大豆体细胞胚增殖保存与萌发植株体系的建立

以大豆(Glycine max(L.)Merr.)未成熟子叶为外植体,用高浓度生长素诱导东北地区主栽大豆的18个基因型体细胞胚胎发生,诱导率为0.29%～77.62%.在此基础上成功地诱导10个大豆基因型产生可继代增殖的体细胞胚,诱导率在5.2%～22.1%之间.经在固体培养基上多次继代增殖,首次建立了可在固体培养基上继代增殖的大豆体细胞胚萌发再生体系,继代一年以上的体细胞胚仍具有萌发能力和正常育性,得到了结荚植株.此体系的建立为大豆的遗传转化提供了新的、更为有效的受体体系.     

玉米蛋白粉替代鱼粉对大黄鱼生长、血清生化指标及肝脏组织学的影响

为探讨玉米蛋白粉替代鱼粉对大黄鱼(Larimichthys crocea) 幼鱼生长、血清生化指标及肝脏组织形态的影响, 进行了为期56d的养殖试验, 探索玉米蛋白粉替代大黄鱼幼鱼饲料鱼粉的适当比例。以初始体重为(10.49±0.03) g的大黄鱼幼鱼为研究对象, 用玉米蛋白粉替代基础饲料(含40%鱼粉)0、15%、30%、45%、60%和75%的鱼粉来配制6种等氮(粗蛋白含量45%)等脂(粗脂肪含量10%)的实验饲料, 分别标记为C0、C15、C30、C45、C60、C75组。除C0以外的替代组分别添加了适量的晶体氨基酸(赖氨酸和蛋氨酸)。结果表明, 玉米蛋白粉替代水平对大黄鱼幼鱼存活率、试验鱼特定生长率、饲料系数均无显著性差异(P>0.05)。C45和C60组肌肉粗蛋白含量显著高于C0组(P<0.05), 肌肉粗脂肪含量C45组显著高于C0、C15和C75组 (P<0.05), C45、C60和C75组肌肉水分显著低于C0组(P<0.05), 全鱼粗蛋白、粗脂肪、水分含量无显著差异(P>0.05); 灰分含量有上升趋势, C75组显著高于其他组(P<0.05)。各替代组的血清白蛋白、白球比、谷草转氨酶、葡萄糖均无显著性差异(P>0.05); 随着替代比例的升高, 总胆固醇有降低的趋势, 除C15组与C0无显著性差异外(P>0.05), 4组均显著低于CO组(P<0.05); 实验探讨替代后对鱼的影响, C75组血清总蛋白和球蛋白含量显著低于C0组(P<0.05); C75组血清谷草转氨酶含量显著高于C0(P<0.05)。各处理组总抗氧化能力、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化氢酶均没有显著性影响(P>0.05), 但替代组总抗氧化能力含量均高于C0; 丙二醛在C75组显著高于C0组(P<0.05)。通过肝组织学观察表明, 当替代比例高于45%时, 呈现肝细胞核偏位、胞浆内脂肪滴较多、细胞透明空泡化等症状。综上所述, 在实验条件下, 研究认为玉米蛋白粉替代鱼粉对大黄鱼幼鱼的适宜添加量为45%。     

CREB与其相关的非编码RNA在肿瘤发生发展中的作用

cAMP反应元件结合蛋白（cAMP responsive element binding protein, CREB）是亮氨酸拉链家族转录因子。新近研究发现,其在肿瘤组织中的表达显著高于癌旁,被认为是体内的原癌基因之一。非编码RNA（non-coding RNA, ncRNA）是生物体内不能翻译成蛋白质的RNA,主要包括微小RNA（microRNA, miRNA）和长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）等,其异常表达与肿瘤的发生发展密切相关,是目前肿瘤研究的热点。研究表明,CREB与ncRNA之间存在互动效应,并且二者之间的相互作用影响肿瘤的发生发展,然而miRNA和lncRNA的作用机制却不相同。肿瘤细胞内高表达的CREB在影响下游靶基因表达时能够正调控miRNA,而对lncRNA则有促进和抑制两方面的作用。反之,肿瘤细胞中一些低表达的miRNA能促进CREB的表达;有趣的是,高表达的lncRNA能够促进CREB的表达和诱导其活性增强。在影响下游靶基因表达时miRNA仅仅发挥抑制作用,而lncRNA则分别具有促进和抑制作用。本文结合我们的系列报道和最新的研究结果,对ncRNA与CREB的互动效应及其与肿瘤的发生发展之间的关系作一综述。     

