人白细胞介素2受体β(IL-2RB)基因真核表达及与JAK1的相互作用的检测北大核心

[目的]构建含人白介素2受体β(IL-2RB)基因的真核表达质粒p ENTER-IL-2RB-His,并在293T中进行真核表达,并用免疫共沉淀检测JAK1与IL-2RB在细胞内的相互作用。[方法]在Hela细胞中提取人总RNA,通过RT-PCR获得人IL-2RB的基因全长,并将其克隆至真核表达载体p ENTER-His中。经PCR克隆,双酶切、测序鉴定后,将重组质粒p ENTER-IL-2RB-His转染至293T细胞中。免疫印迹法检测不同时间点的IL2RΒ蛋白(24 h、36 h、48 h)在293T细胞中的表达,用免疫共沉淀检测JAK1和IL-2RB蛋白之间的相互作用。[结果]经PCR克隆、双酶切、测序鉴定质粒克隆正确。免疫印迹可见61 k Da的目的蛋白。共同转染JAK1和IL-2RB的质粒,免疫印迹可见分别为133 k Da和61 k Da的目的条带。[结论]成功获得IL-2RB基因全长,成功构建p ENTER-IL-2RB-His真核表达质粒,并在293T细胞中成功表达,随着时间的推移其表达量增高。免疫共沉淀可以检测到JAK1和IL-2RB两者的蛋白相互作用,这为下一步研究JAK1和IL-2RB这一对蛋白的相互作用的作用方式及作用机制奠定了基础。     

单碱基编辑技术的原理、发展及其在家畜育种中的应用

基因编辑技术CRISPR/Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein)在家畜育种领域得到广泛应用,但其效率低下,且存在非靶向切割、安全性较低等问题,极大地限制了家畜育种中单碱基突变的引入。单碱基编辑(single base editing)作为一种最新的基因编辑工具,能够在不导入双链断裂的情况下直接进行碱基的替换,具有编辑效率高和特异性强的特性,为家畜育种的精确基因修饰提供了一种更简单、更有效的方法。本文主要介绍了单碱基编辑系统的原理及发展进程和碱基编辑技术在家畜育种中的应用,以期为单碱基编辑器在家畜育种中进一步优化和选择应用提供参考。     

小鼠胎肝基质细胞体外扩增骨髓来源的LTC-IC

基质细胞是胎肝造血微环境的主要成分,参与造血干/祖细胞的自我更新、增殖分化的调控。为了研究小鼠胎肝基质细胞在造血微环境中的功能,采用转染SV40大T抗原基因的方法建立了小鼠胚胎期第12.5天（Embryonic-day 12.5, E12.5d）胎肝基质细胞系A4、B3,并进一步鉴定基质细胞系的一般细胞生物学特性和造血支持功能。结果：A4、B3为细胞形态、生长行为以及表面分子表达不同细胞系,二者均可维持骨髓源长期培养启动细胞（Longterm cultureinitiating cell,LTC-IC）至少4周并且有不同程度的扩增LTC-IC能力,其中B3扩增LTC-IC的能力是A4的83倍。外源性细胞因子组合SCF+IL-3+IL6+Epo在本实验体系中不影响LTC-IC数量的维持和扩增。暗示E12.5d胎肝造血微环境中基质细胞的功能是不同的,其机制有待进一步研究。     

Expansion of CD34~+ cells from human umbilical cord blood by FL and/or TPO gene transfected human marrow stromal cell lines

To elucidate the effect of gene transfected marrow stromal cell on expansion of human cord blood CD34+ cells, a culture system was established in which FL and TPO genes were transfected into human stromal cell line HFCL. To establish gene transfected stromal cells co-culture system, cord blood CD34+ cells were purified by using a magnetic beads sorting system. The number of all cells and the number of CD34+ cells and CFC (CFU-GM and BFU-E) were counted in different culture systems. The results showed that in all 8 culture systems, SCF+IL-3+HFT manifested the most potent combination, with the number of total nucleated cells increasing by (893.3±52.1)-fold, total progenitor cells (CFC) by (74.5±5.2)-fold and CD34+ cells by 15.7-fold. Maximal expansions of CFC and CD34+ cells were observed at the end of the second week of culture. Within 14 days of culture, (78.1±5.5)-fold and (57.0±19.7)-fold increases in CFU-GM and BFU-E were obtained. Moreover, generation of LTC-IC from amplified CD34+ cells within 2     

响应面法优化干花豆总黄酮提取工艺研究

干花豆( Fordia cauliflora)的主要有效成分为黄酮类、生物碱、有机酸等,具有益智、抗衰老、抗炎等作用。目前的研究主要集中在化学成分及药理活性等方面,对总黄酮成分提取工艺优化报道较少。该研究以新鲜干花豆为材料,以总黄酮提取量为评价指标,在提取温度、料液比、乙醇浓度和提取时间单因素实验基础上,采用响应面法优化了干花豆总黄酮提取工艺,同时测定了总黄酮对1,1-二苯基苦基苯肼自由基( DPPH.)和羟基自由基(.OH)清除能力。结果表明：干花豆总黄酮提取最佳工艺条件为提取温度78℃、料液比为1∶30(g.mL-1)、乙醇浓度71％和提取时间为187 min。在此条件下,总黄酮得率预测值为10.61 mg.g-1,实际为10.53 mg.g-1,理论值与预测值的相对误差为0.76％;干花豆总黄酮对DPPH和OH自由基清除能力IC50值分别为14.09和78.43μg.mL-1,弱于Vc(8.11和67.95μg.mL-1)。该提取工艺稳定合理,准确可靠,是提取干花豆总黄酮的可行方法。该研究结果为干花豆中总黄酮成分的进一步开发利用奠定了基础。     

