KGF联合HIF-1α对BECN1敲除IEC-6细胞缺氧的保护作用及机制

摘要 目的：探讨KGF联合HIF-1α对BECN1敲除后的IEC-6细胞在缺氧应激状态下的保护作用及相关机制。方法：构建敲除BECN1基因的稳定细胞系IEC-6B-细胞,分为空白对照组（BC）、阴性对照组（NC）、HIF-1α组、KGF联合HIF-1α组（KH）。观察细胞形态学改变。检测细胞存活率、ATP含量、细胞周期和细胞凋亡率。检测自噬相关基因表达水平和凋亡、自噬相关蛋白的表达。结果：低氧处理24 h后,各组细胞可见梭形、星形及其它异常形态变化;NC组细胞胞质内可见大量大小不一的吞噬溶酶体泡;其他各组细胞呈现细胞早期凋亡形态变化,BC组和KH组细胞胞质中可见自噬泡。与BC组相比较,各敲除组细胞存活率均显著降低（P<0.01）,其中KH组细胞存活率高于NC组、KGF组及HIF-1α组（P<0.05）。BC组细胞内ATP含量均显著高于其他各组（P<0.05）。与BC组和KH组比较,其他三组细胞G0/G1期百分比显著增加,细胞凋亡率均显著增加（P<0.05）。与BC组相比较,其余各组细胞自噬基因BECN1、SQSTM1及LC3基因mRNA表达均显著降低（P<0.05）;Beclin 1蛋白及LC3 II/LC3 I的比值均显著降低（P<0.05）,且p62蛋白表达显著增加（P<0.05）。KH组的Bax/Bcl-2的比值、Caspase3蛋白表达低于NC组（P<0.05）。结论：KGF联合HIF-1α能促进细胞增殖、增强细胞能量代谢、减少G₀/G₁期阻滞细胞率、抑制细胞凋亡作用,对低氧应激的IEC-6B-细胞具有保护作用。     

黄果龙葵幼苗对镉胁迫的生理生长响应

黄果龙葵（Solanum diphyllum）是茄科的小灌木,已有的研究对黄果龙葵的镉（Cd）响应知之甚少。该研究采用水培控制试验,在160μmol·L^-1 Cd胁迫下,测定了黄果龙葵幼苗在不同胁迫时间点（0、0.5、1、3、7、19 d）的生长、耐性系数（TI）、Cd富集特性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、渗透调节物质和光合色素等指标。结果表明：（1）在胁迫0～3 d时Cd对黄果龙葵幼苗的生长无显著影响。胁迫3～19 d时表现为明显抑制,且毒害随胁迫时间延长而加重。与对照组相比,Cd胁迫使黄果龙葵幼苗的生物量降低13.28%～62.40%。（2）黄果龙葵幼苗的最大Cd积累量为60.14μg·plant^-1,其地上部份的Cd积累量占植株的15.46%～35.24%。（3）丙二醛（MDA）含量呈上升趋势,根的MDA含量最大增幅为对照组的5.25倍。SOD活性、游离脯氨酸、可溶性糖、叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量均呈先升后降的趋势。（4）黄果龙葵幼苗的耐性系数TI随胁迫时间延长而降低,最小值为0.64。综上结果认为,黄果龙葵是一种潜在的Cd...     

化脓链球菌中铁结合蛋白MtsA二级结构的研究

化脓性链球菌是一种革兰氏阳性人类致病菌,其生长和感染离不开铁离子。MtsA是化脓链球菌中直接结合铁离子的一个脂蛋白。通过PCR扩增化脓性链球菌MGAS5005中的MtsA基因,构建高效表达质粒pGEX-MtsA,将其转化到大肠杆菌BL21中并用IPTG进行诱导表达。利用亲和层析方法纯化表达产物。通过多序列比对分析了MtsA铁结合中心的保守性,利用定点突变技术将MtsA的结合配体单位点及多位点进行突变,结合圆二色谱分析这些氨基酸突变后蛋白二级结构的变化。多序列比对结果表明MtsA结合铁离子的氨基酸位点是保守的,4个关键氨基酸位点处于蛋白空间的凹陷处。通过比较空载及饱和铁离子的野生型蛋白以及突变体蛋白的圆二色吸收光谱,发现野生型MtsA结合铁离子后结构更加紧密,H68A,E206A和D281A则比野生型的二级结构松散,而H140A的二级结构和野生型的几乎没有差别。对MtsA 4个结合配体突变后其二级结构变化的研究,为进一步研究细菌中的铁转运机理及开发疫苗候选药物和药靶奠定了一定的理论依据。     

