酶相近的铁含量,活性为天然酶的89.1％。缺辅基蛋白,重组酶与天然酶都是由二个相同的亚基组成;重组酶的吸收光谱与荧光光谱与天然酶几乎一样,而缺辅基蛋白则有较大的差异;从园二色谱的分析得知,缺辅基蛋白不含有α—螺旋,而天然酶和重组酶中α螺旋的含量分别为21％和20％;缺辅基蛋白比天然酶或重组酶具有更大的巯基反应性。