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为了建立中枢神经系统肿瘤小鼠模型,构建了大鼠神经元特异性烯醇化酶(ratneu-ron-specificenolase,NSE)基因启动子调控下的猿猴病毒40大T抗原基因(simianvirus40largeTantigengene,SV40TAg)转基因载体,通过受精卵雄原核显微注射的方法制备转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型;RT-PCR和Northern印迹检测转基因阳性鼠中SV40TAgRNA水平的表达及其组织特异性;免疫组化检测其蛋白质水平的表达。经显微注射共获得9只首代转基因阳性鼠(首建者,Founder小鼠),其中2例出生时即发生神经干细胞来源的肿瘤,其他Founder小鼠经繁育后共建立了5个SV40TAg转基因小鼠系,其中有4个系检测到SV40TAgRNA水平的表达且特异性地表达于脑组织,但未检测到蛋白质水平的表达。研究表明NSE启动子活性具有较强的组织特异性,并起始于小鼠胚胎发育期;SV40TAg具有明显的致癌作用,且SV40TAg诱发的神经系统肿瘤易造成转基因小鼠早期死亡。 相似文献
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核转录因子-κB是一种广泛存在的核转录因子,实验证实NF-κB的过度活化与多种疾病相关。本文综述了近年研究获得的在疾病状态下抑制NF-κB过度活化从而缓解病症的几种方法。 相似文献
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用单链和PCR相结合的方法合成绿豆胰蛋白酶抑制剂基因 总被引:2,自引:0,他引:2
本文报道用单链与PCR技术相结台的合成方法合成了胰蛋白酶抑制剂基因,包括氨基酸编码顺序、起始和终止密码子,上、下游两端的EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ限性酶识别顺序等全长共248个碱基对。合成基因的编码是参考其它植物的蛋白酶抑制剂基因的同源编码和植物基因的偏爱密码子来进行设计的。合成的基因双链经限制酶EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ在两端切出粘性末端后克隆到pUCl9中,克隆基因结构的正确性经过限制酶图谱和DNA序列分析得到完全的证明。 相似文献
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Mac-1在细胞内走向的直视研究 总被引:2,自引:1,他引:1
分别构建荧光蛋白(FP, fluorescence protein)与Mac-1的两个亚基(CD11b, CD18)融合蛋白表达载体, 并在鉴定pYFP-CD18和pCD11b-BFP共转染的CHO细胞(CHO-Mac-1-FP)表达的Mac-1-FP(Mac-1 fused with fluorescence protein)具有与正常白细胞表达的野生型Mac-1基本一致的结构与功能的基础上, 结合应用PE标记的CD11b单抗, 通过激光共聚焦显微镜观测CD11b, CD18在PMA刺激和ICAM-1结合后于胞内的走向与归宿. 结果显示: (ⅰ) 在静态的细胞膜上看不到Mac-1, PMA活化后1 h, 胞膜上可见CD11b-PE和YFP-CD18群集, 2 h后内吞, 内吞后YFP-CD18的荧光减弱, 提示Mac-1有部分降解; 24 h后PMA再次活化, 部分CD11b-PE与YFP-CD18可再次出现在膜上, 说明Mac-1还可以被循环利用. (ⅱ) ICAM-1包被磁珠与Mac-1-FP-CHO细胞作用后, 4 h内粘附增加, 同时伴有Mac-1-FP的群集, 8 h后粘附减少, 同时伴有Mac-1-FP的荧光逐渐减弱, 这一过程与PMA活化后Mac-1-FP的变化过程类似, 提示ICAM-1作用后也可能出现内吞并降解. 由以上结果可以得出结论, Mac-1活化后的走向是由胞浆内转位到质膜上, 然后内吞, 内吞后被降解或可被再利用, 与此同时粘附活性亦发生相应的变化, 提示受体介导性内吞是白细胞粘附活性降低的重要机制之一. 相似文献
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重组人胰高血糖素样肽-1的表达、纯化及其生物学活性 总被引:5,自引:0,他引:5
为获得重组人胰高血糖素样肽 1[recombinanthumanglucagon likepeptide 1(7~ 37) ,rhGLP 1]并研究其生物学活性 ,采用亚磷酸二酯法合成hGLP 1cDNA的 6个寡核苷酸片段 ,拼接成完整的hGLP 1cDNA ,构建重组质粒pGEX hGLP 1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)获得表达菌株 .高密度发酵培养的菌体超声破碎后 ,裂解液用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化得到GST融合蛋白 .经CNBr裂解、QAE SepharoseFF柱层析和脱盐 ,得到纯度大于 90 %的rhGLP 1,质谱测定分子量结果与理论值一致 .生物学活性分析表明 ,rhGLP 1具有明显的降血糖活性 . 相似文献
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毛积芳 《中国生物化学与分子生物学报》1996,12(6):633-636
利用谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferase,GST)融合基因表达系统,大鼠20α羟类固醇脱氢酶(20αHydroxysteroidDehydrogenase,20αHSD)在大肠杆菌中得以成功地表达。亲和层析和Thrombin消化,可从融合蛋白中回收和纯化重组20αHSDSDS-PAGE、Western印迹法和酶活性测定显示,重组20αHSD具有天然蛋白质相同分子量、相似的抗原性和酶催化活性,其对NADP的K_m值和V_(max)分别为9.5μmol/L、334nmo1/(min·mg),对底物20α羟孕酮(20αHydroxyprogesterone,20αOHP)的K_m值和V_(max)分别为5.9μmol/L和347nmol/(min·mg),利用该表达系统大量制备大鼠重组20αHSD,为深入研究20αHSD的生理活性和功能创造条件。 相似文献
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