SKA2及其相关的miRNAs在肿瘤发生发展中的作用北大核心CSCD

纺锤体与动粒相关复合物2(spindle and kinetochore associated 2,SKA2)是参与维持有丝分裂中期赤道板的稳定和适时关闭纺锤体检测点的重要蛋白质。早期研究发现,SKA2不仅调控细胞周期的进程而影响细胞增殖,还能通过其他分子机制参于肿瘤的发生。微小RNA(microRNA,miRNA)作为原癌基因或抑癌基因影响肿瘤细胞的增殖和迁移。新近研究显示,SKA2在其内含子区域miRNA的调节下,在一些肿瘤组织和细胞中异常高表达。由此可见,SKA2和miRNA之间存在密切联系。本文结合目前的研究成果,对SKA2与相关的miRNA在肿瘤发生发展中的作用及其分子机制作一综述。     

大豆体细胞胚胎发生与农杆菌介导的遗传转化

以55个大豆基因型未成熟子叶为外植体,用高浓度2,4-D诱导大豆体细胞胚胎发生与植株再生,并对生产上种植面积大、体细胞胚胎发生率高的大豆基因型用农杆菌介导法进行遗传转化。结果表明,东北地区主栽的大豆基因型中有14个基因型体细胞胚胎发生率超过40%。用含有pGBI121S4ABC质粒的LBA4404农杆菌侵染5个东北地区主栽大豆基因型的2147个未成熟子叶,经卡那霉素抗性筛选得到12株PCR阳性植株。 Abstract：Somatic embryogenesis was induced and the regenerated plants were obtained by higher concentrations of auxins with immature cotyledon of 55 genotypes in soybean. Bivalent insect resistant genes were transformed into immature cotyledon of soybean which have high frequency of somatic embryogenesis via Agrobacterium-mediated. The results showed that 14 genotypes possessed high frequency of somatic embryogenesis (more than 40%) among soybean genotypes from Northeast area. 2147 immature cotyledons of 5 different soybean genotypes cultured in Northeast area were inoculated with LBA4404 (including pGBI121S4ABC plasmid). 12 regenerated plants selected by Kanamicy gave positive PCR reaction.     

国外生物技术产业发展政策研究

全球生物技术产业尚处于发展时期,政府的政策对技术的进步和产业的发展有明显的导向和促进作用。对美国、欧洲等国家和地区的产业政策进行综合研究,发现这些生物技术产业相对发达的国家和地区,尤其是美国,其产业政策已成体系,而且可操作性强,对产业的推动作用明显,具有相当的可借鉴意义。从组织管理结构、科研投入机制、鼓励研发创新、财税支持方式、资本市场培育、产业基地建设、中介服务网络构建、人才培养与引进、以及国际合作等方面对国际上行之有效的生物技术产业政策进行了归纳分析 。     

根管治疗失败病例根管内细菌对根尖周组织致病力的实验研究

目的观察根管治疗失败病例根管内分离的主要微生物对狗牙根尖周组织的影响。方法选择成年健康杂种狗5只,共有40个实验牙,80个实验牙根。实验一组于狗牙根管内接种溶血链球菌、微小消化链球菌、产黑色素类杆菌及具核梭杆菌;实验二组于狗牙根管内接种粪肠球菌及上述4种细菌;对照组不接种细菌。对狗牙完成根管治疗。分别于治疗后3、6、12个月拍摄根尖X线片,并记录牙齿和根尖周组织的临床表现;根管治疗后12个月处死动物,制备根尖周组织病理标本,观察根尖周骨组织破坏情况;动物处死前,根管内进行微生物的取样、培养和鉴定。结果实验组可见狗牙槽骨尖周骨质吸收,牙周膜纤维排列受到破坏,实验二组对根尖周破坏重于实验一组,对照组根尖周骨组织无破坏。结论从根管治疗失败病例根管内分离的主要微生物粪肠球菌、溶血链球菌、微小消化链球菌、产黑色素类杆菌及具核梭杆菌对狗牙根尖周组织有明显的破坏作用。     

