cDNA阵列筛选结直肠癌化疗敏感性相关基因的初步研究

目的:筛选与结直肠癌中与化疗敏感性相关的基因,为结直肠癌化疗的个体化方案制定提供分子遗传学方面的依据.方法:收集结直肠癌新鲜组织标本,部分用于提取组织RNA和组织蛋白质,部分用于肿瘤药物敏感实验(MTT法).病理学诊断为中分化腺癌,根据药物敏感实验结果分为化疗高敏感组和化疗低敏感组,进行cDNA阵列实验比较筛选差异表达基因,Western Blot检测部分差异表达基因的表达情况.结果:通过肿瘤药物敏感实验结果得到对5-Fu+CF+L-OHP(氟脲嘧啶,亚叶酸钙,奥沙利铂)联合作用敏感的5例(高敏感组),不敏感的5例(低敏感组),cDNA阵列结果显示化疗高敏感组和低敏感组的差异表达基因其中有34个基因,其中差异表达显著的基因9个;叶酸多聚谷氨酸(FPGS)的表达在高敏感组中均高于低敏感组,HSP27在化疗低敏感组中的表达均高于高敏感组,与基因芯片中cDNA表达变化一致.结论:在结直肠腺癌化疗敏感性不同的病例中存在差异表达基因,这些基因可能成为结直肠癌化疗敏感性预测的生物标志物.     

LaminB1、NMP238表达与宫颈癌放疗敏感性的相关性研究

目的:观察LaminB1、NMP238在放疗敏感性不同宫颈癌组织中的表达及意义.方法:收集治疗前宫颈癌组织标本,病理诊断均为中分化鳞癌,在进行放疗后,根据WHO实体瘤放疗疗效判断标准,从中选择40例对放疗敏感的病例(高敏感组)和40例对放疗不敏感的病例(低敏感组),应用分子原位杂交方法检测组织中这些蛋白的表达.结果:免疫组化结果显示LaminB1,NMP238的阳性表达率在高敏感组中均低于低敏感组,LaminB1和NMP238表达具有显著相关性.结论:LaminB1、NMP238表达与宫颈癌放疗敏感性有关.     

Survivin基因RNA干扰对肺癌细胞凋亡及增殖的影响

目的:探讨Survivin表达对肺鳞癌细胞的凋亡和增殖的影响.方法:利用siRNA阻抑人肺鳞癌细胞内survivin基因的表达,用RT-PCR和Western Blotting法分析survivin基因mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞集落形成实验检测细胞增殖.结果:(1)Survivin在肺癌细胞中表达.转染Survivin siRNA可在RNA和蛋白水平阻断其表达;(2)转染Survivin siRNA的肺癌细胞凋亡率显著增加;(3)转染Survivin siRNA的肺癌细胞的集落形成率显著降低.结论:阻断Survivin表达可通过增加细胞凋亡率和降低细胞增殖增加肺鳞癌细胞的放疗敏感性.     

反相高效液相色谱法测定双唑泰软膏中三组分的含量

以C_(18) ODS色谱柱为分析柱,甲醇-水-三乙胺(体积比70:30:0.3,含庚烷磺酸钠10mmol/L,用磷酸调pH 4.0)为流动相,260 nm为检测波长,用反相高效液相色谱法测定了双唑泰软膏中甲硝唑、克霉唑和醋酸氯己定3个组分的含量。测定结果表明:甲硝唑、醋酸氯己定和克霉唑分别在3.92～39.2μg/mL,3.32～33.2μg/mL和1.64～16.4μg/mL质量浓度范围内,与峰面积呈良好的相关性(r=0.999 9、r=0.999 4和r=0.999 1),平均回收率分别为99.95%、101.14%和99.47%(n=9)。该法快速、方便,分离度好,辅料无干扰,适用于该复方制剂中3种成分的同时测定。     