长期定位施肥土壤中的丛枝菌根真菌

从连续26年长期定位施肥土壤中的玉米和小麦根围采集土样,从中鉴定出丛枝茵根(Arbuscular Myc- orrguza,AM)真菌5属19种,包括Glomus属11种:G．caledonium,G．constrictum,G．eburneum,G．ebunicatum, G．hyderabadensis,G．mossese,G．sinuosum,G．tortuosum,G．versiforme,G．sp1,G．sp2;Acaulospora属2种: A．excacota,A．sp;Gigaspora属2种:Gi．margarita,Gi．sp;Scutellospora属3种:S．cerradensis,S．coralloidea, S．pellucida;Archaespora属1种:Ar．leptoticha。     

不同施磷量对春油菜产量和土壤磷素平衡的影响

青海省东部春油菜主产区的土壤速效磷含量高、磷肥施用量大、磷肥利用率低。研究不同施磷量对春油菜的生长、磷素吸收和利用、土壤磷素平衡的影响,可为该地区春油菜田养分高效管理提供科学依据,对保障青藏高原农业可持续发展具有重要意义。本研究于2017和2018年在青海省互助县开展了田间试验,设置0、30、60、90、120 kg P₂O₅·hm^-2 5个磷肥施用量,测定了不同处理春油菜的产量、磷素吸收与利用、籽粒含油率等。结果表明: 2017年施磷量60 kg·hm^-2处理的油菜籽粒产量、成熟期地上部磷素累积量和产油量均显著高于不施磷处理,但施磷量超过60 kg·hm^-2后,籽粒产量和产油量不再增加;2018年施磷量对春油菜籽粒产量、成熟期地上部磷素累积量和产油量均无显著影响。两年度的磷肥表观利用率均很低,平均为6.7%。施用磷肥条件下土壤均有不同程度的磷素盈余,施磷量低于60 kg·hm^-2时盈余量较低。综合考虑春油菜产量、产油量、磷肥表观利用率和土壤磷素表观平衡,在青海省东部春油菜区,推荐施磷量为60 kg·hm^-2。     

高毒力A组链球菌致病机制研究进展

A组链球菌(Group A Streptococcus,GAS)常导致咽炎和皮肤感染,也能引起严重侵袭性感染。根据其表面M蛋白编码基因emm可将GAS分为200多型,严重侵袭性感染多由高毒力株引起,以emm1、emm3、emm12、emm28和emm89型常见。研究发现高毒力GAS株中covRS基因突变可导致细菌逃逸固有免疫防御以及侵袭血管;SpeB的表达下调影响GAS侵袭;高毒力株表达的超抗原(Superantigens, SAgs)能够过度激活T细胞,加剧宿主炎症反应;M1蛋白诱导产生的肝素结合蛋白可造成血管渗漏,加速向全身侵袭。总结了近年来在高毒力GAS致病机制方面的研究进展,以期为GAS严重侵袭性感染的预防和治疗提供新的思路。     

水稻扩展蛋白家族的生物信息学分析

扩展蛋白是植物细胞壁的重要组成部分,具有松驰细胞壁和增加细胞壁柔韧性的作用,在植物的生长发育及抗性等方面起到重要的作用。水稻的全基因组序列统计分析显示,水稻扩展蛋白基因家族包含58个成员,分属于A(34)、B(19)、LA(4)和LB(1)4个亚家族,分布在水稻10条染色体上的58个位点,且同一亚家族成员有成簇存在的现象。扩展蛋白基因长度范围为687~1128 bp,编码蛋白质具有保守的结构域,以及保守的半胱氨酸和色氨酸残基。多数情况下,亚家族成员之间的氨基酸一致率小于35%,而同一亚家族成员之间的氨基酸一致率大于35%。在内含子、外显子组成模式上,水稻扩展蛋白呈现明显的亚家族特异性,除个别基因以外,A类基因含有1或2个内含子,B类含有3个内含子,LA和LB类含有4个内含子。密码子使用统计显示,与其他物种相比,水稻中的扩展蛋白具有更多的密码子使用偏好性,有26个高频密码子存在。研究结果展示了水稻扩展蛋白基因家族的基本信息,为深入研究扩展蛋白基因的功能、探讨物种间的进化关系奠定基础。     