两种根管冲洗液对狗牙根管内细菌抗菌作用的实验研究

目的观察2%洗必泰溶液和3%双氧水2种根管冲洗液对狗牙根管内粪肠球菌、溶血链球菌、微小消化链球菌、中间普氏菌及具核酸杆菌的影响,为临床根管治疗提供参考。方法选择成年健康杂种狗3只,共有24个实验牙,48个实验牙根。于狗牙根管内接种粪肠球菌、溶血链球菌、微小消化链球菌、中间普氏菌及具核酸杆菌。对狗牙完成根管治疗。于治疗后12个月拍摄根尖X线片,并记录牙齿和根尖周组织的临床表现。将患牙随机分为3组,每组7颗患牙,去除根管内充填物并进行根管预备,实验一组用2%洗必泰溶液冲洗根管,实验二组用3%双氧水冲洗根管,对照组用0.9%NaC l溶液冲洗根管。分别在根管预备前及根管预备冲洗后对根管内细菌取样,培养,鉴定并记录细菌菌落数量,测定根管内细菌变化情况。结果根管预备冲洗后3组根管内的细菌量均较根管预备前显著下降（P〈0.05）。2%洗必泰溶液和3%双氧水2种根管冲洗液的杀菌效果明显好于0.9%NaC l溶液（P〈0.05）,2%洗必泰溶液明显好于3%双氧水（P〈0.05）。结论2%洗必泰溶液是有效的根管冲洗药物,可明显减少狗牙根管内粪肠球菌、溶血链球菌、微小消化链球菌、中间普氏菌及具核酸杆菌的数量,但不能完全清除根管内的细菌。     

启动子CMV和EF1α对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响

目的　构建人胰岛素基因真核高效表达载体 ,为胰岛素转基因研究奠定基础。方法　用限制性内切酶SpeⅠ和HindⅢ消化pEF1α GFP ,回收 1 2kbEF1α启动子 ,插入到pCMV mINS的NruⅠ和HindⅢ位点中 ,获得重组质粒pEF1α mINS ;将pCMV mINS和pEF1α mINS分别转染BHK细胞 ,用G418筛选 ,阳性克隆传至 2 0代后 ,分别用放免方法和免疫组化法分析胰岛素和 或胰岛素原在BHK细胞中的表达情况。结果　经放免测定 ,pCMV mINS和pEF1α mINS在BHK细胞中胰岛素和 或胰岛素原的表达量分别为 4 0 77μIU ml和 6 897μIU ml。经免疫组化分析 ,pCMV mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 190 0± 19 5 6 ;pEF1α mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 181 4± 18 45 ,在BHK细胞核中表达水平的灰度值为 15 5 4± 11 6 6。结论　在BHK细胞中启动子EF1α启动胰岛素基因表达的活性比启动子CMV高。     

二烯丙基二硫上调Beclin1介导白血病K562细胞自噬性死亡的研究

目的：通过二烯丙基二硫诱导白血病K562细胞发生自噬性死亡,探讨其作用机制。方法：40 mg/LDADS作用K562细胞12小时后,透射电镜观察K562细胞超微结构,MDC染色荧光显微镜观察自噬泡及流式细胞仪定量检测自噬率,RT-PCR检测Beclin1mRNA的表达水平。结果：DADS作用后的K562细胞后,透射电镜可观察到胞质内出现大量自噬体;MDC染色荧光显微镜观察显示,K562细胞胞浆中的自噬泡明显增多,而空白组与溶媒组胞浆中的自噬泡很少;流式细胞术定量测定空白对照组、溶媒对照组、DADS药物组自噬率分别为（7.27±5.60）%、（7.10±5.13）%、（27.39±6.51）%（P〈0.05）;空白对照组为0.658±0.007,溶媒对照组为0.671±0.012,两者的Beclin1mRNA的表达强度无明显差异（P〉0.05）,DADS药物组为0.911±0.008,高于对照组（P〈0.05）。结论：二烯丙基二硫可诱导白血病k562细胞发生自噬性死亡,其机制可能与Beclin1的上调有关。