细胞衰老和凋亡相关蛋白表达在宫颈鳞癌变中的意义

目的：许多细胞周期调控因子和衰老相关标志物如p14ARF、p15INK4b、p16INK4a 和p53 在G1 细胞周期阻滞和癌基因诱导的衰老中意义重大。这些关键的调节蛋白在多种恶性肿瘤中经常发生突变或是缺失。在本研究中将探讨这些因子在宫颈癌发生中的意义。方法：在本研究中在正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌中,应用免疫组织化学方法检测p14ARF、p15INK4b、p16INK4a、Bcl-2、p53 表达,并分析它们的表达与宫颈癌变的相关性。结果：p16INK4a 在正常宫颈鳞状上皮10%（2/20）表达阴性,在大部分CIN 和宫颈鳞癌中表达阳性,其中在85%（17/20）CIN 和75%（15/20）鳞癌中呈弥漫性强阳性表达,CIN 和宫颈鳞癌中的阳性表达率显著高于正常上皮（P〈0.01）,CIN 和宫颈鳞癌的间表达率无显著差异。p15INK4b 在正常宫颈鳞状上皮中65%（13/20）表达弱阳性,在100% （20/20）CIN 和95%（19/20）宫颈鳞癌中表达弥漫性阳性,各组之间阳性表达率无显著性差异（P〉0.05）。p14ARF在40%（8/20）正常宫颈上皮细胞中表达呈弱阳性（1＋）,在宫颈鳞癌中表达呈弥漫性强阳性90%（18/20）,在45%（9/20）CIN中表达阳性,各组之间阳性表达率无显著性差异（P〉0.05）。Bcl-2 在20%（4/20）正常宫颈上皮表达呈弱阳性,在18/20CIN中其表达强度和比率均增加,阳性表达率为90%（18/20）,Bcl-2 在鳞癌中700%（14/20）呈强阳性和弥漫阳性,CIN 和宫颈鳞癌中的阳性表达率显著高于正常上皮（P〈0.01）,CIN 和宫颈鳞癌的间表达率无显著差异。P53 免疫组化染色显示在正常宫颈上皮为表达为20%（4/20）,在大多数CIN25%（5/20）和鳞癌中核阳性85%（17/20）,在鳞癌中的阳性表达率显著高于正常宫颈上皮和CIN 病变（P〈0.05）。结论：宫颈鳞癌变涉及包括细胞凋亡和细胞衰老在内的多种信号分子表达异常,这些分子可能在宫颈鳞癌发生发挥重要作用并在宫颈癌早期诊断中有重要意义。     

B超引导下甲状腺肿块细针穿刺细胞学诊断的临床病理分析

目的：比较B超引导下细针吸取穿刺和传统细针吸取穿刺在甲状腺肿块性质确定中意义。方法：使用B超引导下细针吸取穿刺（UG-FNAB）和传统细针吸取穿刺技术（C-FNAB）对225例甲状腺肿块进行穿刺活检,然后进行涂片,染色,镜检,结合临床作出细胞学诊断,并与组织切片诊断对照,比较两种方法的确诊率。结果：在UG—FNAB检测病例中59.3％的结节位于甲状腺右叶,40．7％肿块位于左叶和峡部。87％的患者甲状腺机能正常,结节最长径平均为2．8±1．1cm,部分病例符合甲状腺恶性肿瘤的超声影像学改变。在本研究中诊断为甲状腺乳头状癌的病例细胞学和组织学特点均符合甲状腺癌形态学特点。在225例研究病例中,总确诊率为72．89％（164／225）,其中UG-FNAB组确诊率为90．58％（77／85）,C-FNAB组确诊率为62．14％（87／140）,两组确诊率比较有显著性差异（P〈0．05）。结论：本组研究数据显示比较C—FNAB,UG—FNAB在诊断甲状腺复杂性结节中具有更高的确诊率,特别是在C—FNAB方法不能得出明确诊断时。     