急性冠脉综合征患者GRACE评分与心功能及冠脉病变的关系研究

目的:探讨全球急性冠状动脉疾病登记(GRACE)风险评分与急性冠脉综合征(ACS)患者心功能及冠脉病变的关系。方法:回顾性分析2015年4月至2017年6月我院收治的276例ACS患者的临床资料,根据GRACE评分结果进行分组,GRACE评分140分者作为高危组(93例),GRACE评分109~140分者作为中危组(96例),GRACE评分109分者作为低危组(87例),比较三组的一般资料、生化指标、心功能指标、冠脉病变严重程度,采用Spearman相关系数分析GRACE评分与心功能指标和冠脉病变严重程度的相关性。结果:高危组和中危组男性所占比例、年龄、高血压比例、载脂蛋白-B(Apo-B)、空腹血糖(FBG)、纤维蛋白原(FIB)、胱抑素-C(Cys-C)、同型半胱胺酸(Hcy)、左心房前后径(LAAP)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、多支血管病变所占比例以及重度狭窄和完全闭塞所占比例高于低危组,且高危组高于中危组,差异均有统计学意义(P0.05);高危组和中危组三酰甘油(TG)、载脂蛋白-A(Apo-A)、左心室射血分数(LVEF)低于低危组,且高危组低于中危组,差异均有统计学意义(P0.05)。Spearman相关系数分析显示,GRACE评分与LAAP、LVESD、LVEDD、冠脉病变血管支数、狭窄程度呈正相关关系(P0.05),GRACE评分与LVEF水平呈负相关关系(P0.05)。结论:GRACE评分越高,ACS患者的心功能越差,冠脉病变越严重,GRACE评分可以反映ACS患者的心功能水平和冠脉病变的严重程度。     

多NER基因多态的交互作用与移植排斥的发病风险相关

基因间SNP-SNP的交互作用较单一SNP对于疾病的预警作用可能会达到更优的检测效能。本研究探讨了核苷酸切除修复(NER)系统基因中SNP交互作用对移植排斥反应发病风险的预警作用。通过Sequenom MassARRAY平台进行基因分型,对8个NER基因中的38个多态进行了检测,包括XPA、XPC、DDB2、XPB (ERCC3)、XPD (ERCC2)、ERCC1、XPF (ERCC4)和XPG (ERCC5)基因。单体型分析结果显示,XPA rs3176629-rs2808668 C-T单体型以及ERCC5 G-C-C-T和G-C-T-C单体型可以增加移植排斥反应的发病风险(分别为OR = 1.81,OR=7.72和OR=3.46),而ERCC5 rs2094258-rs751402-rs2296147-rs1047768 A-C-T-T单体型降低了该风险(OR = 0.35)。多因素Logistic回归与多因子降维(MDR)分析均表明,ERCC2 rs50871、ERCC5 rs1047768和XPC rs2228001多态对于发生移植排斥反应存在基因间SNP-SNP的交互作用。因此,XPC rs2228001、ERCC2 rs50871、ERCC5 rs1047768三者的交互作用与移植排斥反应的发病风险相关。     

氧化低密度脂蛋白通过PCSK9/LRP1信号途径促神经细胞凋亡的双向调节

目的 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是多种危险因素引起的中枢神经系统退行性疾病,其中神经细胞凋亡是其主要病理基础之一。高脂血症是AD发生的高危因素,可导致脑组织内氧化低密度脂蛋白（oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL）水平增高。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9)是一个与血脂代谢密切相关的蛋白酶,但有研究显示其与AD发生可能相关。本研究旨在探索PCSK9在介导ox-LDL促神经细胞凋亡中的作用及其机制,进一步阐述高脂血症导致AD等神经退行性疾病的发生机制。方法 首先用不同浓度ox-LDL(0、25、50、75、100 mg/L)处理PC12细胞24 h,油红O染色检测PC12细胞脂质蓄积,Hoechst33258染色和流式细胞术检测PC12细胞凋亡,ELISA检测PC12分泌的β淀粉样肽（amyloid β-peptide,Aβ）含量,蛋白质印迹（Western blot）法检测SREBP2、PCSK9和LRP1的表达。然...