蛋白酶的研究和应用

蛋白酶是水解蛋白质的一群酶类。它是生命活动中不可缺少的水解酶之一,在工、农、医等方面有着重要的应用。远在三千年前人们对酶的本质还没有了解时,我们的祖先就已经把它用于制酱等的技术中。1908年德国人Rhm(雷姆)开始利用胰酶制剂进行鞣制皮革等。1930年Northrop制     

枯草芽孢杆菌中性内切β-甘露聚糖酶的纯化及性质

三草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＭ９６０２产生的中性内切β－甘露聚糖酶（ｅｎｄｏ－β－１,４－Ｄ－ｍａｎｎａｎ ｍａｎｎａｎｏｈｙｄｒｏｌａｅｓ,ＥＣ,３．２．１．７８）经硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ２２）离子交换柱层析,得到电泳纯的样品,提纯了４５．５倍,收率为５．９％。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得该酶的分子量为３５ｋＤ。用ＰＡＧＥＩＥＦ测得其等电点ｐⅠ为４．５。酶反应的     

云南哀牢山徐家坝常绿阔叶林的鸟类取食集团

2006年3-4月,采用无距离估计样线法对云南哀牢山徐家坝中山湿性常绿阔叶林中的鸟类群落做了直接观察,观察到鸟类取食行为14 345次只.运片j聚类分析,依据鸟类的栖息取食行为格局将62种鸟划分为11个取食集团:(G1)地面拾取集团、(G2)地面扒取集团、(G3)树冠层飞取/拾取集团、(G4)树冠层飞取集团、(G5)树干层探取集团、(G6)灌层竹秆探取集团、(G7)树干粗枝搜寻集团、(G8)树冠层粗枝搜寻集团、(G9)树冠层拾取集团、(G10)灌丛下层叶层/树干/地面拾取集团、(G11)灌层拾取集团.结果表明,由于各个集团在栖息基层、取食基层及取食方式上的分离,使各集团分割了该地区的取食空间和食物资源;而集团内部的各个种间主要通过对取食高度的划分,使得集团内部的取食空『白j和食物资源得到了更深层次的利用,使种间竞争减至最小.其结果还表明,鸟类取食集团的数量和结构因不同的植被类型而异,顶级群落中包含的鸟类种类更多,各个种间的生态位分化也更为细致.     

巨大芽孢杆菌BP931胞外青霉素G酰化酶的产生条件

研究了巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)BP 931胞外青霉素G酰化酶的产生条件。菌在由葡萄糖0.7％,氮源1号0.5％,酵母膏1.0％和苯乙酸0.8％组成的液体培养基(灭菌前pH9.0,灭菌后pH8.0)中,28℃振荡培养44h。以6-硝基-3-苯乙酰胺基苯甲酸为底物,培养滤液酶活力为9.0IU/ml。诱导物苯乙酸于培养6h后加入,酶活力可以提高到11.0IU/ml。Ca²⁺、Al³⁺、Sn³⁺、Mn²⁺和Fe²⁺离子降低酶的形成;Cu⁺和C0²⁺离子显著抑制菌生长,降低酶的形成;Zn²⁺,Cd²⁺和Hg²⁺离子完全抑制菌生长和酶形成。     

尖镰孢青霉素V酰化酶的纯化及性质

通过硫酸铵沉淀、硅藻土吸附、DEAD-纤维素离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤,由尖镰孢(Fusarium oxysporum)FP941培养滤液中得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的青霉素V酰化酶。酶作用最适pH为7.0,最适温度为50℃。酶在pH6.0—8.0和42℃以下稳定。酶作用青霉素V的米氏常数Km为4.65×10~(-3)mol/L;苯氧乙酸是酶的竞争性抑制剂,抑制常数Ki为23.87×10~(-3)mol/L;6-氨基青霉烷酸是酶的非竞争性抑制剂,抑制常数Ki为30.01×10~(-3)mol/L。某些金属离子对酶有抑制作用,Fe~(2+)最强,其次是Hg~(2+)和Cu~(2+)。用SDS凝胶电泳测定酶亚基分子量为77600;用分子筛测定自然酶分子量为148000。     

特异腐质霉纤维素酶的研究

由腐植土中分离到一株嗜热真菌,经鉴定为特异腐质霉(Humicola insolens Cooney etEmerson)。研究了这株菌纤维素酶的产生条件和一般性质。菌在含麦麸5％、NaNO0.3％的液体培养基(灭菌前pH7.5,灭菌后pH7.2)中,于45℃培养4天,以羧甲基纤维素钠为底物,每ml滤液酶活力为20个单位。酶作用的最适条件为:pH6.0,温度为65—70℃。该纤维素酶是一种耐热酶,热稳定性较强,70℃保温5分钟后,酶活力剩余88％。底物对该酶的热钝化有较强的保护作用,无底物存在条件下,70℃保温6小时后,酶活力仅剩余1％,而在同样的处理温度和时间,在有底物存在条件下,酶活力可剩余30％。该酶在45℃保温15小时的条件下,pH稳定范围为6.0—9.0。     

药用中性蛋白酶的研究

枯草杆菌(Baceillus subtilis) AS 1.398中性蛋白酶的粗酶(5万u／g),用自来水(1：10)抽提12小时,在这抽提液中加入20％(v／v)CaCl2溶液(在100ml水中加60g无水CaCl2)：再加25％固体硫酸铵使酶沉淀,过滤后得酶饼,用0．005MpH7．2磷酸缓冲液溶解,经Sephadex G-25柱脱盐,冷冻干燥得片状粉末,含酶活60一100万u/g,纯度提高4倍,本制剂具有较强的抗炎消肿及溶解纤维蛋白的作用。     

特异腐质霉中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因的克隆及表达

利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉（Humicola insolerts）H31-3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因egl2的cDNA,将其插入到表达载体pGAPZαA中,重组质粒经线性化,电击转化毕赤酵母（Pichia pastoris）菌株GS115,筛选到分泌表达重组EGⅡ的毕赤酵母工程菌株。SDS-PAGE检测结果表明,重组EGⅡ在酵母中得到了特异性表达,表达产物的表观分子量约为55kD,同时对工程菌株的发酵条件和重组EGⅡ的性质进行了初步研究。     

特异腐质霉中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因的克隆及表达*

利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicolainsolens)H31-3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因egl2的cDNA,将其插入到表达载体pGAPZαA中,重组质粒经线性化,电击转化毕赤酵母(Pichiapastoris)菌株GS115,筛选到分泌表达重组EGⅡ的毕赤酵母工程菌株。SDS-PAGE检测结果表明,重组EGⅡ在酵母中得到了特异性表达,表达产物的表观分子量约为55kD,同时对工程菌株的发酵条件和重组EGⅡ的性质进行了初步研究。     

产β-葡聚糖酶菌种T199的选育及发酵条件

A mutant strain T199 producing about 8 times as much β-glucanase as its parent strain trichoderma kningii T3 was obtained by treatment with ultraviolet light and N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine.Fermentation was conducted in 250mL flask,each containing 30mL of medium consisted of 5% corn cob powder,3% wheat bran and 1.4% nitrogen source No.10 ((NH 4) 2SO 4 10%,Peptone 20%,Yeast extract 15%).The optima culture conditions were as below:initial pH5.0,30℃,shaking speed 280r/min,and cultivation time 5d.En…