同时放化疗敏感性不同宫颈癌组织的二维电泳图谱建立及质谱分析

目的:分析同时放化疗后高敏感和低敏感中晚期宫颈癌组织之间蛋白质组的差异,为确定宫颈癌同时放化疗敏感性相关蛋白提供依据。方法:收集治疗前的中晚期宫颈癌活检组织标本,均为中分化鳞癌,置于—80℃超低温冰箱保存。同时放化疗后,根据WHO实体瘤疗效判断标准,将收集的10例宫颈癌组织标本分为高敏感组(5例)和低敏感组(5例);提取组织总蛋白,进行双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)得到凝胶图谱,采用PD-quest 7.0软件进行匹配和差异分析,识别两组之间表达差异蛋白点。将部分差异蛋白点进行胶内原位酶解后进行MALDI-TOF-MS分析,获取肽质量指纹图,数据库搜索鉴定蛋白质。结果:建立了分辨率高,重复性好的同时放化疗后宫颈癌组织高敏感组和低敏感组的双向凝胶电泳图谱。高敏感组蛋白点数为781±74个,低敏感组蛋白点数为766±52个,组间平均匹配率为87.6%。质谱分析成功鉴定15个差异表达蛋白,其中7个蛋白质在高敏感组高表达,8个蛋白质在高敏感组低表达。结论:蛋白质2-DE图谱和质谱鉴定结果说明同时放化疗后高敏感组和低敏感组宫颈癌组织间存在蛋白质表达的差异,这些蛋白质可能与同时放化疗敏感性有关。     

大B细胞性淋巴瘤化疗敏感性相关蛋白类型及信号通路的生物信息学研究

目的:筛选化疗敏感性不同大B细胞淋巴瘤中差异表达蛋白,并分析其类型和相关信号通路,为淋巴瘤化疗敏感性的研究提供重要的靶蛋白。方法:通过肿瘤药物敏感试验选取化疗高敏感性和低敏感性大B细胞淋巴瘤组织,进行蛋白质组学比较研究后得出差异表达蛋白;应用GO-分析软件对差异表达蛋白进行分类和关系分析。结果:将大B细胞淋巴瘤化疗高敏感组和化疗低敏感组蛋白质经二维凝胶电泳分离的差异表达蛋白通过质谱和生物信息学分析鉴定的蛋白点52个,按生化过程分为12种蛋白,其中与代谢过程有关的蛋白最多,其次是细胞过程蛋白;按信号通路分为20余条信号通路包括凋亡信号通路、细胞周期相关通路等。按分子功能分为9类蛋白,其中结合相关蛋白最多,其次是催化活性蛋白,第三为结构蛋白。按蛋白功能分为钙结合蛋白、水解酶、氧化还原酶、磷酸酶等。按细胞内定位分为细胞外区、细胞内、核糖核蛋白复合体三类蛋白,其中细胞内蛋白数量最多,其次是核糖核蛋白复合体。根据信号通路网络图,所有差异表达蛋白以三个复杂网络区为主和四个较为简单联系网络区。结论:大B细胞性淋巴瘤的化疗敏感性与多种蛋白功能和多条信号通路的改变有关,信号通路间也存在复杂的联系。     

AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在大肠癌中的表达及其临床意义

目的：探讨AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在大肠癌中的表达及其临床意义。方法：用免疫组化SP法分别检测AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在60例大肠癌组织中的表达。结果：（1）AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在大肠癌组织中的阳性表达率分别为65％（39／60）和60％（36／60）;（2）AnnexinⅡ和AnnexinⅣ阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期比较,差异具有显著性（P〈0．05）：（3）大肠癌组织中AnnexinⅡ和AnnexinⅣ的表达一致率为68．33％（41／60）,存在显著相关性（P〈0．01）;（4）大肠癌不同临床时期（Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ）AnnexinⅡ和AnnexinⅣ阳性表达比较,差异具有显著性（P〈0．01）。结论：AnrlexinⅡ和AnnexinⅣ与大肠癌的临床分期和预后有关。     

中药及中药制剂中微量元素铜、铬的含量测定

应用火焰原子吸收光度法(FAAS)对苦参、黄柏及黄柏胶囊中微量元素铜、铬的含量进行了测定,并对FAAS若干条件进行了优化选择。结果表明,该法的平均回收率在95.2%～104.8%之间,相对标准偏差在1.76%以下,结果可靠,方法简便,可用于实际样品的测定。