沱江宽体华鳅的年龄与生长

2010年4~11月,在沱江的资中-隆昌段采集宽体华鳅(Sinibotia reevesae)573尾,研究了其年龄结构和生长特性。结果表明,微耳石厚度适中,易于磨片,且磨片后轮纹清晰,能准确反映宽体华鳅的年龄情况。收集到的沱江宽体华鳅体长主要分布在80~100 mm,占总数的67.54%;体重主要分布在8~20 g,占总数的69.11%;年龄由2~6龄组成,以3~4龄为主,占85.91%;种群雌雄性比为1︰1.11。体长(L,单位mm)和体重(W,单位g)关系,雌雄群体间无明显差异(P0.05),其表达式为W=5×10﹣6L3.286 8(n=573,R2=0.820 2),为近等速生长类型。von Bertalanffy生长方程为Lt=128.72[1﹣e﹣0.197 4(t+1.66)]和Wt=42.95[1﹣e﹣0.197 4(t+1.66)]3.286 8。体长生长速度和加速度方程为d L/dt=25.413 3 e﹣0.197 4(t+1.66)和d2L/dt 2=﹣5.015 8 e﹣0.197 4(t+1.66),体重生长速度和加速度方程为d W/dt=27.866 6 e﹣0.197 4(t+1.66)[1﹣e﹣0.197 4(t+1.66)]2.286 8和d2W/dt2=5.500 9 e﹣0.197 4(t+1.66)[1﹣e﹣0.197 4(t+1.66)]1.286 8×[3.286 8 e﹣0.197 4(t+1.66)﹣1]。生长拐点年龄为4.37,此时的体长和体重分别为89.46 mm和12.99 g。分析显示,沱江资中-隆昌段宽体华鳅自然种群资源未遭到严重破坏,但合理开发水电资源和选择合适的渔具、渔法是进行其资源保护的最有效措施。     

3 例以延髓麻痹为首发表现的肌萎缩侧索硬化的病例报告

目的:探讨以延髓麻痹为首发症状的肌萎缩侧索硬化的临床特点。方法:报告3例以构音障碍等延髓麻痹症状起病的肌萎缩侧索硬化少见病例,结合文献复习,分析其临床特点。结果:在ALS患者中,以延髓麻痹为首发症状发生率相对较低,多见于老年人,最易表现为构音障碍,患者的生存期缩短,预后不良。结论:对于以延髓麻痹表现起病的ALS患者,要引起重视,及时针对延髓麻痹对症治疗,改善患者生活质量。     

低温保鲜的双孢蘑菇硬度与生理特性变化

研究双孢蘑菇Agaricus bisporus在4 ℃环境下贮藏3、6、10、14 d后生理品质的变化情况。结果表明,在4 ℃低温保鲜环境下双孢蘑菇的硬度下降较慢,延缓了可溶性蛋白质和POD、SOD、CAT等酶的降解,V?含量在第3天迅速下降后,一直保持稳定的水平,MDA含量在贮藏第10天才迅速上升。说明低温保鲜对双孢蘑菇贮藏过程中的品质保持具有积极的正向作用,可延长双孢蘑菇的货架期。     

沱江宽体华鳅繁殖特性

对2010年4~11月采集于沱江资中段的573尾宽体华鳅（Sinibotia reevesae）进行了繁殖特性研究。结果表明：宽体华鳅性腺发育分为6期,5月卵巢发育到Ⅳ期,精巢发育到Ⅴ期。繁殖期在5~8月,盛期为6~7月,可通过胸鳍和生殖孔差异辨别性别。繁殖群体雌雄性比为1︰1.15,2~3龄性成熟,性成熟最小年龄两性均为2龄,为补充群体占优势的繁殖群体。雄性（Ⅴ期）最小性成熟个体体长71 mm,体重5.43 g,成熟系数4.76%,雌性（Ⅲ期）最小性成熟个体体长76 mm,体重7.80 g,成熟系数1.46%。成熟卵巢中卵子大小基本一致,卵径分布为单峰型,属于单次产卵类型;繁殖群体体长76~120 mm,体重7.80~41.60 g;卵小,沉性,野生条件下胚胎发育需要流速较快的流水环境。     

反义RNA调节肿瘤细胞O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶活性

报道了逆转录病毒载体介导的反义ＲＮＡ对肿瘤细胞Ｏ６－甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ甲基转移酶（ＭＧＭＴ）活性的调节作用．构建了三个表达ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ的逆转录病毒载体并用它们转染ＨｅＬａＳ３肿瘤细胞,观察细胞在转染前后ＭＧＭＴｍＲＮＡ水平、ＭＧＭＴ活性及其对ＡＣＮＵ抗药性的变化．发现针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ５’端的反义ＲＮＡ能够有效地降低ＭＧＭＴｍＲＮＡ水平和ＭＧＭＴ活性并使细胞对ＡＣＮＵ的敏感性提高４．６倍;针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ全长的反义ＲＮＡ也能在一定程度上调节细胞的ＭＧＭＴｍＲＮＡ水平和ＭＧＭＴ活性并增加细胞对ＡＣＮＵ的敏感性,而针对３’端序列的反义ＲＮＡ对ＭＧＭＴ活性没有调节作用．